伊貝母多糖的提取工藝優(yōu)化及結(jié)構(gòu)表征

阿衣吐遜·阿布都外力 帕爾哈提·柔孜 高彥華 排合爾丁·木臺力甫 熱合巴提·努爾夏提 寧慧霞 阿布力米提·伊力

中圖分類號 R943;R629.12

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號 1001-0408（2020）03-0276-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.03.05

摘要 目的：優(yōu)化伊貝母多糖（FPSP）的提取工藝，并對其結(jié)構(gòu)進行研究。方法：采用Box-Behnken設(shè)計一響應(yīng)面法，以FPSP產(chǎn)率為響應(yīng)值，對FPSP提取工藝中的料液比、提取溫度、提取時間進行優(yōu)化。通過紫外吸收光譜法、傅里葉紅外光譜（FTIR）法、氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法、剛果紅染色法、掃描電子顯微鏡（SEM）觀察、X射線衍射（XRD）法及熱化學(xué)分析等表征手段對FPSP進行結(jié)構(gòu)初探。結(jié)果：FPSP提取的最優(yōu)工藝參數(shù)為料液比1：28（g/mL），提取溫度94℃、提取時間2.5h，產(chǎn)率為16.25%（n=3），與理論產(chǎn)率（16.58%）的誤差為0.33%。FPSP是由物質(zhì)的量之比為1：58.02：0.73的木糖、葡萄糖、半乳糖及微量甘露糖組成，在280 nm波長附近有弱吸收峰，屬于a-構(gòu)型的吡喃多糖，存在三螺旋結(jié)構(gòu)，其表面呈顯不規(guī)則顆粒堆積而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同時存在晶體與非晶體結(jié)構(gòu)，具有較好的熱穩(wěn)定性。結(jié)論：優(yōu)化后的FPSP提取工藝合理、產(chǎn)率較高，可為伊貝母資源的進一步開發(fā)利用提供參考。關(guān)鍵詞伊貝母多糖;Box-Behnken設(shè)計;響應(yīng)面法;結(jié)構(gòu)表征;提取工藝

伊貝母（Fritillaria pallidiflora Schrenk）是多年生草本植物，屬于百合科（Liliaceae）貝母屬（Fritillaria）植物的干燥鱗莖，已收載于2015年版《中國藥典》[1]及《新疆藥用植物志》[2]等。伊貝母中主要化學(xué)成分為生物堿[3]、甾體皂苷[4]、蛋白[5]、多糖[6]等。有研究表明，伊貝母具有清熱、潤肺、止咳、化痰、解毒等功效;能夠治療支氣管炎、肺結(jié)核、咳喘、痰喘、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、黃疸、癰腫及瘡毒等疾病[7-9]。

大量研究表明，天然藥用植物來源的多糖具有多種生物活性，包括抗氧化[10]、抗腫瘤[11]、降血糖[12]、抑菌[13]、改善機體免疫功能[14]、調(diào)控腸道菌群[15]等。長期以來，植物多糖以其廣泛的藥效作用和極低的細(xì)胞毒性，在食品、醫(yī)藥、化妝品和環(huán)境等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用范圍。

前期有關(guān)伊貝母的研究主要集中在其生物堿類成分的分析上[3]，而有關(guān)其多糖成分的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定及其相關(guān)生物活性的研究報道較少。已有研究表明，多糖的生物活性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)[6]。因此，探究伊貝母中具有生物活性的多糖成分具有實際意義。本研究采用Box-Behnken設(shè)計一響應(yīng)面法優(yōu)化伊貝母多糖（FPSP）的提取工藝，利用紫外吸收光譜（UV）法、傅里葉紅外光譜（FTIR）法、氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法、剛果紅染色法、掃描電子顯微鏡（SEM）觀察、X射線衍射（XRD）法及熱化學(xué)分析等表征手段對FPSP進行結(jié)構(gòu)初探，為其多糖類生物大分子化合物的進一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

l 材料

1.1 儀器

FDU-2100型冷凍干燥機（日本Eyela公司）;2550型紫外分光光度計（日本Shimadzu公司）;CR22N型高速冷凍離心機（日本Hitachi公司）;F-305型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞上Buchi公司）;7890A-5975C型GC-MS儀（美國Agilent公司）;NICOLET 6700型IR儀（美國Thermo Fisher Sci-entific公司）;SUPRA 55VP型SEM儀（德國Zeiss公司）;STA449F3型熱分析儀（德國Netzsch公司）;D8 Advance型XRD儀（德國Bruker公司）。

