井穴刺絡(luò)放血對(duì)中風(fēng)大鼠缺血后腦水腫影響的實(shí)驗(yàn)研究※

田力欣,高 靚,李忠正,郭 義

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津301617;2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,天津300193)

腦水腫是中風(fēng)等腦血管病的嚴(yán)重并發(fā)癥,對(duì)于腦水腫的治療,目前主要限于滲透性利尿或手術(shù)減壓,不良反應(yīng)較大。本研究旨在觀察井穴刺絡(luò)放血對(duì)中風(fēng)后大鼠缺血性腦水腫的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SD大鼠,鼠齡2～3個(gè)月,體質(zhì)量250～300 g,許可證編號(hào)：SCXK(軍)2014-0001。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

(1)動(dòng)物分組、模型制備及干預(yù) ①動(dòng)物分組：在SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件中生成隨機(jī)數(shù)字表,將動(dòng)物隨機(jī)分為5組：正常組、假手術(shù)組、模型組、井穴刺絡(luò)放血組和井穴不放血組。實(shí)驗(yàn)觀察周期為48 h。②模型制備：模型組、井穴刺絡(luò)放血組和井穴不放血組均建立大腦中動(dòng)脈栓塞模型(參照Z(yǔ)ea Longa法)[1]。假手術(shù)組只分離右側(cè)動(dòng)脈而不插線。模型納入與剔除標(biāo)準(zhǔn)：采用Zea Longa五級(jí)評(píng)分法[1]評(píng)定大鼠建模成功與否。評(píng)分于大鼠完全清醒后進(jìn)行,評(píng)分2～3分(包括2分和3分)者納入實(shí)驗(yàn),2分以下及3分以上者予以剔除。③干預(yù)方法：井穴刺絡(luò)放血組使用三棱針針具,于大鼠雙側(cè)前肢及后肢趾端的十二“井穴”(除去“涌泉”)點(diǎn)刺放血,針刺深度為1 mm,出血量為每穴15～20μL。三棱針針尖上1 mm處貼膠布以控制其刺入深度。井穴不放血組使用直徑0.16 mm毫針針具,于相同取穴部位進(jìn)行針刺,刺入后即出針不放血,針后立即用消毒干棉球按壓針孔。毫針針尖上1 mm處貼膠布以控制其刺入深度。穴位定位方法采用比較解剖學(xué),參照人體相應(yīng)穴位解剖標(biāo)志,在大鼠四肢的各趾相應(yīng)部位選取。于動(dòng)物蘇醒后每日治療2次,前肢趾端“井穴”與后肢趾端“井穴”交替進(jìn)行,取材前(48 h)共治療4次。

(2)觀察指標(biāo) ①腦組織含水量：取腦后,去除嗅球和小腦,沿中線分離左、右大腦半球,分別稱量左腦與右腦濕重(Wet Weight,WW),然后置于110℃烘箱中至恒重,稱量得干重(Dry Weight,DW)。腦含水量計(jì)算公式為：(WW-DW)/WW×100%。②腦密度：分別將左、右腦放入裝有5 m L 0.9%氯化鈉注射液的量筒中,并使用1 m L注射器抽取上升液體,上升液體讀數(shù)為腦體積(Volume,V),腦密度計(jì)算公式為：WW/V。③腦系數(shù)：腦系數(shù)計(jì)算公式為：(WWoL＋WWoR)/BW×100%,左腦腦系數(shù)計(jì)算公式為：WWoL/BW×100%,右腦腦系數(shù)＝WWoR/BW×100%。(WWo L：左腦濕重;WWoR：右腦濕重;BW：體質(zhì)量)

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩兩比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),組間比較采用單因素方差分析,P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦組織含水量比較 正常組、假手術(shù)組右腦含水量大致等于左腦(P＞0.05);模型組右腦較左腦含水量明顯增高(P＜0.01),說(shuō)明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴刺絡(luò)放血組、井穴不放血組右腦含水量均明顯高于左腦(P＜0.01),但井穴刺絡(luò)放血組右腦與左腦含水量的差值小于模型組和井穴不放血組,提示3組中,井穴刺絡(luò)放血組的腦水腫嚴(yán)重程度最低。見(jiàn)表1。

較正常組和假手術(shù)組,模型組右腦含水量明顯增高(P＜0.01),說(shuō)明造模后右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴刺絡(luò)放血組右腦含水量明顯低于模型組(P＜0.01),但亦明顯高于正常組(P＜0.01),提示井穴刺絡(luò)放血組對(duì)右側(cè)腦水腫有一定的改善作用。井穴不放血組右腦含水量低于模型組(P＞0.05),但明顯高于正常組(P＜0.01)和井穴刺絡(luò)放血組(P＜0.01),提示井穴不放血組對(duì)腦水腫的改善效果有限。見(jiàn)表1。

表1 各組中風(fēng)大鼠腦組織含水量比較(%,x±s)

2.2 腦密度比較 正常組、假手術(shù)組右腦密度大致等于左腦(P＞0.05);模型組右腦密度較左腦明顯降低(P＜0.01),說(shuō)明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴不放血組右腦密度仍明顯低于左腦(P＜0.01),提示右側(cè)腦水腫仍比較嚴(yán)重。井穴刺絡(luò)放血組左、右兩側(cè)差異已無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),提示右側(cè)腦水腫的嚴(yán)重程度顯著降低。見(jiàn)表2。

