圈養(yǎng)林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量測定分析△

鄭程莉，蔣桂梅，吳杰，王建明，陳鳳，馮達勇，竭航，趙貴軍，周磊，王歡*

1.四川養(yǎng)麝研究所，四川 成都 611845；2.重慶市藥物種植研究所，重慶 408435

麝香Moschus是麝科動物林麝MoschusberezovskiiFlerov、馬麝M.sifanicusPrzewalski和原麝M.moschiferusLinnaeu等雄性個體香囊的干燥分泌物，香氣芳烈，是我國傳統(tǒng)中藥。我國應(yīng)用麝香防治疾病已有2000多年歷史。漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》對其就有詳細記述，并列為“上品”?！吨腥A人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2020年版中記載，麝香具有開竅醒神、活血通經(jīng)、消腫止痛的功效[1]。研究表明，麝香有抗炎[2-3]、抗腫瘤[4-5]的作用，并對中樞神經(jīng)系統(tǒng)[6]、心腦血管系統(tǒng)[7]等均有顯著的影響。

麝香酮是天然麝香重要的活性成分[8]，《中國藥典》2020年版已明確規(guī)定將麝香酮作為麝香質(zhì)量控制指標(biāo)。天然麝香中麝香酮含量的研究較多集中在測定方法上[9-11]，對于麝香產(chǎn)量與麝香酮含量的分析尚未見相關(guān)文獻報道。隨著人工養(yǎng)殖林麝規(guī)模的不斷擴大，天然麝香的產(chǎn)量逐年提高，為珍貴動物藥麝香提供了重要的來源。同時，人們對林麝的產(chǎn)香規(guī)律有了初步的認(rèn)識[12]，發(fā)現(xiàn)林麝的年麝香產(chǎn)量差異較大，但未有相關(guān)文獻對麝香的形態(tài)及色澤進行研究，無法直接判定哪種麝香屬于優(yōu)質(zhì)麝香。本研究采用氣相色譜法(GC)對不同年齡階段林麝所產(chǎn)麝香中的麝香酮含量進行測定，分析林麝年齡、麝香色澤與麝香酮含量的相關(guān)性，為天然麝香質(zhì)量快速評價體系的建立及林麝的高產(chǎn)品系選育提供參考。

1 材料

1.1 試藥

選取四川養(yǎng)麝研究所馬爾康養(yǎng)獐場同一個飼養(yǎng)員人工飼喂的公麝麝香樣品72個，具體信息見表1，于2018年9月統(tǒng)一取香。為避免取香遺漏造成的差異，均由同一個取香人員取香。二氯甲烷、乙醚、甲醇、乙醇、正己烷、苯均為分析純(成都市科隆化學(xué)品有限公司)；對照品麝香酮(批號：110719-201716，純度：99.9%，中國食品藥品檢定研究院)。

表1 麝香樣品分類表

1.2 儀器

7890A型氣相色譜儀(上海安捷倫科技有限公司)；BSA224S-CW型萬分之一計量電子分析天平、0.01 mg計量電子分析天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器公司)；80-2型電動離心機(金壇市華特實驗儀器有限公司)。

2 方法

2.1 GC-MS條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱型號為DB-17毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，以苯基(50%)甲基硅酮(OV-17)為固定相，涂布濃度為2%；進樣量1.0 μL，程序升溫，起始溫度為80 ℃，保持1 min，25 ℃·min-1升溫至200 ℃，保持8 min；進樣口溫度為230 ℃，檢測器溫度為260 ℃，進樣口總流速為34.5 mL·min-1，色譜柱流速為1.5 mL·min-1，分流比為20∶1，理論板數(shù)按麝香酮峰計算應(yīng)不低于1500。

2.2 對照品溶液制備

取麝香酮對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成1.5 mg·mL-1溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取麝香樣品約1 g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中，減壓干燥至恒定質(zhì)量，計算麝香樣品水分含量。取干燥品約0.2 g，精密稱定，精密加入無水乙醇2 mL，密塞，振搖，放置1 h，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1系統(tǒng)適用性 參考文獻方法[13]，測得的麝香酮氣相色譜圖見圖1。樣品圖譜中麝香酮保留時間為10 min，色譜峰對稱性較好，有效分離，理論峰面積達1500以上，表明方法可行。

注：A.對照品；B.麝香樣品(22)。圖1 麝香酮GC圖譜

2.4.2線性關(guān)系 按照2.1項下色譜條件測定，以麝香酮進樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性方程為Y=982.2X+8.410(r=0.997)，結(jié)果表明，麝香酮進樣量在0.107 9～13.816 5 μg與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.3精密度試驗 取對照品溶液1 μL，按2.1項下色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，結(jié)果峰面積RSD為0.57%，表明儀器精密度良好。

