肌球蛋白因子表達(dá)對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤侵襲性及患者生存預(yù)后的臨床預(yù)測(cè)價(jià)值

于志紅 張娟

(河南省中醫(yī)院河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州 450002)

食管癌在世界范圍內(nèi)是第八大常見的癌癥類型，由于患者后期的生存率較低，因此有效的臨床干預(yù)和治療始終具有一定的挑戰(zhàn)性〔1～3〕。目前文獻(xiàn)中報(bào)道存在多種分子標(biāo)記物能夠作為食管鱗狀細(xì)胞癌的預(yù)后因素，其中上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)標(biāo)記物被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移等顯著相關(guān)〔4,5〕。文獻(xiàn)中顯示肌球蛋白5a在許多腫瘤類型中高表達(dá)并與癌癥侵襲相關(guān)，例如胰島細(xì)胞瘤、高轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞系(乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌和前列腺癌)和惡性黑素瘤等〔6～8〕。本文旨在探究食管鱗狀細(xì)胞癌患者肌球蛋白5a的表達(dá)與腫瘤侵襲性及患者生存預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 2014年1月至2019年5月至河南省中醫(yī)院就診且明確診斷為食管鱗狀細(xì)胞癌的患者80例，男女比例為56∶24，平均年齡(63.8±1.2)歲，所有對(duì)象接受食管腫瘤切除術(shù)及局部淋巴結(jié)清掃手術(shù)，術(shù)前均未接受化療或放療。本研究操作均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)及患者本人知情同意。

1.2標(biāo)本采集及存活時(shí)間 術(shù)中標(biāo)本采用10%甲醛溶液在室溫下固定36～48 h并包埋在石蠟中，根據(jù)國際癌癥控制聯(lián)盟腫瘤、淋巴結(jié)和轉(zhuǎn)移分類系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行組織學(xué)檢查，并根據(jù)世界衛(wèi)生組織分類對(duì)病變進(jìn)行分級(jí)〔9～11〕?；颊叩拇婊顣r(shí)間定義為自手術(shù)后至臨床死亡、腫瘤復(fù)發(fā)或最后一次隨訪之間的時(shí)間。

1.3免疫組織化學(xué)染色分析 將腫瘤標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋處理，之后進(jìn)行組織切片(厚度4 μm)于37℃下孵育過夜，使用二甲苯中脫石蠟、再水化，并用0.3% H2O2處理；對(duì)于肌球蛋白5a首先進(jìn)行封閉，將切片與一抗體(多克隆兔，1∶400，GeneTex)4℃溫育過夜；用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后，將切片與二抗(生物素綴合的山羊抗兔IgG，Nichirei)在室溫下孵育30 min，然后用PBS沖洗。使用3,3′-二氨基聯(lián)苯胺作為色原體，用蘇木精復(fù)染，在乙醇中脫水后二甲苯中清洗并固定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析，通過Fisher精確檢驗(yàn)評(píng)估因子之間的相關(guān)性；測(cè)定Kaplan-Meier存活曲線，并通過對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)比較組間存活率的差異；Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型用于單變量和多變量分析。

2 結(jié) 果

2.1肌球蛋白表達(dá)與臨床病理特征 肌球蛋白5a在患者中的陽性檢出率為52.5%(42/80)。肌球蛋白表達(dá)與年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期顯著相關(guān)(P<0.05，P<0.001)。見表1。

表1 肌球蛋白5a表達(dá)及相關(guān)的臨床病理因素〔n(%)〕

2.2患者臨床預(yù)后 肌球蛋白<0.1 μg/L為低表達(dá)，≥0.1 μg/L為高表達(dá)。具有高肌球蛋白表達(dá)患者的5年總生存率和疾病相關(guān)生存(CSS)明顯低于肌球蛋白表達(dá)低的患者(均P<0.001)，見圖1。

圖1 肌球蛋白5a表達(dá)水平與患者生存預(yù)后相關(guān)性分析

2.3單變量分析顯示 患者的生存與淋巴侵襲(P=0.024)及腫瘤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、肌球蛋白表達(dá)增加顯著相關(guān)(P均<0.05)；多變量分析顯示年齡(P=0.003)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.001)、高肌球蛋白表達(dá)(P=0.037)為獨(dú)立預(yù)后因素；研究中還評(píng)估了肌球蛋白表達(dá)與腫瘤深度為pT1的患者存活率之間的關(guān)系，結(jié)果顯示即使在pT1患者中，高肌球蛋白表達(dá)患者的5年總體存活率明顯低于低肌球蛋白表達(dá)患者(P<0.001)。

3 討 論

肌球蛋白主要參與運(yùn)輸囊泡的形成，如胰島素顆粒和黑素體，并與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架相互作用，在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移中起作用。肌球蛋白5a是最常見的類型，多見于大腦、睪丸和皮膚。雖然目前文獻(xiàn)中部分研究表明肌球蛋白5a表達(dá)與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移之間存在關(guān)聯(lián)，但對(duì)于食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞侵襲性與肌球蛋白5a表達(dá)之間的相關(guān)性目前報(bào)道仍較少〔12～15〕。

既往研究〔16,17〕報(bào)道腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是食管鱗狀細(xì)胞癌的獨(dú)立預(yù)后因素，本研究結(jié)果與之一致，表明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是最重要的預(yù)后因素之一。肌球蛋白5a與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架相互作用，并在常規(guī)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和遷移中發(fā)揮作用；在腫瘤中肌球蛋白5a的消融可對(duì)轉(zhuǎn)移性黑素瘤細(xì)胞的集落形成、遷移和侵襲性產(chǎn)生抑制作用〔6〕，本研究中顯示高肌球蛋白5a表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度顯著相關(guān)。

肌球蛋白5a的免疫組織化學(xué)染色可用于在常規(guī)組織學(xué)診斷期間對(duì)惡性食管腫瘤進(jìn)行評(píng)估，尤其是表達(dá)增加時(shí)可以作為早期腫瘤浸潤(rùn)癌的預(yù)后因子〔18〕。有研究報(bào)道肌球蛋白5a的表達(dá)與惡性黑色素瘤中甲氨蝶呤的耐藥性相關(guān)；新輔助或術(shù)后化療目前是食管鱗狀細(xì)胞癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方法，但由于腫瘤細(xì)胞中肌球蛋白5a的表達(dá)與對(duì)某些類型藥物的抗性相關(guān)〔19～22〕，因此在最初選擇治療方案時(shí)，該因子表達(dá)的評(píng)估可能是有一定臨床價(jià)值的。

本研究存在一定的局限性，納入分析的樣本量較少，缺乏一定的代表性，可能存在偏倚，有必要行大樣本的多種因子綜合分析以深入了解其他因子及相互間的作用與影響。綜上，食管鱗狀細(xì)胞癌患者中肌球蛋白5a表達(dá)因子水平可用于預(yù)測(cè)腫瘤的侵襲性及患者的臨床生存，有利于指導(dǎo)臨床診療方案及評(píng)估治療效果。