模型組的右腦密度較正常組和假手術(shù)組明顯降低(P＜0.01),說(shuō)明造模后右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴不放血組右腦密度較模型組雖有所升高(P＞0.05),但仍明顯低于正常組(P＜0.01),且明顯低于井穴刺絡(luò)放血組(P＜0.01),提示井穴不放血組右側(cè)腦水腫無(wú)明顯改善。井穴刺絡(luò)放血組右腦密度明顯高于模型組(P＜0.01),與正常組的差異已無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),提示井穴刺絡(luò)放血對(duì)腦水腫有明顯的積極改善效果。見(jiàn)表2。

表2 各組中風(fēng)大鼠腦密度比較(Hu,x±s)

2.3 腦系數(shù)比較 正常組、假手術(shù)組右腦腦系數(shù)大致等于左腦(P＞0.05);模型組右腦腦系數(shù)明顯高于左腦(P＜0.01),說(shuō)明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴不放血組、井穴刺絡(luò)放血組右腦腦系數(shù)明顯高于左腦(P＜0.01),但兩組右腦腦系數(shù)均低于模型組,提示這兩組右側(cè)腦水腫的嚴(yán)重程度有所降低。見(jiàn)表3。

較正常組和假手術(shù)組,模型組右腦腦系數(shù)明顯降低(P＜0.01),說(shuō)明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴不放血組右腦腦系數(shù)明顯高于正常組(P＜0.01)和井穴刺絡(luò)放血組(P＜0.01),但低于模型組(P＞0.05),提示右側(cè)腦水腫仍然嚴(yán)重,但有一定的改善。井穴刺絡(luò)放血組右腦腦系數(shù)雖仍明顯高于正常組(P＜0.01),但亦明顯低于模型組(P＜0.01),提示井穴刺絡(luò)放血對(duì)右側(cè)腦水腫有改善作用。見(jiàn)表3。

模型組腦系數(shù)明顯低于正常組和假手術(shù)組(P＜0.01),說(shuō)明造模后腦水腫嚴(yán)重,造模成功。井穴不放血組腦系數(shù)高于井穴刺絡(luò)放血組(P＞0.05),明顯高于正常組(P＜0.01),但低于模型組(P＞0.05),提示腦水腫仍然嚴(yán)重,但有一定的改善。較模型組,井穴刺絡(luò)放血組腦系數(shù)明顯降低(P＜0.01),與正常組的差異已無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),說(shuō)明井穴刺絡(luò)放血對(duì)腦水腫有明顯的改善作用。見(jiàn)表3。

表3 各組中風(fēng)大鼠腦系數(shù)比較(%,x±s)

3 討論

2013年8月24日召開(kāi)的第9次中醫(yī)急診學(xué)術(shù)研討會(huì)提出發(fā)展具有中醫(yī)特色的急診學(xué)科,使中醫(yī)藥在各種急性疾病的救治中發(fā)揮更大作用。井穴急救中風(fēng)是古代常用之法,古典醫(yī)籍多有記載。趙萬(wàn)標(biāo)[2]在總結(jié)了井穴治療中風(fēng)的現(xiàn)代研究后認(rèn)為“十二井穴用于腦血管急癥治療,療效肯定”。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型,對(duì)大鼠腦組織含水量、腦系數(shù)和腦密度等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,觀察井穴刺絡(luò)放血對(duì)中風(fēng)缺血性腦水腫的影響。結(jié)果顯示,井穴刺絡(luò)放血對(duì)中風(fēng)大鼠缺血后腦水腫有一定的改善作用?？赡艿臋C(jī)制是：刺絡(luò)放血療法對(duì)K＋、Na＋濃度有良性調(diào)整作用[3],可維持細(xì)胞離子穩(wěn)態(tài);抑制鈣調(diào)素的升高、阻止細(xì)胞外Ca2＋向細(xì)胞內(nèi)遷移[4-5];降低H＋濃度[6];調(diào)節(jié)顱內(nèi)血流速度,改善腦缺血后的腦血流[7-9];調(diào)節(jié)腦缺血區(qū)腦組織的氧分壓[10];調(diào)節(jié)腦缺血相關(guān)代謝產(chǎn)物的含量和濃度[11-13],從而抑制腦水腫的發(fā)展。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,井穴不放血組對(duì)腦水腫無(wú)明顯改善作用,提示井穴刺絡(luò)放血療法的起效可能與放血有著密切的關(guān)系。這可能是因?yàn)榫ù探j(luò)放血通過(guò)改善血液的流量、流速、性狀等從而調(diào)節(jié)了血管的通透性,進(jìn)而達(dá)到了調(diào)節(jié)體液循環(huán)的作用[14],也是中醫(yī)“凡血絡(luò)有邪者,必盡去之,否則病必不除而反為害”理論的良好體現(xiàn)。

本課題組前期工作基礎(chǔ)提示[15],井穴刺絡(luò)放血可能有改善缺血性腦水腫的作用。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的初步觀察,也可看出井穴刺絡(luò)放血對(duì)中風(fēng)大鼠缺血性腦水腫有一定的改善作用,在一定程度上為針灸中早期干預(yù)缺血性腦病提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。相比常規(guī)西醫(yī)治療手段,井穴刺絡(luò)放血法對(duì)缺血性腦血管病可能有其獨(dú)特的綜合治療作用,可配合腦水腫現(xiàn)有的常規(guī)治療用于臨床,值得進(jìn)一步研究。