利妥昔單抗聯(lián)合化療治療非霍奇金淋巴瘤后淋巴細(xì)胞亞群的動態(tài)觀察

陳 慧 陳會慧 徐 浩 諶廷妹 張 婧

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)為淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴組織免疫細(xì)胞腫瘤，主要源自B淋巴細(xì)胞，目前尚不明確NHL發(fā)病機(jī)制，但已知其發(fā)生、進(jìn)展與機(jī)體免疫功能狀態(tài)相關(guān)。細(xì)胞免疫是調(diào)節(jié)人體免疫的重要部分，T淋巴細(xì)胞在人體抗惡性腫瘤中具有中心調(diào)控的重要地位。自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)是人體先天免疫系統(tǒng)中預(yù)防感染、防止細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，不需要腫瘤特異性抗原識別就可直接殺傷或殺死腫瘤細(xì)胞[1-2]。近年來關(guān)于淋巴細(xì)胞亞群在非霍奇金淋巴瘤診斷、病情觀察中的研究日益增多，取得長足進(jìn)步，淋巴細(xì)胞亞群的改變在該病預(yù)后觀察中具有重要價值。利妥昔單抗靜脈注射、化療是非霍奇金淋巴瘤治療常用方法，近年來一些大型研究指出利妥昔單抗聯(lián)合化療能顯著延長非霍奇金淋巴瘤患者生存期，改善預(yù)后，但其短期或長期毒性需要警惕[3-4]。本研究分析利妥昔單抗聯(lián)合化療治療4個周期(每個周期為3周)后非霍奇金淋巴瘤患者淋巴細(xì)胞亞群的變化及意義，結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

于2011年1月至2018年11月期間納入作者所在醫(yī)院行利妥昔單抗聯(lián)合化療的非霍奇金淋巴瘤患者58例，為觀察組；同期納入健康者30例為對照組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①根據(jù)世界衛(wèi)生組織相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)確診的NHL患者；②首次化療，未曾行手術(shù)治療、放療；③簽署知情同意書；④年齡18～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：化療禁忌證；對利妥昔單抗過敏；合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能異常；合并其它惡性腫瘤，免疫系統(tǒng)病變。觀察組：男性28例，女性30例；年齡18～69歲，平均(43.87±4.54)歲；其中T細(xì)胞NHL(T-NHL)共28例，B細(xì)胞NHL(B-NHL)共30例。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～70歲，自愿參與研究，身體健康。對照組：男性16例，女性14例；年齡19～62歲，平均(40.95±7.12)歲。2組性別、年齡比較，P>0.05。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 化療方法：給予1.4 mg/(m2·d)長春新堿；給予60 mg/(m2·d)多柔比星；給予600 mg/(m2·d)環(huán)磷酰胺；給予100 mg/(m2·d)潑尼松，靜脈滴注治療，1次/3周。利妥昔單抗使用方法：在上述治療基礎(chǔ)上經(jīng)靜脈滴注給予375 mg/(m2·d)利妥昔單抗注射液，1次/3周。以上治療均3周為1個周期，共治療4個周期。

1.2.2 淋巴細(xì)胞亞群檢測方法 觀察組和對照組患者在入組后均在清晨抽取空腹靜脈血2 ml，經(jīng)肝素抗凝處理。將100 μl新鮮抗凝血標(biāo)本放在樣品測定管內(nèi)，加熒光標(biāo)記單克隆體，室溫下孵育30 min后加入溶血素，溶血后測定[6]。NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群均采用BD FACS calibur流式細(xì)胞儀，數(shù)據(jù)經(jīng)BD FACSDiva軟件分析。

1.3 觀察指標(biāo)

療效觀察根據(jù)世界衛(wèi)生組織關(guān)于非霍奇金淋巴瘤療效評估標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[7]：CT掃描提示淋巴結(jié)<1 cm，無可觸及的淋巴結(jié)，活檢呈陰性，針刺陰性，為完全緩解；病灶至少縮小50%為部分緩解；病灶縮小不足50%或增長不足20%為穩(wěn)定；病灶至少增大25%為進(jìn)展。有效=(完全緩解+部分緩解)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 化療前后NHL患者與對照組淋巴細(xì)胞亞群對比

化療前觀察組NK細(xì)胞、CD4+、CD3+較對照組低(P<0.05)；CD8+、Treg較對照組高(P<0.05)?；熀螅^察組NK細(xì)胞、CD4+、CD3+升高，其中NK細(xì)胞仍顯著低于對照組(P<0.05)；CD8+、Treg顯著降低且仍然高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.2 不同病理類型患者化療后淋巴細(xì)胞亞群對比

化療后B-NHL患者NK細(xì)胞、Treg均較T-NHL低，CD8+、CD4+、CD3+較T-NHL高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。見表2。

2.3 治療有效組和無效組患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群對比

有效組和無效組在化療前NK細(xì)胞、Treg、CD8+、CD4+、CD3+比較，P>0.05?；熀笥行ЫMTreg、CD4+、CD3+更高(P<0.05)；而NK細(xì)胞、CD8+2組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。見表3。

