肝癌組織中g(shù)lypican-3、MMP-9 蛋白的表達(dá)情況及臨床意義

彭旭 楊靜

（河南省駐馬店市中心醫(yī)院病理科 駐馬店 463000）

肝細(xì)胞癌的發(fā)病具有起病隱匿、病情進(jìn)展快速、易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差等特點(diǎn)，因此對患者進(jìn)行早期診斷和治療，是降低肝細(xì)胞癌患者病死率的主要方法[1]。惡性腫瘤的典型生物學(xué)特征是可發(fā)生轉(zhuǎn)移、侵襲[2]。近些年，研究顯示磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3）可作為原發(fā)性肝癌的診斷分子標(biāo)志物，能和多種生長和轉(zhuǎn)移因子相結(jié)合引起腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移；基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、侵襲密切相關(guān)，可促進(jìn)癌細(xì)胞突破組織學(xué)屏障[3～4]。本研究探討肝細(xì)胞癌患者組織中g(shù)lypican-3、MMP-9 的表達(dá)情況，為肝細(xì)胞癌患者的早期診斷、臨床治療提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 選取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的63 例原發(fā)性肝癌患者為研究對象，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，且行根治術(shù)治療?；颊咝g(shù)前均未接受過任何抗腫瘤治療，臨床資料完整者。63 例患者中男39 例，女24 例；年齡35～80 歲，平均（59.2±5.3）歲。采集63 例患者的肝癌組織標(biāo)本及距腫瘤組織至少6 cm 處的正常癌旁肝組織50 例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 常規(guī)制備石蠟組織切片（德國SLEE 公司CUT4062 型石蠟切片機(jī)），脫蠟，水化，3%H2O2封閉處理后，滴加鼠抗人glypican-3、MMP-9 抗體（英國Abcam 公司），37℃下孵育30 min，經(jīng)PBS 洗滌；滴加廣譜通用型非生物素化IgG，滴加DAB 染色液，然后經(jīng)蘇木精復(fù)染，以中性樹膠封片，于光學(xué)顯微鏡（日本Olympus 公司CKX41-A32RC 型倒置顯微鏡）下觀察各組織標(biāo)本中g(shù)lypican-3、MMP-9 蛋白表達(dá)情況。glypican-3、MMP-9 蛋白陽性著色為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，以半定量積分法判定染色結(jié)果。染色總評分=陽性細(xì)胞數(shù)評分×陽性染色強(qiáng)度評分，0～4 分為陰性，＞4 分為陽性[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織及癌旁正常組織glypican-3、MMP-9蛋白表達(dá)情況比較 glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達(dá)分布區(qū)域主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中。見圖1。肝癌組織glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見表1。

圖1 肝癌組織及癌旁正常組織glypican-3、MMP-9 蛋白表達(dá)(×200)

表1 glypican-3、MMP-9 蛋白表達(dá)情況[例（%）]

2.2 肝癌組織中g(shù)lypican-3、MMP-9 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 glypican-3、MMP-9 在肝癌組織中的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、血管內(nèi)有無癌栓、腫瘤直徑均無顯著相關(guān)性，（P＞0.05），而與包膜是否完整、淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、被膜是否發(fā)生侵犯具有顯著相關(guān)性（P＜0.05）。見表2。

表2 肝癌組織中g(shù)lypican-3、MMP-9 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

3 討論

目前如何在基因水平上更早期、準(zhǔn)確地診斷原發(fā)性肝癌是臨床研究的重點(diǎn)。研究顯示，glypican-3可激活經(jīng)典Wnt 信號途徑，主要通過自分泌和旁分泌的方式來使Wnt 基因高表達(dá)，進(jìn)而刺激體內(nèi)和體外原發(fā)性肝癌細(xì)胞生長。另外，glypican-3 還可通過促進(jìn)Wnts 與其特異的Frizzled 受體結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的持續(xù)增殖[6～7]。

在肝癌細(xì)胞中，與glypican-3 表達(dá)相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶和生長信號分子發(fā)生了改變；而MMP-9是主要降解Ⅳ型膠原的基質(zhì)蛋白水解酶，可促使肝癌細(xì)胞穿越組織屏障，其在多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，并增加了腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[8～9]。本研究中，肝癌組織glypican-3、MMP-9 蛋白陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織。在腫瘤組織中，肝癌、絨毛膜癌、甲狀腺癌、卵黃囊瘤、黑色素瘤可見glypican-3 表達(dá)，而在乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、卵巢癌中表達(dá)下降或不表達(dá)，表明glypican-3 具有在癌組織特異表達(dá)的特性[10]。肝細(xì)胞癌患者的臨床病理參數(shù)、預(yù)后等與肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為之間的關(guān)系日漸受到人們的關(guān)注。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，glypican-3、MMP-9 在肝癌組織中的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、血管內(nèi)有無癌栓、腫瘤直徑均無顯著相關(guān)性，而均與包膜是否完整、淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移、被膜是否發(fā)生侵犯具有顯著相關(guān)性。

綜上所述，glypican-3、MMP-9 在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生及進(jìn)展過程中起重要作用，原發(fā)性肝癌組織中存在glypican-3、MMP-9 異常高表達(dá)現(xiàn)象，可作為肝癌患者早期檢測指標(biāo)。但有關(guān)其對肝癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。