滴通鼻炎噴涂凝膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

呂敏王云王玉霞孫靜瑩王婷周霞萬軍

（西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都610031）

滴通鼻炎噴涂凝膠劑由蒲公英、細(xì)辛、黃芩、麻黃、蒼耳子、石菖蒲、白芷、辛夷8 味藥組成，是在滴通鼻炎水基礎(chǔ)上改劑型而成，主要治療傷風(fēng)鼻塞、鼻窒、鼻鼽、鼻淵等癥［1］。 原劑型收載于《部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》中，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)薄層鑒別項(xiàng)只有白芷，尚無含量測定項(xiàng)。 為了更好控制滴通鼻炎噴涂凝膠劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究增加了蒲公英、黃芩、麻黃、石菖蒲的薄層鑒別方法；采用HPLC 法測定鹽酸麻黃堿與黃芩苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

安捷倫1260 液相色譜儀（美國安捷倫有限公司）；PWC-124 電子分析天平分析天平（艾德姆衡器武漢有限公司，d＝0.000 1 g）；KH19A 離心機(jī)（湖南凱達(dá)離心機(jī)廠）；SB-25-12D 超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技有限公司）。

蒲公英對照藥材（批號：121195-201503）、黃芩對照藥材（批號：120955-201309）、麻黃對照藥材（批號：121051-201606）、 石 菖 蒲 對 照 藥 材（批 號：121098-201105）、白芷對照藥材（批號：120945-201309）均購自中國食品藥品檢定研究院；咖啡酸對照品（批號：MUST-17032010，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.48%）、黃芩苷對照品（批號：MUST-18010410，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.58%）、鹽酸麻黃堿對照品（批號： 171241-201508，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%）、歐前胡素對照品（批號：MUST-17030311，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.27%）、異歐前胡素對照品（批號：MUST-17030420，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.93%）均購自成都曼斯特生物科技有限公司。

硅膠G（青島海浪硅膠干燥劑有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純（成都科龍化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

滴通鼻炎噴涂凝膠劑為自制（批號：180309、180310、180311）。 制備方法：分別取蒲公英、黃芩、白芷、蒼耳子、細(xì)辛、石菖蒲、辛夷、麻黃各120、60、25、50、5、60、25、50 g，加10 倍量水，水蒸氣蒸餾，收集餾出液約200 mL，備用。 藥渣與蒲公英、黃芩加20 倍量水煎煮2 次，每次1.5 h。 合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀（密度1.10 ～1.35 g／mL），加乙醇4倍量，攪勻，靜置過夜。 取上清液回收乙醇，加入白芷等蒸餾液，加入200 g 泊洛沙姆407、30 g 泊洛沙姆188、50 mL 甘油，2 g 苯甲酸鈉，pH 調(diào)至5.5～6.5，加水至1 000 mL，分裝，即得。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 蒲公英的薄層鑒別取咖啡酸對照品適量，用甲醇制成0.5 mg／mL 的對照品溶液。 取滴通鼻炎噴涂凝膠劑10 mL，加5%（體積分?jǐn)?shù)，下同）甲酸-甲醇溶液20 mL，超聲20 min，濾過，蒸干。 殘?jiān)铀?0 mL溶解，乙酸乙酯萃取2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯萃取液，蒸干。 殘?jiān)? mL 甲醇溶解，即為供試品溶液［2］。 取蒲公英對照藥材1 g 和不含蒲公英藥材的陰性樣品10 mL，同法制成對照藥材溶液和陰性對照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為乙酸丁酯-甲酸-水（體積比7 ∶2.5 ∶2.5）的上層溶液。 展開、取出、晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視［2］。 供試品溶液在與對照品、對照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖1。

