不同等級寧夏枸杞對小鼠抗缺氧能力及其體內(nèi)抗氧化活性的影響

王 莉

（寧夏醫(yī)科大學臨床學院 寧夏·銀川 750004）

寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果實，即為《中華人民共和國藥典》中的枸杞子。國內(nèi)外學者對枸杞的研究主要包括枸杞子的化學成分、結(jié)構(gòu)及功能等方面。枸杞子的主要的功能成分有枸杞多糖、枸杞黃酮、類胡蘿卜素和萜類化合物等，這些成分與其生物學功效密切相關(guān)，有研究認為，黃酮可以降低膽固醇、改善心腦血管疾病患者的癥狀、降低心腦血管疾病的發(fā)病率，提高小鼠的缺氧存活能力。龔濤等研究認為枸杞多糖有良好的抗氧化、抗衰老作用。李洋等研究了寧夏枸杞中的多糖、黃酮、類胡蘿卜素和VC的抗氧化能力，認為黃酮的抗氧化能力決定著枸杞果實的體外抗氧化能力。從這些研究可知，枸杞果實中的功能成分有著良好的抗缺氧和抗氧化功效。對不同等級寧夏枸杞和不同產(chǎn)地枸杞果實的功能成分的比較已有相關(guān)報道，但不同等級枸杞子的抗缺氧能力及抗氧化活性的研究還較少見。本實驗就不同等級枸杞子提取液對小鼠抗缺氧能力和小鼠肝中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平的影響開展研究，以比較不同等級寧夏枸杞的抗缺氧作用及抗氧化活性的差異，為相關(guān)研究、枸杞生產(chǎn)和銷售提供參考意見。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

枸杞子：為市售的某品牌的特優(yōu)、特級、甲級、乙級枸杞子。維生素C：上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。MDA、SOD測試盒：南京建成生物工程有限公司產(chǎn)品。KM小鼠（寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供）：100只雌鼠，體質(zhì)量（22±2.5）g。儀器：超聲提取儀、電熱恒溫水浴鍋、分光光度計等。

1.2 實驗方法

1.2.1 枸杞子超聲提取液的制備

按文獻中的方法[7]，分別稱取適量四種等級的寧夏枸杞粉末，加入溫度為60℃的自來水超聲提取40min。將提取液離心15min，然后取其上清液，備用。

1.2.2 動物分組

將100只KM小鼠隨機分為10組，即特優(yōu)高劑量組（A1）、特優(yōu)低劑量組(A2)、特級高劑量組(B1)、特級低劑量組(B2)、甲級高劑量組(C1)、甲級低劑量組(C2)、乙級高劑量組(D1)、乙級低劑量組(D2)、陽性對照組（F1,即VC組）和對照組（F2,即自來水組），每組10只。

1.2.3 給藥

各實驗組小鼠分別給其飲服四個等級的寧夏枸杞提取液，低劑量組和高劑量組分別給予10mg/mL和20mg/mL的寧夏枸杞提取液，陽性對照組給予0.2mg/10g的維生素C，正常對照組讓其飲服自來水，連續(xù)飲服4周，實驗期間各組小鼠自由采食普通飼料。

1.2.4 測定不同等級的寧夏枸杞對小鼠抗缺氧能力的影響

每組各取5只小鼠分別放入5個內(nèi)有10g鈉石灰的1000mL的錐形瓶中，迅速塞上瓶塞，縫隙涂抹凡士林，并在瓶口以塑料薄膜扎緊密封。之后立即計時，直至小鼠呼吸停止。以小鼠在密閉瓶內(nèi)存活時間為指標，比較其抗缺氧能力。

1.2.5 測定不同等級的寧夏枸杞對小鼠體內(nèi)SOD和MDA的影響

將小鼠頸椎脫臼處死，立即取其肝臟，用冰冷生理鹽水洗滌數(shù)次，并用濾紙吸干水分后稱取0.4g，置于組織勻漿器中，加入預冷的生理鹽水3.6mL，在冰水浴的環(huán)境下，制備成10%的肝組織勻漿液，3000r/min離心10min，取上清液備用。

用上述制備的肝組織勻漿液根據(jù)羥氨法測定小鼠肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力；硫代巴比妥酸法測定小鼠肝組織中丙二醛（MDA）水平，具體操作按試劑盒說明書進行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠抗缺氧能力的影響

由表1可知，不同等級寧夏枸杞子提取液對小鼠缺氧存活時間的影響與空白對照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對照相比較有顯著差異(P<0.05)。即在密閉缺氧的環(huán)境中，寧夏枸杞子超聲提取液與維生素C均可延長小鼠的存活時間。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級高劑量組、特級低劑量組之間無顯著差異，但與甲級高劑量組、甲級低劑量組、乙級高劑量組、乙級低劑量組相比有顯著差異(P<0.05)，即不同等級寧夏枸杞子提取液對小鼠缺氧存活時間的影響有差異，但高劑量與低劑量之間無顯著性差異。

表1：不同等級枸杞提取液對小鼠缺氧存活時間的影響（±s，n=5）

表1：不同等級枸杞提取液對小鼠缺氧存活時間的影響（±s，n=5）

注：同列中小寫字母相同,差異不顯著，P>0.05；字母不同，差異顯著，P<0.05；下同

組別 劑量 存活時間（min）空白對照組 ——28.80±1.72d維生素C組 0.2mg/10g 35.42±1.85ac枸杞提取液高劑量組特優(yōu) 20mg/mL 36.26±2.14a特級 20mg/mL 35.81±3.12ac甲級 20mg/mL 32.36±2.63b乙級 20mg/mL 32.13±3.03be枸杞提取液低劑量組特優(yōu) 10mg/mL 35.49±2.32ac特級 10mg/mL 34.60±1.85ac甲級 10mg/mL 31.83±2.79be乙級 10mg/mL 30.65±1.85be

