人胃癌組織中Runx3表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

王 暉，趙亞剛

1.江西省九江市第三人民醫(yī)院重肝科，江西九江 332000；2.中國人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東廣州 510010

胃癌發(fā)病相對隱匿，手術(shù)切除后的5年生存率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶是否清除密切相關(guān)，早期研究發(fā)現(xiàn)，Runx3表達(dá)異?？捎绊懳赴┓只襌unx3表達(dá)水平與患者預(yù)后呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系[1]。近期有研究發(fā)現(xiàn)Runx3表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的重要因素[2]。此外，溫機(jī)靈等[3]研究顯示，膀胱B超檢查與尿沉渣Runx3基因甲基化的聯(lián)合檢測診斷膀胱癌復(fù)發(fā)的靈敏度為92.86%，特異度為91.62%，陰性預(yù)測值為99.35%，提示了Runx3與腫瘤的密切關(guān)系。本研究旨在通過探討胃癌組織中Runx3的表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，明確胃癌組織中Runx3能否作為遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測指標(biāo)，為臨床實(shí)踐提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年1月在九江市第三人民醫(yī)院經(jīng)胃鏡檢查、病理活檢確診為胃癌并行手術(shù)治療的患者30例為研究對象，其中男21例、女9例，平均年齡(50.20±12.71)歲。根據(jù)淋巴結(jié)活檢結(jié)果，未發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移的患者為未轉(zhuǎn)移組，共13例；發(fā)生第2站淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的為轉(zhuǎn)移A組，共7例；發(fā)生第2站以上淋巴結(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的為轉(zhuǎn)移B組，共10例。納入標(biāo)準(zhǔn)：同意加入本研究，并簽署知情同意書；經(jīng)胃鏡檢查、病理活檢診斷為胃癌，并行手術(shù)治療，術(shù)前經(jīng)全腹部CT平掃+增強(qiáng)掃描檢查未能明確是否有第2站及以上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型腫瘤患者。本研究經(jīng)九江市第三人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2方法 腫瘤組織均取自腫塊中央非壞死部分，組織離體后在0.5 h內(nèi)置液氮中凍存。組織RNA提?。喝〗M織100 mg,徹底勻漿后按Trizol一步法提取總RNA。反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測Runx3表達(dá)水平:2.5 μL反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中依次加入39 μL RNase Free dH2O、0.5 μL TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μL)、0.5 μL Primer-Runx3 Antisense、0.5 μL Primer-Runx3 Sense、2 μL dNTP Mixture(10 mmol/L each)、5 μL 10×PCR BufferⅡ混勻。Runx3產(chǎn)物大小為181 bp，上游引物序列為5′GGTTCAACGACCTTCGCTTC3′，下游引物序列為5′AACGGCTTGGTCTGGTCCTC3′；Gst-π產(chǎn)物大小為180 bp，上游引物序列為5′AGGACGGAGACCTCACCCTGTA3′，下游引物序列為5′CCTTGCCCGCCTCATAGTTG3′；反應(yīng)終體積為50 μL；β-actin產(chǎn)物大小為130 bp，上游引物序列為5′CCAGGGCGTTATGGTAGGCA3′，下游引物序列為5′TTCCATATCGTCCCAGTTGGT3′(本研究引物由上海捷瑞公司設(shè)計及合成)。RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物于2%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，凝膠成像分析儀進(jìn)行攝像分析。使用Quantity One軟件計算條帶灰度水平，目的基因相對表達(dá)水平=目的基因灰度水平/β-actin灰度水平。

2 結(jié) 果

2.13組患者Runx3表達(dá)水平比較 未轉(zhuǎn)移組患者胃癌組織中Runx3表達(dá)水平最高，為0.787±0.227，轉(zhuǎn)移A組Runx3表達(dá)水平為0.583±0.135，轉(zhuǎn)移B組Runx3表達(dá)水平最低，為0.362±0.040，3組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=7.425，P<0.05)；3組間兩兩比較差異也均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳圖見圖1。

注：M代表DL3000 Mark，從上至下片段大小分別為3 000、2 000、1 000、750、500、250、100 bp。

圖130例患者腫瘤組織RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳圖

2.2Runx3表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移距離的相關(guān)性分析 Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，Runx3表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移距離呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.993，P<0.05)。

3 討 論

Runx3是一種抑癌基因，其表達(dá)下降或缺失可導(dǎo)致胃黏膜腸化，并進(jìn)一步發(fā)展癌變[4]。HSU等[5]研究顯示，Runx3表達(dá)的缺失與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)；XUE等[6]通過對結(jié)直腸癌組織中Runx3的表達(dá)水平及其與微血管密度(MVD)關(guān)系的研究發(fā)現(xiàn)，Runx3的表達(dá)水平與MVD水平呈負(fù)相關(guān)，從病理生理學(xué)角度闡明了Runx3的表達(dá)下降與腫瘤轉(zhuǎn)移的聯(lián)系。

早期的研究多注重Runx3甲基化與表達(dá)的關(guān)系，以及Runx3甲基化表達(dá)下降后與胃癌發(fā)生的關(guān)系，而Runx3的表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系仍存在較大爭議。近期有學(xué)者通過對9項研究涉及796例患者的薈萃分析發(fā)現(xiàn)，Runx3的表達(dá)與胃癌的分化、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯的相關(guān)性(P<0.05)[7]。

大量研究證實(shí)胃癌患者手術(shù)后5年生存率與能否完整清除淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶相關(guān)，所以部分研究認(rèn)為無論有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均應(yīng)給予淋巴結(jié)清掃。過度的淋巴結(jié)清掃會影響消化系統(tǒng)的淋巴回流，影響患者后期的生活質(zhì)量；但對于部分未進(jìn)行淋巴結(jié)清掃的患者卻存在術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的風(fēng)險[7]。薛軍等[8]研究顯示，Runx3的表達(dá)水平與大腸癌的TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移距離呈負(fù)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，未轉(zhuǎn)移組患者胃癌組織中Runx3表達(dá)水平最高，為0.787±0.227，轉(zhuǎn)移A組Runx3表達(dá)水平為0.583±0.135，轉(zhuǎn)移B組Runx3表達(dá)水平最低，為0.362±0.040，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，Runx3表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移距離呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.993，P<0.05)，說明胃癌組織中的Runx3表達(dá)水平下降可能提示胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移，且Runx3表達(dá)水平越低，胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的距離越遠(yuǎn)。所以胃癌患者在等待術(shù)中病理結(jié)果的同時，如果能夠進(jìn)行胃癌組織Runx3的及時RT-PCR檢測，對Runx3表達(dá)下降的患者行第2站淋巴結(jié)清掃，可提高胃癌根治效果；而對于Runx3表達(dá)正常的患者，可考慮保留第2站淋巴結(jié)，提高患者的術(shù)后生存質(zhì)量。

綜上所述，Runx3可作為判斷胃癌患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測指標(biāo)，且其表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的距離呈負(fù)相關(guān)。但本研究納入的樣本量較少，結(jié)果可能存在偏倚，后期將會進(jìn)行大樣本量研究進(jìn)一步證實(shí)。