山藥及幾種炮制品皮與粉質(zhì)部位總黃酮差異*

孟永海，孟祥瑛，付敬菊，秦 蓁，翟春梅

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

山藥為一種藥食同源的中藥材，廣泛生長(zhǎng)于河南、湖北[1]、山西、山東、河北、浙江等地[2]，具有抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、提高免疫力等功效[3-5]。其中黃酮類成分具有降三高、保護(hù)心腦血管、抗氧化、抗自由基等功效[6,7]，一直是研究的熱門方向。山藥皮和山藥粉質(zhì)部分差異卻報(bào)道較少，但山藥皮雖為非藥用部位，但其功效與成分不可小覷。近年來，以天然產(chǎn)物替代工業(yè)合成抗氧劑已成為熱門話題，具有效果佳、成本低、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)[8-10]，而白術(shù)皮質(zhì)部位的開發(fā)，可為天然抗氧劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)儀（美國(guó)PerkinElmer公司）；AL 204型分析天平；CT15RE型高速冷凍離心機(jī)；KQ-500DB型超聲清洗機(jī)；6202型高速粉碎機(jī)；OSB-2200型水浴鍋。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

淮山藥（產(chǎn)地河南），對(duì)照品蘆丁購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司；NaOH、NaNO2、AlCl3等均為分析純。

1.3 山藥炮制品的制備

1.3.1 土炒山藥的制備 于臺(tái)秤稱取大小均勻的生山藥片500g，將炒鍋燒熱，加入灶心土50g，不斷攪拌炒散，加入生山藥，不斷翻炒至藥材固有氣味透出，表面呈現(xiàn)微黃色，斷面微黃，篩去土粉，放涼備用。

1.3.2 麩炒山藥的制備 于臺(tái)秤稱取大小均勻的山藥片500g，將炒鍋燒熱，加入50g麥麩于熱鍋翻炒，炒至透出麥麩特有香氣并微微冒煙時(shí)投入山藥，不斷翻炒至藥材固有氣味透出，表面呈現(xiàn)微黃色，斷面微黃，篩去麥麩，放涼備用。

1.3.3 蜜麩炒山藥的制備 稱量50g麥麩，加適量蜂蜜拌勻，直至蜜麩握之成團(tuán)、推之即散。于臺(tái)秤稱取大小均勻的山藥片500g，將炒鍋燒熱，加入50g麥麩于熱鍋翻炒，炒至透出麥麩特有香氣并微微冒煙時(shí)投入山藥，不斷翻炒至藥材固有氣味透出，表面呈現(xiàn)微黃色，斷面微黃，篩去麥麩，放涼備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液的制備 將山藥及各炮制品（皮質(zhì)、粉質(zhì)）粉碎并過篩，按照料液比1∶20加入95%（V/V）乙醇，浸泡 12h，超聲提取 1h，離心（12000r·min-1，10min）取上清液備用。

2.1.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的配制 分析天平精密量取17.5mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，加95%（V/V）乙醇稀釋至刻度，配制成1.75mg·mL-1的溶液，搖勻備用。依次分別吸 5、1、1.5、2、2.5、3mL 溶液于 10mL 容量瓶，加95%（V/V）乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制濃度分別為 175、350、525、700、875、1050μg·mL-1的系列對(duì)照品儲(chǔ)備液，4℃冷藏備用。

2.1.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別移取蘆丁對(duì)照品系列溶液0.5mL于10mL具塞試管內(nèi)，加入0.5mL 5%NaNO2溶液，室溫放置5min，加入0.5mL 10%AlCl3溶液，室溫放置5min，加入2mL 4%NaOH溶液，搖勻靜置15min。使用移液槍將顯色后的溶液各200μL轉(zhuǎn)移至96孔板中，應(yīng)用酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢測(cè)儀在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值（A），以系列對(duì)照品儲(chǔ)備液的濃度（c）為橫坐標(biāo)，與之相對(duì)應(yīng)的吸光度值（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0019x+0.0557，r2=0.9988。

2.1.4 山藥中總黃酮含量測(cè)定 精密吸取山藥提取0.5mL于10mL具塞試管內(nèi)，應(yīng)用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH黃酮顯色法在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A），再由標(biāo)準(zhǔn)曲線公式計(jì)算得到提取液的總黃酮濃度（C）。按照以下公式換算計(jì)算。

式中 X：山藥總黃酮含量，mg·g-1；M：稱取藥材質(zhì)量，g；a：稀釋倍數(shù)；C：提取液總黃酮濃度，mg·mL-1。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度考察 精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0.5mL于10mL具塞試管，按“2.1.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色并測(cè)定吸光度值，在該條件下連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算總黃酮含量的RSD%為4.35%，表明儀器精密度良好。

精密吸取山藥生品、土炒山藥、麩炒山藥、蜜麩炒山藥（皮、粉）總黃酮提取液樣品溶液0.5mL于10mL具塞試管內(nèi)，按“2.1.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行顯色并測(cè)定吸光度值，在該條件下連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算總黃酮含量的RSD%為5.12%，表明儀器精密度良好。

2.2.2 穩(wěn)定性考察 精密吸取山藥生品、土炒山藥、麩炒山藥、蜜麩炒山藥（皮、粉）總黃酮提取液樣品溶液，于室溫環(huán)境中放置，分別在第 0、2、4、6、8h 分別測(cè)定吸光度，計(jì)算不同時(shí)間測(cè)得的總黃酮含量，總黃酮含量RE%在-5.54%～6.22%之間。結(jié)果表明供試品溶液在室溫條件下放置8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.3 加樣回收率考察 精密稱取9份山藥藥粉各1g，分別置于50mL錐形瓶中，分別精密加入混合對(duì)照品溶液2、4、6mL，分別用95%乙醇補(bǔ)足，總體積為50mL。精密量取15ml按照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.4”項(xiàng)下顯色方法測(cè)定吸光度并計(jì)算總黃酮含量，計(jì)算回收率87.4%～98.2%。

2.2.4 總黃酮含量測(cè)定 分別稱量生山藥、土炒山藥、麩炒山藥、蜜麩炒山藥（皮、粉）各1g，每組6份，分別按照“2.1.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.4”項(xiàng)下顯色方法測(cè)定吸光度值并計(jì)算總黃酮含量，含量測(cè)定結(jié)果見下表。

表1 山藥及幾種炮制品（皮質(zhì)、粉質(zhì)）總黃酮含量Tab.1 Tobal flavonoids contentol of yam and several processed products（skin and powdery）

3 結(jié)論

結(jié)果表明，炮制前后山藥總黃酮含量略有升高，以蜜麩炒山藥皮質(zhì)部位的總黃酮含量最高。山藥皮質(zhì)部分含量遠(yuǎn)高于其粉質(zhì)部位，生山藥皮總黃酮含量為粉質(zhì)部位3.46倍，土炒山藥皮總黃酮含量為粉質(zhì)部位4.16倍，麩炒山藥皮總黃酮含量為粉質(zhì)部位3.74倍，蜜麩炒山藥皮總黃酮含量為粉質(zhì)部位3.56倍，由此可知，山藥皮具有大量的黃酮類成分，黃酮類成分具有抗氧化等功效，而從植物中提取天然抗氧劑是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)之一，這無疑為山藥藥材開發(fā)與利用提供了佐證。