2.4.4重復(fù)性試驗 對同一個林麝的麝香樣品(22)進行5次獨立測定，麝香酮的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.11%，RSD為1.55%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.5穩(wěn)定性試驗 取同一個林麝的麝香樣品(22)，依法分別于0、4、8、12 h測定，RSD為1.93%，表明樣品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品各2 μL，注入氣相色譜儀，測定，即得。

2.6 數(shù)據(jù)分析

3 結(jié)果

3.1 不同年齡階段林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量

在人工養(yǎng)殖條件下，雄麝于1歲齡便發(fā)生初次泌香反應(yīng)，且1～7歲齡為泌香高峰期。72頭存欄林麝按照年齡分組，每個林麝個體的麝香產(chǎn)量見表1，麝香酮分析結(jié)果見表2。

表2 不同年齡階段林麝的麝香產(chǎn)量、麝香酮及水分含量

通過分析不同年齡林麝的產(chǎn)香量，發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。對其含水量進行測定，發(fā)現(xiàn)1歲齡林麝所產(chǎn)麝香的含水量最低，8歲及以上林麝所產(chǎn)麝香含水量最高，與1歲齡林麝所產(chǎn)麝香含水量比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。通過扣除新鮮麝香樣品中的水分，得到絕干麝香物質(zhì)，即麝香凈質(zhì)量。對比分析發(fā)現(xiàn)，2歲齡林麝的麝香凈質(zhì)量最高，并且顯著高于8歲及以上林麝(P<0.01)。對麝香酮含量進行對比分析發(fā)現(xiàn)，1歲齡林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量高于2歲及以上年齡林麝(P<0.01)，2歲齡林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量顯著高于8歲及以上林麝(P<0.05)。

3.2 同一年齡階段林麝不同麝香產(chǎn)量與麝香酮含量

根據(jù)現(xiàn)場取香稱取結(jié)果，發(fā)現(xiàn)第2年泌香的林麝麝香產(chǎn)量差異較大，其中，最高產(chǎn)量可達20.75 g，最低產(chǎn)量為4.56 g，差值可達16.19 g。根據(jù)取香樣本記錄，將第2年泌香的林麝的麝香產(chǎn)量分為3組，10 g以下為第1組，10～15 g為第2組，15 g以上為第3組，分析其麝香酮含量，統(tǒng)計結(jié)果見表3。

從表3可以看出，同一年齡階段林麝根據(jù)麝香產(chǎn)量分組，各組之間的麝香產(chǎn)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但麝香凈質(zhì)量卻未表現(xiàn)出相應(yīng)的規(guī)律，產(chǎn)量在10 g以下的麝香凈質(zhì)量顯著低于10 g以上的麝香，但是產(chǎn)量在10～15 g的麝香凈質(zhì)量與產(chǎn)量高于15 g的麝香凈質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。產(chǎn)量在10 g以下的麝香中麝香酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于10 g以上個體(P<0.05)，表明產(chǎn)量>10 g的麝香品質(zhì)較高。

表3 不同產(chǎn)量麝香中麝香酮及水分含量

3.3 不同色澤麝香中麝香酮含量

通過比色卡比對，對現(xiàn)場采集的新鮮麝香進行了顏色區(qū)分，新鮮麝香顏色主要分為黑色、棕褐色、深棕色、紅棕色和白色(見圖2)。由于新產(chǎn)出的麝香形態(tài)色澤各異，為了探究新鮮麝香顏色與其麝香酮含量之間的相關(guān)性，選取每種顏色中具有明顯區(qū)別的麝香樣品，分析其麝香酮及水分含量與麝香色澤的關(guān)系，結(jié)果見表4。

表4 不同色澤麝香中麝香酮及水分含量 %

圖2 圈養(yǎng)林麝所產(chǎn)麝香色澤

結(jié)果表明，紅棕色麝香中麝香酮含量最高。白色麝香中麝香酮含量最低，與其他顏色麝香差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。麝香水分含量測定結(jié)果顯示，棕褐色麝香水分含量最高，白色的麝香水分含量最低，并且黑色和棕褐色麝香的含水量與白色麝香比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。黑色麝香的含水量顯著高于紅棕色麝香(P<0.05)，同時，棕褐色麝香的含水量顯著高于深棕色和紅棕色的麝香(P<0.05)。