1.2 藥品與試劑

伊貝母于2016年6月采集于新疆伊犁，經(jīng)新疆藥物研究所何江研究員鑒定為百合科貝母屬植物伊貝母（Fritillaria pallidiflora Schrenk）的干燥鱗莖（標(biāo)本保存在新疆藥物研究所標(biāo)本室，標(biāo)本號為81013）;蛋門測量試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司，批號：TH269579）;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：L1431014，分析純）;半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品（上海純優(yōu)生物科技有限公司，批號：RT19U1015，純度：≥98%）;間羥基聯(lián)苯（上海源葉生物科技有限公司，批號：M23M8E32272，純度：>97%）;阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、蒽酮、硫酸、石油醚、氫氧化鈉、乙酸酐、吡啶、鹽酸羥胺、剛果紅、甲醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉及鐵氰化鉀等試劑均為國產(chǎn)分析純或?qū)嶒炇页Ｓ靡?guī)格;水為蒸餾水。

2 方法

2.1 FPSP的提取

伊貝母干燥鱗莖經(jīng)粉碎、過篩（40目）后，用石油醚脫脂3次，得到的脫脂粉以水為溶劑在一定的料液比、提取溫度及提取時間條件下進行提取;過濾提取液，以6462xg離心10min（以下條件同），用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮上清液，再次離心;取濾液，加4倍體積的冰乙醇沉淀，4℃放置12h，離心，凍于，得到FPSP。以FPSP干質(zhì)量/藥材質(zhì)量Xl00%計算產(chǎn)率（%）。

2.2 指標(biāo)測定

2.2.1 多糖含量測定按照標(biāo)準(zhǔn)DB12/T 884_2019[16]，采用蒽酮一硫酸法，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測定FPSP中多糖含量。

2.2.2 糖醛酸含量測定按照標(biāo)準(zhǔn)NY/T 2016_2011[17]，采用間羥基聯(lián)苯法，以半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測定FPSP中糖醛酸含量。

2.2.3 蛋門含量測定采用二喹啉甲酸（BCA）法，按照蛋門測量試劑盒說明書進行操作，測定FPSP中蛋門含量。

2，3 提取工藝優(yōu)化

根據(jù)Box-Behnken原理設(shè)計試驗，選取料液比（A）、提取溫度（B）、提取時間（C）3個因素為自變量，以FPSP產(chǎn)率為響應(yīng)值（Y），進行3因素3水平的響應(yīng)面試驗分析，得到FPSP提取的適宜工藝參數(shù)，并利用Design-Ex-pert 8.0.6軟件對試驗數(shù)據(jù)進行回歸分析，擬合響應(yīng)值與各因素的數(shù)學(xué)回歸模型。因素與水平見表1。

2.4 FPSP的結(jié)構(gòu)表征

2.4.1 UV法 配制質(zhì)量濃度為1mg/mL的FPSP水溶液，用紫外分光光度計在200～400nm波長范圍內(nèi)進行全波長掃描。

2.4.2 FTIR法 取適量FPSP，采用KBr壓片法，用IR儀在4000～400cm_-1波數(shù)范圍內(nèi)進行分析。

2.4.3 GC-MS法 參考文獻(xiàn)[6]所述方法，稱取5.0mgFPSP，溶解于4mL的2mol/L三氟乙酸中，置于GC頂空進樣瓶中，在鼓風(fēng)干燥箱中以110℃條件密閉水解反應(yīng)6h。反應(yīng)結(jié)束后，在酸水解的樣品中加入5mL甲醇，旋蒸蒸干，重復(fù)3次，除掉剩余的三氟乙酸。在各單糖標(biāo)準(zhǔn)品和酸水解完全的FPSP中分別加入8mg鹽酸羥胺及0.5mL吡啶，攪拌溶解后置于90℃水浴中，反應(yīng)30min。取出冷卻至室溫，再加入0.5mL乙酸酐，置于90℃水浴中反應(yīng)30min后，氮吹儀吹干，加入1.OmL氯仿，產(chǎn)物用于GC-MS分析。GC-MS條件：毛細(xì)管色譜柱為OV-1701（30cmX0.32mm， 0.25μm）.檢測器為火焰離子化檢測器（FID），檢測器溫度為270℃，進樣口溫度為250℃，程序升溫（起始溫度為160℃.以5℃/min升至190℃，保持5min，同樣速度升溫至230℃），載氣為氮氣，進樣體積為1μL。

