湖南地區(qū)9 205例孕婦B族鏈球菌感染狀況分析

唐 笑， 甘 甜， 周梅華， 代 冰， 劉岱璿

（長沙金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所，湖南 長沙 410006）

B族鏈球菌（group B Streptococcus，GBS）是兼性厭氧的革蘭陽性菌，同時(shí)也是條件致病菌，常定植于直腸和陰道[1]。正常人群感染GBS后并不致病，但孕婦感染GBS后可導(dǎo)致圍生期嚴(yán)重感染[2]，增加宮內(nèi)感染、胎膜早破、早產(chǎn)、產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥感染、新生兒感染等風(fēng)險(xiǎn)，還可造成新生兒肺炎、血流感染或腦膜炎等，同時(shí)給新生兒神經(jīng)功能造成損傷[3]。GBS被列為圍生期母嬰感染的主要致病菌之一[4-5]。本研究旨在分析湖南地區(qū)孕婦GBS感染情況，為臨床進(jìn)行早期預(yù)防和治療提供指導(dǎo)，降低孕婦圍生期GBS感染風(fēng)險(xiǎn)和新生兒感染的發(fā)病率。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集2017年9月—2018年8月湖南省14個(gè)地級行政區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)9 205例孕婦直腸拭子及陰道分泌物樣本。孕婦年齡16～46歲。

1.2 儀器與試劑

ABI 7500實(shí)時(shí)熒光PCR儀（美國ABI公司），B族鏈球菌核酸檢測試劑盒[博爾誠（北京）科技有限公司]。

1.3 樣本采集和處理

1.3.1 孕婦生殖道分泌物 先拭去陰道過多的分泌物，采用無菌拭子插入陰道內(nèi)1/3處，沿陰道壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得分泌物，將采集的拭子置于無菌管中，密封送檢。

1.3.2 孕婦直腸分泌物 將拭子插入肛門，在肛門括約肌以上約2.5 cm處，沿腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得樣本，將采集拭子置于無菌管中，密封送檢。樣本一經(jīng)送檢，盡快檢測。

1.3.3 樣本存放 待測樣本在2～8 ℃保存不超過24 h，-18 ℃以下保存不超過4 d。

1.4 檢測方法

1.4.1 提取DNA 取1 mL含有分泌物的0.9%氯化鈉溶液至1.5 mL離心管中，15 870×g離心10 min，棄上清，沉淀（如不明顯可重復(fù)離心），加入1 mL無菌0.9%氯化鈉溶液混勻，15 870×g離心5 min，棄上清。沉淀加入50 μL DNA提取液充分混勻，99～100 ℃加熱處理10 min，15 870×g離心10 min后提取DNA。

1.4.2 擴(kuò)增 按樣本數(shù)量（包含質(zhì)控）分裝GBS聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）反應(yīng)液，按每管35 μL分裝至0.2 mL PCR反應(yīng)管中，每管加入5 μL樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增。程序設(shè)定為：50 ℃ 2 min；95 ℃ 5 min；95 ℃15 s，60 ℃ 35 s，45個(gè)循環(huán)。在60 ℃時(shí)分別檢測FAM通道和HEX通道。

1.4.3 結(jié)果分析 閾值設(shè)定在空白對照正常擴(kuò)增曲線的上方，基線設(shè)定選擇3～5個(gè)循環(huán)。陰性結(jié)果判定：如果FAM通道無循環(huán)閾值（cycle threshold，Ct）顯示，而HEX通道信號正常（Ct值≤35.00），則該樣本為陰性。陽性結(jié)果判定：（1）若樣本的FAM通道Ct值≤38.00且擴(kuò)增曲線正常則判定樣本為陽性；（2）若樣本的Ct值為＞38.00～≤45.00，則對該樣本進(jìn)行復(fù)查，如復(fù)查結(jié)果的Ct值仍為＞38.00～≤45.00或≤38.00，則判定為陽性；如果Ct值不顯示且HEX通道信號正常（Ct值≤35.00），則判定為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸樣本和陰道樣本GBS陽性率比較

9 205例孕婦中有719例GBS陽性，陽性率為7.81%。其中直腸拭子樣本5 267例，陽性516例（9.80%）；陰道分泌物樣本3 938例，陽性203例（5.15%）；直腸和陰道部位同時(shí)陽性548例，陽性率為7.61%（548/7 204）。直腸拭子樣本GBS陽性率高于陰道分泌物樣本（P＜0.05）。

2.2 不同年齡孕婦GBS陽性率比較

＞39歲孕婦GBS陽性率最高，＜20歲孕婦GBS陽性率最低。見表1。

表1 不同年齡孕婦GBS陽性率

3 討論

細(xì)菌培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室檢測GBS的金標(biāo)準(zhǔn)。但是培養(yǎng)法需要分離細(xì)菌，檢測耗時(shí)長，操作復(fù)雜，存在一定程度的漏檢可能。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測病原體核酸，能快速、靈敏、準(zhǔn)確地篩查出GBS。本研究中直腸拭子樣本陽性率（9.80%）明顯高于陰道分泌物樣本（5.15%）（P＜0.05），與栗艷芳等[6]的報(bào)道一致，說明不同部位取材對于GBS的陽性率有影響。分析原因可能是直腸的環(huán)境相對于弱酸性的陰道環(huán)境更利于GBS生長繁殖所致[7]。

本研究分析了不同年齡組GBS檢查陽性率，發(fā)現(xiàn)高齡產(chǎn)婦（≥35歲）的GBS陽性檢出率最高，可能與雌激素水平或者免疫力有關(guān)。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，印度、中國、尼日利亞、美國和印度尼西亞是孕婦GBS定植居前5位的國家[8]。但相關(guān)研究結(jié)果表明，我國GBS檢測陽性率普遍不高，遠(yuǎn)低于美國疾病預(yù)防控制中心統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（10%～30%）。對比近幾年我國部分地區(qū)已報(bào)道的GBS篩查情況，發(fā)現(xiàn)湖南地區(qū)孕婦GBS陽性檢出率在國內(nèi)處于中等水平，低于江西（8.76%）[7]、佛山（10.15%）[9]和秦皇島（9.50%），高于中山（6.70%）、南京（4.16%）、上海（6.30%）、深圳（4.50%）、常州（4.20%）、呼和浩特（4.80%）[10-16]。

孕婦感染GBS危害較為嚴(yán)重，會(huì)導(dǎo)致多種不良妊娠結(jié)局，誘發(fā)孕婦和新生兒的各種疾病，甚至死亡。歐美地區(qū)已廣泛開展圍生期孕婦GBS感染篩查，但我國重視程度不足，應(yīng)加大孕婦GBS感染篩查的推廣力度，及時(shí)采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施，降低GBS感染發(fā)生率，同時(shí)建議在條件允許的情況下接種母體GBS疫苗，有效預(yù)防妊娠期婦女GBS感染。