4 討論

4.1 不同年齡林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量分析

生產(chǎn)中，每頭林麝的麝香產(chǎn)量具有隨機性。在本研究中，分別對不同年齡段林麝的麝香產(chǎn)量以及所產(chǎn)麝香的含水量和麝香酮含量進行了比較分析。結(jié)果顯示，在麝香凈產(chǎn)量上，2歲齡的林麝麝香凈產(chǎn)量最高，隨年齡增長，麝香凈產(chǎn)量逐漸減低，8歲及以上年齡段的林麝麝香凈產(chǎn)量最低，1～6歲的林麝所產(chǎn)麝香的平均凈產(chǎn)量差異不大，與程建國等[14]研究4.5歲齡達到產(chǎn)香最高峰值的結(jié)果存在一定的差異。對麝香中含水量的測定結(jié)果顯示，1歲齡林麝產(chǎn)的麝香與2歲齡林麝產(chǎn)麝香的含水量之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但是皆顯著低于8歲及以上的老年麝所產(chǎn)的麝香水分含量，除此之外不同年齡段林麝所產(chǎn)麝香水分含量之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。對測定的麝香酮含量進行分析，結(jié)果顯示，1歲齡林麝產(chǎn)的麝香中麝香酮含量最高，顯著高于2歲及以上林麝所產(chǎn)麝香，2～7歲林麝所產(chǎn)麝香的平均麝香酮含量差異不大，8歲及以上的老年麝所產(chǎn)的麝香的麝香酮含量最低。表明初產(chǎn)林麝麝香質(zhì)量最優(yōu)，其后2～7歲林麝產(chǎn)香狀況平穩(wěn)，及至8歲齡，林麝產(chǎn)香質(zhì)量明顯變差。

麝香為雄性林麝分泌物，泌香機制極為復(fù)雜，研究不同年齡段林麝對其麝香產(chǎn)量與質(zhì)量影響，對指導(dǎo)林麝養(yǎng)殖、提高麝香質(zhì)量具有重要的意義。

4.2 同年齡不同產(chǎn)麝香量的林麝產(chǎn)麝香中麝香酮含量分析

對同一年齡階段的鮮麝香進行分析，發(fā)現(xiàn)鮮麝香產(chǎn)量越高，其麝香凈質(zhì)量也越高，但麝香中的水分含量與鮮麝香的質(zhì)量沒有相關(guān)性，鮮麝香產(chǎn)量大于10 g的個體，麝香酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)>2.0%，麝香品質(zhì)較高。根據(jù)現(xiàn)有結(jié)論，麝香高產(chǎn)量與高品質(zhì)是否具有遺傳性，還有待在生產(chǎn)中進行選育實踐。

4.3 麝香色澤與麝香酮含量的相關(guān)性分析

麝香是雄麝特有的麝香腺囊的分泌物，不同個體，甚至同一個體雄麝麝香腺囊所分泌形成的麝香形態(tài)不一?！吨袊幍洹?020年版把麝香的性狀分為毛殼麝香和麝香仁。麝香仁質(zhì)軟，在人工飼養(yǎng)條件下呈顆粒狀、短條形或不規(guī)則的團塊；表面不平，紫黑色或深棕色，顯油性，微有光澤，并有少量毛和脫落的內(nèi)層皮膜[1]。根據(jù)多年現(xiàn)場取香經(jīng)驗，麝香形態(tài)色澤各異，由深到淺主要分為黑色、棕褐色、深棕色、紅棕色和白色，對造成麝香不同顏色的原因，還有待進一步分析。

目前，麝香酮含量是檢驗麝香質(zhì)量合格與否的標(biāo)準(zhǔn)，為此，本實驗測定了不同色澤新鮮麝香的麝香酮含量，并進行比較分析，以期找到麝香色澤與麝香酮含量之間的聯(lián)系。分析結(jié)果顯示，林麝所產(chǎn)白色的麝香中麝香酮含量最低，且麝香酮含量顯著低于其他4種顏色的麝香。在其他4種顏色的麝香中，紅棕色的麝香麝香酮含量最高，其次為深棕色、黑色和棕褐色。

同時，對不同顏色新鮮麝香的含水量進行測定分析，發(fā)現(xiàn)白色麝香的水分含量最低，棕褐色麝香水分含量最高。紅棕色麝香的麝香酮含量最高，水分含量也較低，可認(rèn)為紅棕色的麝香是品質(zhì)最高的麝香。

根據(jù)以上結(jié)果可以判定，初產(chǎn)麝香的質(zhì)量和產(chǎn)量高于10 g的麝香品質(zhì)較高，并且紅棕色的麝香為優(yōu)質(zhì)麝香。