2.4.4 剛果紅染色參考文獻(xiàn)[6]所述方法，配制質(zhì)量濃度為2mg/mL的FPSP水溶液和0.2mmol/L的剛果紅試劑。分別量取6份1mL的FPSP水溶液于離心管中，加入不同體積的1mol/L的氫氧化鈉溶液和水，搖勻，添加1mL剛果紅試劑，使溶液中氫氧化鈉的最終濃度分別為0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05mol/L。用紫外分光光度計在400～700nm波長范圍內(nèi)進行掃描，記錄最大吸收波長（λmax）。以水代替氫氧化鈉溶液作為空門組，以剛果紅試劑與不同濃度的氫氧化鈉溶液為對照組，同法操作。

2.4.5 SEM觀察取適量干燥FPSP，采用離子濺射鍍膜工藝鍍一層鉑金導(dǎo)電膜，用SEM鏡觀察樣品表面形態(tài)。

2.4.6 XRD參考文獻(xiàn)[18]所述方法，采用XRD儀對FPSP的晶體結(jié)構(gòu)進行測定，設(shè)20為5°～60°，步長為0.01°，步速為0.1s。

2.4.7 熱化學(xué)分析參考文獻(xiàn)[19]所述方法，稱取FPSP5mg，在氮氣氣氛下，以流量為50mL/min、升溫速度為10℃/min、25～600℃溫度范圍內(nèi)對FPSP進行熱重分析法（TG）、微分熱重分析法（DTG）和差示掃描量熱法（DSC）分析。

2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

試驗均平均操作3次，數(shù)據(jù)以 ±s表示。使用Ori-gin 8.0.6軟件進行單因素方差分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 FPSP提取工藝

3.1.1 Box-Behnken設(shè)計與結(jié)果 Box-Behnken設(shè)計與結(jié)果見表2。

3.1.2 回歸模型擬合結(jié)果與方差分析結(jié)果FPSP產(chǎn)率與各因素的數(shù)學(xué)回歸模型擬合結(jié)果為：Y=16.33+0.14A+1.48B-0.097C-1.45AB-0.95AC-0.99BC-0.67A₂-2.64B₂-1.19C₂。方差分析結(jié)果顯示，該模型回歸極顯著（P<0.01），失擬項不顯著（P>0.05），R₂=0.948 0，提示該模型與試驗擬合較好，試驗方法可靠，可準(zhǔn)確預(yù)測試驗響應(yīng)值。該模型中，B、AB及B₂的P值均小于0.01，AC、BC及C₂的P值均小于0.05，表明上述因素對響應(yīng)值有顯著影響。在試驗范圍內(nèi)對所選因素影響大小排序為B>A>C，即提取溫度>料液比>提取時間。方差分析結(jié)果見表3。

3.1.3 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果 采用Design-Expert 8.0.6軟件參考回歸模型得出FPSP提取的最優(yōu)工藝參數(shù)為料液比1：27.90（g/mL）、提取溫度93.58℃、提取時間2.45h。在此條件下，F(xiàn)PSP產(chǎn)率的預(yù)測值為16.58%。為了驗證響應(yīng)面法的可行性，參考模型給出的最優(yōu)條件，結(jié)合實際生產(chǎn)可操作性等因素，將最優(yōu)提取工藝參數(shù)調(diào)整為料液比1：28（gmL）、提取溫度94℃、提取時間2.5h。在此條件下進行3組平行試驗，結(jié)果FPSP產(chǎn)率的平均值為16.25%（n=3），與預(yù)測值的相對誤差為0.33%，表明該工藝參數(shù)準(zhǔn)確可靠。各因素交互作用對FPSP產(chǎn)率的響應(yīng)面等高線圖見圖1。

按優(yōu)化后的工藝提取FPSP，對其進行質(zhì)量評價。按“2.2”項下方法進行檢測。結(jié)果，F(xiàn)PSP多糖含量為（ 50.70±0.23）%、糖醛酸含量為（6.85±0.15）%、蛋白含量為（3.05±0.12）%（n=3）。