圖1 蒲公英鑒定的TLC 色譜圖Figure 1 TLC Chromatogram of Dandelion

2.1.2 黃芩的薄層鑒別取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成1 mg／mL 的對照品溶液。 取滴通鼻炎噴涂凝膠劑10 mL，加入乙酸乙酯-甲醇（體積比3 ∶1）溶液30 mL，加熱回流30 min，冷卻，過濾，蒸干。殘?jiān)蛹状? mL 溶解，即為供試品溶液。分別取黃芩對照藥材2 g 和不含黃芩的陰性樣品10 mL，分別同法制成對照藥材溶液和陰性對照溶液。吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（體積比5 ∶3 ∶1 ∶1）。展開、取出、晾干，噴以1%FeCl3乙醇溶液［3］。供試品溶液在與對照品、對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖2。

圖2 黃芩鑒定的TLC 色譜圖Figure 2 TLC Chromatogram of Scute-llaria baicalensis

2.1.3 麻黃的薄層鑒別取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成1 mg／mL 的對照品溶液。取滴通鼻炎噴涂凝膠劑10 mL，加入濃氨試液1 mL，加三氯甲烷30 mL，加熱回流1 h，過濾，蒸干。殘?jiān)尤爰状? mL溶解，即為供試品溶液。取麻黃對照藥材1 g 和缺麻黃陰性樣品10 mL，分別同法制備對照藥材溶液和陰性對照溶液。吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（體積比20 ∶5 ∶0.5）。 展開、取出、晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰［4］。 供試品溶液在與對照品、對照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖3。

圖3 麻黃鑒定的TLC 色譜圖Figure 3 TLC Chromatogram of Ephedra

2.1.4 石菖蒲的薄層鑒別取滴通鼻炎噴涂凝膠劑溶液10 mL，加石油醚（60 ～90 ℃）30 mL，加熱回流1 h，放冷，分取石油醚液，蒸干。 殘?jiān)邮兔? mL溶解，即為供試品溶液。 取石菖蒲對照藥材0.2 g和不含石菖蒲的陰性樣品，同法制備對照藥材溶液和陰性對照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（體積比4 ∶1）。 展開、取出、晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。 供試品溶液在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖4。

2.1.5 白芷的薄層鑒別分別取歐前胡素對照品、異歐前胡素對照品適量，加乙酸乙酯制成歐前胡素對照品、異歐前胡素質(zhì)量濃度分別為1 mg／mL 的混合對照品溶液。 取滴通鼻炎噴涂凝膠劑10 mL，加乙醚30 mL，浸泡1 h，時(shí)時(shí)振搖，過濾，蒸干。 殘?jiān)右宜嵋阴 mL 溶解，即為供試品溶液。 取白芷對照藥材0.5 g 和缺白芷的陰性樣品10 mL，同法制備對照藥材溶液和陰性對照溶液。 吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為石油醚（30～60 ℃）-乙醚（體積比3 ∶2）。 展開、取出、晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視［5］。 供試品溶液在與對照品、對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖5。

圖4 石菖蒲鑒定的TLC 色譜圖Figure 4 TLC Chromatogram of Acorus tatarinowii

圖5 白芷鑒定的TLC 色譜圖Figure 5 TLC Chromatogram of Angelica dahurica

2.2 黃芩苷質(zhì)量濃度的測定

2.2.1 對照品溶液的制備取黃芩苷對照品20.0 mg，精密稱定。 加甲醇制成每1 mL 含黃芩苷64 μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備精密量取滴通鼻炎噴涂凝膠劑5.0 mL，至50 mL 容量瓶中，加入甲醇30 mL，超聲提取30 min，冷卻，定容，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備取缺黃芩的陰性樣品5.0 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2.4 色譜條件與專屬性試驗(yàn)色譜柱：AlltimaTMC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-1%乙酸（體積比50 ∶50），柱溫：30 ℃，檢測波長：278 nm，進(jìn)樣量：10 μL，流速：1 mL／min。 分別精密吸取黃芩苷對照品、供試品、黃芩陰性對照溶液10 μL，依法測定，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000；陰性對照無干擾。 見圖6。