表1 化療前后NHL患者與對照組淋巴細(xì)胞亞群對比

注：t1、P1為觀察組化療前與對照組比較結(jié)果；t2、P2為觀察組化療后與對照組比較結(jié)果；t3、P3為觀察組化療前與化療后比較結(jié)果。

表2 不同病理類型患者化療后淋巴細(xì)胞亞群對比

表3 治療有效組與無效組患者化療前后淋巴細(xì)胞亞群對比

3 討論

NHL是源自淋巴結(jié)及淋巴組織的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤，患者免疫功能異常對NHL發(fā)生、進(jìn)展和預(yù)后有重要影響。細(xì)胞免疫在人體抗腫瘤過程中發(fā)揮重要作用，其中NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群是主要效應(yīng)細(xì)胞，因此分析利妥單抗聯(lián)合化療對非霍奇金淋巴瘤患者淋巴亞群的影響有助于今后NHL發(fā)病因素、免疫狀態(tài)的進(jìn)一步研究，為免疫治療提供重要參考。

外周T淋巴細(xì)胞亞群主要反映人體細(xì)胞免疫狀態(tài)，CD3+細(xì)胞代表外周血成熟T淋巴細(xì)胞數(shù)量，CD4+是免疫應(yīng)答主要反應(yīng)細(xì)胞，對輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)及抑制性T淋巴細(xì)胞成熟有影響，從而促使B細(xì)胞抗體產(chǎn)生，使NK細(xì)胞非特異性殺死腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞功能被激活[8-9]。CD3+、CD8+經(jīng)自身及抑制因子在免疫反應(yīng)中的負(fù)向作用，對B細(xì)胞功能和CD4+細(xì)胞功能的抑制作用，發(fā)揮抗體形成和細(xì)胞免疫反應(yīng)抑制作用。現(xiàn)有研究證實，T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及功能變化是腫瘤及其它嚴(yán)重疾病進(jìn)展時，機(jī)體免疫功能紊亂的重要表現(xiàn)。本研究中化療前觀察組NK細(xì)胞、CD4+、CD3+較對照組低，P<0.05；CD8+、Treg較對照組高，P<0.05。提示NHL患者在治療前細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重受抑制，其中T淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能異常導(dǎo)致細(xì)胞免疫紊亂，是NHL發(fā)病主要因素。非霍奇金淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展與此相關(guān)，細(xì)胞免疫應(yīng)答及免疫監(jiān)視功能在腫瘤消滅和監(jiān)視中有主要作用，機(jī)體免疫功能低下、紊亂時，機(jī)體識別及殺傷突變細(xì)胞能力變?nèi)?，?dǎo)致腫瘤發(fā)生幾率上升[10-11]。本研究中化療后，觀察組NK細(xì)胞、CD4+、CD3+升高，其中NK細(xì)胞仍顯著低于對照組，P<0.05；CD8+、Treg顯著降低且仍然高于對照組，P<0.05。提示經(jīng)利妥昔單抗聯(lián)合化療治療后患者原本的低免疫功能狀態(tài)顯著改善，即患者機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)有所改善，但這種改善仍然不能使患者免疫功能與健康者相當(dāng)。Treg大量分布在腫瘤周圍淋巴細(xì)胞中，能殺傷或抑制效應(yīng)性CD8+或CD4+T細(xì)胞，對機(jī)體抗腫瘤免疫進(jìn)行抑制，Treg數(shù)量增加提示患者預(yù)后較差，但在NHL患者中情況更加復(fù)雜，其在不同亞型NHL中表達(dá)意義有所不同，在濾泡型淋巴瘤、生發(fā)中心彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)增高則預(yù)示較好的預(yù)后，在非生發(fā)中心彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中并無這個規(guī)律[12]；成年人T細(xì)胞淋巴瘤患者Treg高表達(dá)提示較差預(yù)后。因此研究利妥昔單抗聯(lián)合化療治療非霍奇金淋巴瘤時需要注意不同病理類型患者淋巴細(xì)胞亞群Treg的變化[13]。本研究中B-NHL患者Treg系列較T-NHL低，但一些類似研究卻并未發(fā)現(xiàn)此結(jié)果，本研究結(jié)果與其不一致的原因可能包括B-NHL與T-NHL患者構(gòu)成比不同[14-15]。值得注意的是，今后研究需要更加重視不同病理類型的患者Treg細(xì)胞變化。在有效組與無效組治療前后淋巴細(xì)胞亞群對比中發(fā)現(xiàn)有效組化療后與無效組化療后相比，前者Treg、CD4+、CD3+更高，P<0.05，而NK細(xì)胞、CD8+比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。提示有效組腫瘤負(fù)荷相對于無效者減少，腫瘤抑制機(jī)體免疫功能的強(qiáng)度減輕。

綜上所述，通過觀察利妥昔單抗聯(lián)合化療治療非霍奇金淋巴瘤前后淋巴細(xì)胞亞群變化發(fā)現(xiàn)，非霍奇金淋巴瘤患者機(jī)體免疫功能較差，該治療能一定程度緩解這種情況，減少腫瘤負(fù)荷，觀察淋巴細(xì)胞亞群變化利于預(yù)后判斷，此外要充分考慮不同病理類型患者Treg變化的不同意義。