3.2 結(jié)構(gòu)表征

3.2.1 UV檢測結(jié)果FPSP在280 nm波長附近有弱吸收峰，說明其可能含有蛋白質(zhì)。

3.2.2 FTIR檢測結(jié)果FTIR圖譜顯示，F(xiàn)PSP在3423cm_-1左右的吸收峰是羥基O-H伸縮振動峰，在2923cm_-1左有的吸收峰是C-H伸縮振動峰，在1629 cm_-1左右的吸收峰是多糖水合振動峰[20]，在1384cm_-1左有的吸收峰是C-H面內(nèi)彎曲振動信號峰[21]，在1200～1 000cm_-1之間的3個吸收峰是C-O鍵伸縮振動吸收峰，可推測FPSP有吡喃糖環(huán)結(jié)構(gòu)[22];在850cm_-1附近的吸收峰是a-糖苷的特征峰[23]，可推測FPSP是屬于a-構(gòu)型的吡喃多糖。FPSP的FTIR圖譜見圖2。

3.2.3 GC-MS檢測結(jié)果通過峰面積歸一化確定FPSP由物質(zhì)的量之比為1：58.02：0.73的木糖、葡萄糖及半乳糖組成，還含有微量的甘露糖，主要成分是葡萄糖。

3.2.4 剛果紅染色結(jié)果分子中含有三螺旋結(jié)構(gòu)的多糖在堿性條件下能夠與剛果紅試劑反應(yīng)形成絡(luò)合物，且該絡(luò)合物的λmax會發(fā)生紅移[24]。本試驗結(jié)果顯示，當(dāng)氫氧化鈉濃度為0～0.5mol/L時，與對照組（剛果紅）的λmax比較，試驗組（FPSP-剛果紅絡(luò)合物）的λmax發(fā)生了明顯的紅移現(xiàn)象，提示FPSP中存在三螺旋結(jié)構(gòu)。不同氫氧化鈉濃度下的剛果紅和FPSP-剛果紅絡(luò)合物的λmax曲線圖見圖3。

3.2.5 SEM觀察結(jié)果放大200～10000倍的SEM圖顯示，F(xiàn)PSP大多數(shù)表面呈顯不規(guī)則顆粒堆積而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，且顆粒表面基本光滑，顆粒間幾乎無空隙，說明FPSP分子間聚合較為完全，相互排斥力較弱，吸引力較強。FPSP的SEM圖見圖4。

3.2.6 XRD分析結(jié)果在20°左右，F(xiàn)PSP有一個強度較大的衍射峰，說明FPSP中同時存在晶體與非晶體結(jié)構(gòu)。FPSP的XRD圖見圖5。

3.2.7 熱化學(xué)分析結(jié)果TG分析結(jié)果顯示，在25～600℃溫度范圍內(nèi)，F(xiàn)PSP存在2個失重區(qū)，第一個失重區(qū)出現(xiàn)在100℃左右，F(xiàn)PSP質(zhì)量損失了4.55%，分析可能是由于失去結(jié)合水而引起;第二個失重區(qū)出現(xiàn)在250～600℃溫度范圍內(nèi)，分析可能是因糖苷鍵斷裂而發(fā)生化學(xué)裂解導(dǎo)致的[25-26]，在這一階段失去大部分質(zhì)量。DTG分析結(jié)果顯示，當(dāng)溫度為263.2℃時，F(xiàn)PSP開始發(fā)生化學(xué)裂解反應(yīng);當(dāng)溫度為288.4℃時，F(xiàn)PSP裂解速度達(dá)到最大值（9.32%/min）;當(dāng)溫度達(dá)到661.4℃時，F(xiàn)PSP剩余質(zhì)量為原來的24.78%。DSC分析結(jié)果顯示，F(xiàn)PSP分別在295.2、580.4℃時有2個放熱峰，說明FPSP有較好的熱化學(xué)穩(wěn)定性。FPSP的熱化學(xué)分析圖見圖6。

4 討論

有研究報道，植物來源多糖的提取率受料液比、提取溫度及提取時間等因素的影響較大[27]，因此需經(jīng)過相關(guān)參數(shù)的優(yōu)化來確定最優(yōu)提取工藝。本研究采用Box-Behnken設(shè)計一響應(yīng)面法對FPSP的提取工藝進行了優(yōu)化，結(jié)果，當(dāng)提取溫度為94℃、提取時間為2.45h、料液比為1：28（g/mL）時，F(xiàn)PSP產(chǎn)率為16.25%，顯著高于姜峻等[28]優(yōu)化的浙貝母多糖提取工藝產(chǎn)率5.97%和陳林等[29]優(yōu)化的太門貝母多糖提取工藝產(chǎn)率1.267%。