圖6 黃芩專屬性試驗(yàn)的HPLC 色譜圖Figure 6 HPLC Chromatograms of scutellaria specific test

2.2.5 方法學(xué)考察

2.2.5.1 線性范圍考察取質(zhì)量濃度為65.28 μg／mL

的黃芩苷對照品溶液，分別精密吸取1、2、4、8、16 μL進(jìn)樣。 按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，測定峰面積，以黃芩苷進(jìn)樣量X1對峰面積Y1進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y1＝3．175 1×103X1＋7．762 5（r1＝1），黃芩苷在0.065 28 ～1.044 48 μg 呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5.2 精密度試驗(yàn)精密吸取質(zhì)量濃度65.28 μg／mL 的黃芩苷對照品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，經(jīng)計(jì)算其RSD 為1.55%，表明該儀器精密度良好。

2.2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取滴通鼻炎噴涂凝膠劑（批號：180310）供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、8、16 h 進(jìn)樣，測定峰面積。 計(jì)算得黃芩苷的RSD 值為1.20%，表明供試品溶液在16 h 內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

2.2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)精密量取滴通鼻炎噴涂凝膠劑（批號：180310）6 份，每份5.0 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件測定，測得黃芩苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.199 02 mg／mL，RSD 值為1.61%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.5.5 加樣回收率試驗(yàn)取滴通鼻炎噴涂凝膠（批號為180310，黃芩苷質(zhì)量濃度為198.6 μg／mL）6份，各2.5 mL，分別置于6 個(gè)50 mL 容量瓶中，分別加入質(zhì)量濃度65.28 μg／mL 的對照品溶液7.6 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積，按回歸方程計(jì)算得平均回收率為101.13%，RSD 值為2.06%，表明本方法加樣回收率良好，見表1。

表1 滴通鼻炎噴涂凝膠劑中黃芩苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Results of recoveries of baicalin in Ditong Biyan spray gel （n＝6）

2.2.6 樣品質(zhì)量濃度的測定分別取3 批滴通鼻炎噴涂凝膠劑適量，精密稱定，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。 分別精密吸取對照品、供試品溶液各10 μL，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 測得3 批樣品中黃芩苷平均質(zhì)量濃度分別為197.4、198.6、198.7 μg／mL（n＝2）。

2.3 鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度的測定

2.3.1 對照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對照品20.0 mg，精密稱定。 加甲醇制成每1 mL 含鹽酸麻黃堿40 μg 的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備精密量取滴通鼻炎噴涂凝膠劑5.0 mL，至50 mL 容量瓶中，加入甲醇30 mL，超聲15 min，冷卻，定容，即得。

2.3.3 陰性對照溶液的制備取缺麻黃的陰性樣品5.0 mL，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3.4 色譜條件與專屬性試驗(yàn)色譜柱：AlltimaTMC18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-0.1%H3PO4（體積比5 ∶95），柱溫：35 ℃，檢測波長：210 nm，進(jìn)樣量：10 μL，流速：1 mL／min。 分別精密吸取鹽酸麻黃堿對照品、供試品、麻黃陰性樣品溶液10 μL，依法測定，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000；陰性對照無干擾。 見圖7。

2.3.5 方法學(xué)考察

2.3.5.1 線性范圍考察取質(zhì)量濃度42.2 μg／mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液，分別精密吸取1、2、4、8、16 μL 進(jìn)樣，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，測定峰面積。 以鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量（X2）對峰面積（Y2）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y2＝1．612 7×103X2＋1．262 5，r2＝0.999 9，鹽酸麻黃堿在0.042 2～0.675 2 μg呈良好的線性關(guān)系。

圖7 麻黃專屬性試驗(yàn)的HPLC 色譜圖Figure 7 HPLC chromatograms of Ephedra specific test

1.鹽酸麻黃堿； A.對照品溶液； B.供試品溶液； C.麻黃陰性對照溶液。

2.3.5.2 精密度試驗(yàn)精密吸取質(zhì)量濃度42.2 μg／mL的鹽酸麻黃堿對照品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次測定峰面積，經(jīng)計(jì)算其RSD 為1.15%，表明該儀器精密度良好。

