外周血循環(huán)腫瘤細胞在結(jié)直腸癌中的研究進展

鐘慧　應(yīng)學(xué)明　鄢少聰

【摘 要】結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發(fā)病率位于第3位，死亡率居第4位。外周血循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）的檢測作為近年來臨床研究的熱點，在評估治療癌癥的療效及判斷預(yù)后等方面有著巨大的潛力。本文就結(jié)直腸癌CTC檢測的臨床意義作一綜述。

【關(guān)鍵詞】結(jié)直腸癌;循環(huán)腫瘤細胞

【中圖分類號】R735.3【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2020）03-09--02

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見的惡性腫瘤之一，在我國發(fā)病率僅次于肺癌和乳腺癌，死亡率居第4位。每年全球120萬新發(fā)病例中約6萬人死于CRC，20%～45%的患者出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)或發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。

循環(huán)腫瘤細胞（Circulating tumor cells，CTCs）是痕量存在于外周血中的各類腫瘤細胞的的統(tǒng)稱。傳統(tǒng)的診斷手段聯(lián)合外周血循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）檢測的綜合診斷可以提高臨床診療的敏感性，及早提示惡性風(fēng)險及潛在轉(zhuǎn)移風(fēng)險，輔助臨床醫(yī)師制訂更加合理的個體化診療方案。本文就CTCs的富集與分離、檢測技術(shù)及結(jié)直腸癌CTCs檢測的臨床意義進行綜述。

1 CTC的富集和分析

1.1 CTC的富集與分離 CTC在腫瘤患者的外周血中數(shù)量極少，每10mL的血液中僅有幾個至十幾個，需要先將外周血中的CTC進行分離和濃縮，以提高檢測的靈敏度。目前，CTC的富集和分離主要是根據(jù)物理學(xué)和免疫學(xué)特征將其從外周血細胞中篩選出來。

1.1.1 基于CTC的物理學(xué)特性 研究表明，腫瘤細胞的直徑與其他細胞不同，利用具有一定大小的濾過膜可以將直徑較大的CTC富集分離出來?；谕庵苎母鞣N細胞密度差異產(chǎn)生不同的細胞沉降系數(shù)，利用密度梯度離心法，將外周血中不同密度的細胞組分進行分離。不同細胞具有不同的電學(xué)特性，在電場中，這些細胞產(chǎn)生的電偶極距大小和方向存在差異，利用其受到的力學(xué)作用不同，將目的細胞分離出來。

1.1.2 基于CTC的免疫學(xué)特性 外周血腫瘤細胞免疫富集的方法是基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，分為正向富集和負向富集兩類。正向富集是針對CTC表面表達的特異性腫瘤細胞抗原利用帶有標記的外源性抗體與之結(jié)合，從而達到CTC的直接捕獲和富集。反之，負向富集的的靶點則是白細胞表面的抗原利用外源性抗體結(jié)合白細胞后，將白細胞篩除，從而達到去除背景血細胞而富集CTC的效果。

1.2 CTC的檢測與分析 CTC的檢測分析方法分兩大類：細胞計數(shù)法（包括免疫細胞化學(xué)法和流式細胞術(shù)等）和核酸檢測法（包括聚合酶鏈式反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)等）。免疫細胞化學(xué)法以顯色劑標記的特異性抗體進行細胞原位抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)呈色反應(yīng)，對相應(yīng)腫瘤抗原可進行定性、定位和定量測定。流式細胞術(shù)是一項集激光、電子物理、細胞熒光化學(xué)及單克隆抗體等技術(shù)為一體的新型技術(shù)，定量計數(shù)腫瘤細胞。PCR技術(shù)檢測腫瘤患者外周血中的CTC是通過檢測血細胞中癌基因和抑癌基因的異常表達。RT-PCR技術(shù)是擴增由血細胞中表達的腫瘤特異性mRNA序列逆轉(zhuǎn)錄的DNA片段，從而分析腫瘤特異性mRNA的表達水平。目前在CTC的檢測中應(yīng)用最為廣泛，被認為是目前檢測CTC最有效的方法之一。

2 CTC檢測與結(jié)直腸癌治療療效相關(guān)性研究進展

2.1 CTC檢測在結(jié)直腸癌輔助診斷中的意義 由于血液系統(tǒng)是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要途徑，CTC的存在逐漸成為診斷惡性腫瘤的潛在標準。Sastre等研究針對97例結(jié)直腸癌患者和30名健康受試者進行CTC檢測，97例患者中CTC陽性患者34例（36.2%），未發(fā)現(xiàn)CTC陽性與原發(fā)灶位置、癌胚抗原水平增加、乳酸脫氫酶水平增加有相關(guān)性，但CTC陽性率與分期存在相關(guān)性（Ⅱ期為20.7%、Ⅲ期為24.1%、Ⅳ期為60.7%，P=0.005），研究表明CTC檢測對輔助診斷有重要的參考價值。

2.2 CTC在結(jié)直腸癌預(yù)后的判定價值 研究表明，CTC數(shù)目及治療前后CTC的變化情況對結(jié)直腸癌患者PFS和OS等預(yù)后信息有預(yù)測作用。De Albuquerque等研究根據(jù)CTC檢測結(jié)果，將患者分成CTC陽性和CTC陰性組，基線CTC陽性的患者相對于CTC陰性患者中位PFS明顯較短（181d vs.329d）。而且，發(fā)現(xiàn)動態(tài)監(jiān)測CTC的變化與影像學(xué)結(jié)果存在顯著相關(guān)性，研究證實CTC檢測可以作為新的結(jié)直腸癌預(yù)后因子，用于監(jiān)測結(jié)直腸癌患者治療，且CTC較影像學(xué)更早評估治療效果。

2.3 評價腫瘤治療效果和監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā) 多項臨床試驗表明CTC的數(shù)量在接受有效化療或靶向藥物治療后顯著降低。目前，治療前基線CTC數(shù)目與影像學(xué)結(jié)果并沒有很好的對應(yīng)關(guān)系，但是治療前后CTC的數(shù)量的變化與標準的療效評價體系有很好的對應(yīng)關(guān)系。

3 總結(jié)與展望

大量研究證實，CTC與腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，檢測CTC有助于腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診斷、臨床分期、療效監(jiān)測及預(yù)后判斷，并為腫瘤患者的個體化治療提供有價值的臨床指導(dǎo)。CTC作為結(jié)直腸癌獨立的預(yù)后因素，可反映循環(huán)腫瘤負荷及腫瘤的生物學(xué)特性。CTC的未來朝著單細胞組學(xué)發(fā)展，擺脫了腫瘤組織標本的限制，使非創(chuàng)傷性診斷、監(jiān)測成為了可能，為結(jié)直腸癌的診斷、治療監(jiān)測、預(yù)后評估等提供了簡便途徑。這也將有助于臨床醫(yī)師更深入地了解腫瘤轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，動態(tài)實時地分析患者的腫瘤分子特征，為真正的個體化治療提供有價值的依據(jù)。