通過GC-MS分析得出，F(xiàn)PSP是由物質(zhì)的量之比為1：58.02：0.73的木糖、葡萄糖及半乳糖及微量甘露糖等組成的雜多糖。Rozi P等[6]研究得出，以水、酸及堿為溶劑提取所得的FPSP由不同比例的鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖組成。Abuduwaili A等[30]用超聲、酶法及超聲加酶法提取所得的伊貝母多糖單糖組成分析同樣得出其主要成分為葡萄糖。劉春紅等[22]報道，平貝母多糖主要由木糖、葡萄糖、半乳糖組成，各單糖物質(zhì)的量之比為5：1：1。Pan F等[31]研究得出，瓦布貝母多糖由物質(zhì)的量之比為2.62：5.59：10.00：0.76：9.38的甘露糖、半乳糖酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖組成。由此得出，同為貝母屬的植物在單糖組成方面存在一定的差異。通過TG分析得出，從263.2℃開始FPSP的質(zhì)量損失幅度較大，說明此溫度后FPSP開始發(fā)生化學(xué)裂解反應(yīng);與酸堿提取的伊貝母多糖[6]相比，本研究所得FPSP具有較好的熱穩(wěn)定性。

綜上所述，本研究利用Box-Behnken設(shè)計一響應(yīng)面法優(yōu)化得到FPSP最優(yōu)提取工藝。通過UV法、FTIR法、GC-MS法、剛果紅染色法、SEM觀察、XRD法及熱化學(xué)分析表征得出，F(xiàn)PSP是由物質(zhì)的量之比為1：58.02：0.73的木糖、葡萄糖、半乳糖及微量甘露糖等組成的雜多糖，屬于典型的a-構(gòu)型的吡喃多糖，表面結(jié)構(gòu)呈顯不規(guī)則顆粒堆積而成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同時具有較好的熱穩(wěn)定性。本研究旨在為伊貝母資源的充分利用和科學(xué)應(yīng)用提供技術(shù)支撐，為將伊貝母作為原料開發(fā)成藥物或保健品提供物質(zhì)基礎(chǔ)參考。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：141-142.

[2]中國科學(xué)院新疆生物土壤沙漠研究所.新疆藥用植物志[M].烏魯木齊：新疆人民出版社，1984：184-185.

[3]LI Y，YILIA， LIJ，et al.New isosteroidal alkaloids withtracheal relaxant effect from the bulbs of Fritillaria pallidi-flora Schrenk[J]. Biooig Med Chem Lett， 2016， 26 （8）：1983-1987

[4]SHEN S，LI GY，HUANG J，et al.Chemical constituentsfrom Fritillaria pallidiflora Schrenk[J]. Biochem Syst Ecol，2012.DOI： 10.1016/j .bse.2012.07.034

[5]MIJITI Y， ROZI P，WAILI A， et al Isolation of antimicro-bial peptides from Fritillaria pallidiflora[J]. Chem NatComp，2017，53（6）：1144-1147

[6]ROZI P，ABUDUWAILIA，MUTAILIFU P，et al.Sequen-tial extraction， characterization and antioxidant activity ofpolysaccharides from Fritillaria pallidiflora Schrenk[J]Int，Biol Macromol， 2019.DOI： 10.1016/j.ijbiomac.201903.029.

[7]劉勇民，維吾爾藥志[M]烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：59-66.

[8]劉筱虹，王佛華.貝母研究概況[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報，1997，12（4）：35-37

[9]HAO DC，GU XJ，XIAO PG，et al Phytochemical and bi-ological research of Fritillaria medicinal resources[J].ChinL，Nat Med， 2014， 11（4）：330-344

[10]趙幻希，修洋，焦麗麗，等生曬參、紅參中中性多糖的分級及體外抗氧化活性研究[J]中國藥房，2017，28（7）：943-947

[11]劉燕琳，劉海燕，常金，等桑黃多糖對肉瘤S180細(xì)胞體內(nèi)外的抑瘤作用[J]中國藥房，2017，28（22）：3069-3072.