2.3.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取滴通鼻炎噴涂凝膠劑（批號：180310）供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、8、16 h 進(jìn)樣，測定峰面積。 計(jì)算得鹽酸麻黃堿的RSD 值為1.98%，表明供試品溶液在16 h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

2.3.5.4 重復(fù)性試驗(yàn)精密量取滴通鼻炎噴涂凝膠劑（批號：180310）6 份，每份5.0 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件測定，測得鹽酸麻黃堿平均質(zhì)量濃度為0.112 5 mg／mL，RSD 值為2.44%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5.5 加樣回收率試驗(yàn)取滴通鼻炎噴涂凝膠（批號為180310，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度為113.4 μg／mL）6 份，各2.5 mL，分別置于6 個(gè)50 mL 容量瓶中，分別加入鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度為42.2 μg／mL 的對照品溶液6.6 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件測定鹽酸麻黃堿峰面積。 根據(jù)回歸方程計(jì)算得平均回收率為97.74%，RSD值為2.85%，表明本方法加樣回收率良好，見表2。

表2 滴通鼻炎噴涂凝膠劑中鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of recoveries of ephedrine hydrochloride in Ditong Biyan spray gel

2.3.6 樣品質(zhì)量濃度的測定分別取3 批滴通鼻炎凝膠適量，精密稱定，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。 分別精密吸取對照品、供試品溶液各10 μL，按“2.2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 測得3 批樣品中鹽酸麻黃堿平均質(zhì)量濃度分別為113.5、113.4、114.4 μg／mL（n＝2）。

3 討論

3.1 劑型選擇

原劑型滴通鼻炎水給藥次數(shù)多、滯留時(shí)間短，為了提高藥物利用度，在此基礎(chǔ)上改為滴通鼻炎噴涂凝膠劑。 噴涂凝膠劑為溫敏凝膠，在非生理?xiàng)l件下為液體，使用方便快捷，給藥后在給藥部位形成凝膠，增加藥物在鼻腔滯留時(shí)間，降低給藥次數(shù)，延長給藥時(shí)間間隔，從而提高生物利用度。

3.2 薄層鑒別

原劑型在部頒標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制中只是用薄層色譜法做了白芷的定性鑒別，尚無質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定的控制方法，為更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證療效，本研究建立了滴通鼻炎噴涂凝膠處方中蒲公英、黃芩、麻黃、石菖蒲和白芷5 味藥的薄層色譜鑒別方法，結(jié)果陰性無干擾，擬納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，蒼耳子的薄層色譜鑒別，斑點(diǎn)不清晰，故未列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.3 質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定指標(biāo)成分的選擇

方中蒲公英清熱解毒、散結(jié)消腫［6］；細(xì)辛祛風(fēng)邪、通鼻竅、止痛［7］；蒼耳子散風(fēng)、通竅止痛［8］；辛夷宜肺通竅；黃芩清熱燥濕、瀉火解毒［9］；麻黃宜肺通竅；白芷通竅排膿；石菖蒲化濕通竅。 諸藥合用，共奏祛風(fēng)清熱，宜肺通竅之功［10-11］。 蒲公英主要成分為咖啡酸，HPLC 法測定咖啡酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)，3 批樣品中咖啡酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.3 μg／mL，考慮咖啡酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低，故未將其測定列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；麻黃中的鹽酸麻黃堿具有抗感染、抗過敏、收縮血管的作用［12］；黃芩中黃芩苷有抗氧化、抗過敏作用［13］；其他藥物處方量少，難以檢測。 綜上，選擇鹽酸麻黃堿、黃芩苷作為質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定的指標(biāo)，方法學(xué)考察表明黃芩苷和鹽酸麻黃堿的專屬性、線性、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率均符合要求，適合滴通鼻炎噴涂凝膠劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。