2.2 不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中丙二醛(MDA)的影響

由表2可知，飲服不同等級寧夏枸杞子提取液的實驗小鼠，其肝組織中MDA水平與空白對照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對照相比較有顯著差異(P<0.05)，即寧夏枸杞子提取液與維生素C均可降低小鼠肝組織中MDA的水平。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級高劑量組、特級低劑量組、甲級高劑量組之間無顯著差異，但與甲級低劑量組、乙級高劑量組、乙級低劑量組相比有顯著差異(P<0.05)，即不同等級寧夏枸杞子提取液對小鼠肝組織中MDA水平的影響有差異。

表2：不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中MDA的影響（±s，n=5）

表2：不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中MDA的影響（±s，n=5）

組別 劑量 小鼠肝組織中MDA/(nmol·mgprot-1)空白對照組 ——維生素C組 0.2mg/14.04±0.68d 10g 11.30±1.75ac 20mg/mL 10.71±2.02a 20mg/mL 11.45±1.42ac 20mg/mL 11.89±1.92ac 20mg/mL 12.72±2.69be 10mg/mL 11.02±1.39ac 10mg/mL 11.93±1.52ac 10mg/mL 12.43±0.85b 10mg/mL 13.34±0.94be枸杞提取液高劑量組特優(yōu)特級甲級乙級枸杞提取液低劑量組特優(yōu)特級甲級乙級

2.3 不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)的影響

表3：不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中SOD的影響（±s，n=5）

表3：不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中SOD的影響（±s，n=5）

組別 劑量 小鼠肝組織中MDA/(nmol·mgprot-1)空白對照組 ——維生素C組 0.2mg/10g枸杞提取液高劑量組特優(yōu) 20mg/mL特級 20mg/mL甲級 20mg/mL乙級 20mg/mL枸杞提取液低劑量組特優(yōu) 10mg/mL特級 10mg/mL甲級 10mg/mL乙級 10mg/mL 225.48±4.71d 259.53±9.72ac 266.12±6.33a 263.67±8.45ac 248.82±3.92b 239.46±5.69be 261.24±5.55ac 260.45±6.59ac 246.81±7.82be 240.28±9.94be

由表3可知，飲服不同等級寧夏枸杞子提取液的實驗小鼠，其肝組織中 SOD活力與空白對照組相比均有顯著差異（P<0.05）；VC組與空白對照相比較有顯著差異（P<0.05），即寧夏枸杞子提取液與維生素均可提高小鼠肝組織中 SOD的活力。此外，特優(yōu)高劑量組、特優(yōu)低劑量組、特級高劑量組、特級低劑量組之間無顯著差異，但與甲級高劑量組、甲級低劑量組、乙級高劑量組、乙級低劑量組相比有顯著差異（P<0.05），即不同等級寧夏枸杞提取液對小鼠肝組織中 SOD活力的影響有差異，但高劑量與低劑量之間無顯著性差異。

3 分析與討論

常壓抗缺氧實驗是將小鼠置于在密閉缺氧空間中，致使心、腦等器官缺氧，以小鼠在密閉缺氧環(huán)境中的存活時間作為指標，可以測定某種藥物的抗缺氧能力。枸杞表現(xiàn)其藥理功效的主要成分有多糖、維生素、?；撬?、黃酮等多種成分。有報道認為，枸杞汁、枸杞多糖均可提高小鼠的抗缺氧和抗疲勞能力。本研究所用寧夏枸杞超聲提取液對小鼠進行的密閉缺氧實驗顯示，不同等級寧夏枸杞均能顯著提高小鼠的抗缺氧能力，這個結(jié)論與上述研究一致；且不同等級寧夏枸杞對小鼠抗缺氧能力的影響有差異，特優(yōu)和特級寧夏枸杞對小鼠抗缺氧能力的影響高于甲級和乙級。

機體中過多的自由基會破壞細胞結(jié)構(gòu)，干擾正常代謝，加速機體衰老。SOD可清除體內(nèi)自由基，其活力高低可反映出機體清除自由基能力的強弱。MDA是脂質(zhì)過氧化的中間代謝產(chǎn)物，其水平的高低往往可以間接反映機體產(chǎn)生自由基的水平和細胞膜的氧化損傷程度。因此，通過檢測機體內(nèi)SOD的活力和MDA水平的變化，可以較好的反應機體的抗氧化能力。本實驗結(jié)果表明，飲服不同等級的寧夏枸杞子提取液可顯著降低小鼠肝組織中MDA水平，提高小鼠肝組織中SOD活力。說明不同等級的寧夏枸杞子提取液能有效提高小鼠的抗氧化能力，這與目前已有研究報道一致；且不同等級的寧夏枸杞對小鼠體內(nèi)抗氧化活性的影響有差異，特優(yōu)和特級寧夏枸杞對小鼠體內(nèi)抗氧化活性好于甲級和乙級。

枸杞多糖是枸杞子中最重要的活性成分，其含量高低與枸杞生物學功效密切相關(guān)。有報道認為，枸杞的抗氧化能力與維生素C類似，可能與其所含多糖有關(guān)。不同等級寧夏枸杞的多糖含量測定顯示，特優(yōu)級為12.84%，特級為11.32%，甲級為10.79%，乙級為9.68%，目前相關(guān)文獻中對不同等級枸杞中其他成分含量的相關(guān)研究報道較少。在本實驗中，枸杞子超聲提取液對小鼠的抗缺氧能力及其體內(nèi)抗氧化活性的影響有差異，可能是為枸杞中各種成分綜合作用的結(jié)果。具體如何，有待進一步研究。