[12]WU GJ，LIU D，WAN YJ，et al.Comparison ofhypoglyce-mic effects of polysaccharides from four Iegume species[J]. Food Hydrocolloid， 2019.DOI： 10.1016/j.foodhyd.2018 12 035

[13]翟婭菲，張星稀，相啟森，等南瓜多糖的體外抑菌活性[J].食品研究與開發(fā)，2019，40（10）：70-74

[14]CAO J，TANG D，WANG Y，et al.Characteristics and im-mune-enhancing activity of pectic polysaccharides fromsweet cherry （Prunus avium） [J]. Food Chem， 2018.DOI：10.10 16/j.foodchem.2018.01.145.

[15]YIN HM， WANG SN， NIE SP， et al Coix polysaccha-rides： gut microbiota regulation and immunomodulatory[J]. Bioact Carbohydr Dietar Fibre，2018.DOI：10. 1016/j.bcdf.2018.04.002.

[16]天津市市場監(jiān)督管理委員會百合磷莖中多糖的含量測定紫外/可見分光光度法DB12/T884-2019[S]. 2019-05-01

[17]中華人民共和同農(nóng)業(yè)部.水果及其制品中果膠含量的測定分光光度法NY/T2016-2011[S]. 2011-12-01.

[18]PATEL MK，TANNA B，MISHRA A，et al.Physicochemi-cal characterization， antioxidant and anti-proliferative ac-tivities of a polysaccharide extracted from psyllium（Povata） Ieaves[J]. Int L， Biol Macromol， 2018.DOI： 10.1016/j.ijbiomac.2018.06.139.

[19]ZHANG WJ， HUANG J， WANG W， et al Extraction， pu-rification， characterization and antioxidant activities ofpolysaccharides from Cistanche tubulosa[J]. Int J BiolMacromol， 2016.DOI：1 0.1 01 6/j.ijbiomac.2016.08.079.

[20]劉春紅，馬宇，何忠梅，等平貝母多糖的分離純化及抗氧化活性研究[J]食品科學(xué)，2011，32（21）：29-33

[21]陳樹俊，李佳益，王翠連，等黃梨渣多糖的提取、分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定[J]食品科學(xué)，2018，39（20）：278-286.

[22]GONG GP，ZHAO JX，WANG CJ，et al.Structural charac-terization and antioxidant activities of the degradationproducts from Porphyra haitanensis polysaccharides[J]Proces.s Biochem， 2018.DOI： 10.1016/j.procbio.2018.05.022

[23]XU WT， ZHANG FF， LUO YB， et al Antioxidant activityof a water-soluble polysaccharide purified from Pteridiumaquilinum[J]. Carbohydr Res， 2009， 344（2）：217-222.

[24]CAO JJ，LV QQ，ZHANG B，et al.Structural characteriza-tion and hepatoprotective activities of polysaccharidesfrom the leaves ofToona sinensis （A.Juss） Roem[J]. Car-bohydr Polym，2019.DOI： 10.1016/j.carbp01.2019.02.031

[25]SHEN DK，GU S，BRIDGWATER AV Study on the pyro-lytic behaviour of xylan-based hemicellulose using TG-FTIR and Py-GC-FTIR[J].L，Anal Appl Pyrol， 2010， 87（2）：199-206

[26]景永帥，張丹參，吳蘭芳，等遠(yuǎn)志多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)特征及生物活性[J]食品科學(xué)，2017，38（17）：126-131

[27]宋佳敏，王鴻飛，孫朦，等，響應(yīng)面法優(yōu)化金蟬花多糖提取工藝及抗氧化活性分析[J]食品科學(xué)，2018， 39 （4）：275-281

[28]姜峻，陳蕾俊，王曉梅，等正交試驗優(yōu)化浙貝母多糖的提取工藝[J]現(xiàn)代食品科技，2011，27（7）：823-825

[29]陳林，唐華麗，韓林，等響應(yīng)面法優(yōu)化水浴提取太白貝母粗多糖工藝[J]湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，55（3）：720-724.

[30]ABUDUWAILI A，ROZI P，MUTAILIFU P，et al Effectsof different extraction techniques on physicochemicalproperties and biological activities of polysaccharidesfrom Fritillaria pallidiflora Schrenk[J]. Process Biochem，2019.DOI： 10.1016/j .procblo.2019.05.020.

[31]PAN F，SU TJ， LIU Y， et al.Extraction， purification andantioxidation of a polysaccharide from Fritillaria unibrac-teata var. wabuensis[J]. Int J，Biol Macromol， 2018.DOI：10.1016/j.ijbiomac.2 018.02.070.

【收稿日期：2019-10-16修回日期：2019-12-12）

（編輯：鄒麗娟）