2株木霉抑菌效果及其促植物生長機(jī)制

張曉夢　田永強(qiáng)　潘曉梅　李佳佳　石曉玲　張建強(qiáng)　吳康莉

摘要：【目的】探究綠色木霉（Trichoderma viride）和棘孢木霉（T. asperellum）對8種植物病原菌的抑制效果及其促植物生長機(jī)制，為木霉防治植物病害和促進(jìn)植物生長等的田間應(yīng)用提供理論參考?！痉椒ā坎捎闷桨鍖χ欧ê凸腆w稀釋法，檢測2株木霉及其活性代謝產(chǎn)物對8種植物病原菌（棉花枯萎病菌、茄子菌核病菌、番茄鏈格孢病菌、茄腐鐮刀病菌、尖孢鐮刀病菌、枸杞炭疽病菌、番茄灰霉病菌和番茄匍柄霉病菌）的抑制率;采用平板透明圈法、Salkowski比色法及鉬銻抗比色法測定2株木霉的生防因子、生長素及溶磷效果;通過辣椒盆栽試驗(yàn)，測定2株木霉發(fā)酵液不同稀釋倍數(shù)處理對辣椒葉片葉綠素含量及3種抗性酶[過氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）]活性的影響?！窘Y(jié)果】平板對峙試驗(yàn)結(jié)果顯示，2株木霉對8種植物病原菌的抑菌率均在60.00%以上;綠色木霉發(fā)酵11 d時(shí)其無菌濾液對茄子菌核病菌的抑制率達(dá)96.78%，但對其他病原菌的抑制率不高;棘孢木霉發(fā)酵11 d時(shí)無菌濾液對茄子菌核病菌、枸杞炭疽病菌和番茄鏈格孢病菌的抑制效果較好，抑菌率分別為99.08%、85.33%和68.65%，發(fā)酵9 d時(shí)無菌濾液對番茄灰霉病菌的抑制率為72.08%;2株木霉均可產(chǎn)生蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、纖維素酶和鐵載體4種生防因子;綠色木霉發(fā)酵9 d時(shí)分泌吲哚乙酸（IAA）量為3.389 mg/L，在PKO無機(jī)磷液體培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d后溶磷量為67.236 μg/mL;棘孢木霉發(fā)酵11 d時(shí)分泌IAA量達(dá)11.638 mg/L，在PKO無機(jī)磷液體培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d后溶磷量達(dá)151.905 μg/mL;盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，噴施不同稀釋倍數(shù)的棘孢木霉發(fā)酵液較綠色木霉發(fā)酵液更能提高辣椒葉片葉綠素含量及3種抗性酶活性?！窘Y(jié)論】供試2株木霉對8種植物病原菌均具有抑制能力并存在多種生防因子和促植物生長能力，其中棘孢木霉較綠色木霉具有更好的抑菌和促進(jìn)植物生長及提高植物葉片葉綠素含量和抗性酶活性的能力，具有較好的田間應(yīng)用潛力。

關(guān)鍵詞： 綠色木霉;棘孢木霉;代謝產(chǎn)物;生防因子;抗性酶

中圖分類號： S182; Q939.92 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2020）11-2713-09

Antifungal effect and plant growth promoting mechanism

of two Trichoderma strains

ZHANG Xiao-meng， TIAN Yong-qiang*， PAN Xiao-mei， LI Jia-jia， SHI Xiao-ling，

ZHANG Jian-qiang， WU Kang-li

（College of Chemistry and Biology， Lanzhou Jiaotong University， Lanzhou ?730070， China）

Abstract：【Objective】To explore the inhibitory effect of Trichoderma viride and T. asperellum on eight plant pathogens and the mechanism of promoting plant growth so as to provide theoretical reference for their field application in preventing and controlling plant diseases and promoting plant growth. 【Method】The inhibition rates of two Trichoderma strains and its active metabolites against eight plant pathogens（Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum，Sclerotinia sclerotiorum，Alternaria solani，F(xiàn). solani，F(xiàn). oxysporum，Colletotrichum gloeosporioides，Botrytis cinerea，Stemphylium lycopersici） were detected by plate confrontation method and solid dilution method. The biocontrol factors， auxin and dissolved phosphorus of two Trichoderma strains were determined by plate transparent ring method， Salkowski colorimetric method and molybdenum-antimony colorimetric method. The content of chlorophyll and activities of peroxidase（POD）， polyphenol oxidase（PPO） and phenylalaninammo-nialyase（PAL） in the leaves were measured by pot pepper experiment before and after treatment with different dilutions of the two Trichoderma fermentation broths. 【Result】The results of the plate confrontation test showed thatthe inhibitory rate of the two Trichoderma strains on eight plant pathogens was more than 60.00%. When the T. viride was fermented for 11 d， the inhibition rate of the sterile filtrate against the Sclerotinia sclerotiorum reached 96.78%， and the inhibition rate against other pathogens was not high. The sterile filtrate of T. asperellum fermented for 11 d had inhibition on the pathogen of S. sclerotiorum， C. gloeosporioides and A. solani， which were 99.08%， 85.33%， and 68.65%， respectively，and the inhibition rate of sterile filtrate on B. cinerea was 72.08% after fermentation for 9 d. Two Trichoderma strains could produce protease， chitinase， cellulase， siderophore.The content of indole-3-acetic acid（IAA） reached 3.389 mg/L when fermentation for 9 d by T. viride， while the content of IAA was 11.638 mg/L at 11 d by T. asperellum. After being cultured in PKO inorganic phosphorus liquid medium for 7 d， the dissolved phosphorus amount of the two Trichoderma strains was 67.236 and 151.905 μg/mL， respectively. The pot experiment showed that the treatment of T. asperellum fermentation broth could increase the chlorophyll content and three resistant enzyme activities of pepper leaves more than T. viride. 【Conclusion】Two Trichoderma strains have the ability to inhibit eight plant pathogens and there are multiple biocontrol factors and can promote plant growth. Among them， T. asperellum has the better ability of bacteriostasis， promoting plant growth and increasing chlorophyll content and resistance enzyme activity in plant leaves than T. viride. It proves that T. asperellum has good development potential in field application.

Key words： Trichoderma viride; Trichoderma asperellum; metabolites;biocontrol factors; resistant enzymes

Fundation item： The Central Government Guiding Local Science and Technology Development Project（218173）;Science and Technology Major Project of Gansu（18ZD2NA005）; Gansu Provincial-level Competitive Project Guiding for Scientific and Technological Innovation and Development （2018ZX-11）

0 引言

【研究意義】在傳統(tǒng)的植物栽培中，長期單一的優(yōu)勢品種大面積種植、連作及化肥的大量、不合理施用等致使植物病害連年加重，加之化學(xué)農(nóng)藥施用引起的生態(tài)環(huán)境失衡，導(dǎo)致農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)日趨薄弱（袁揚(yáng)等，2018）。近年來，有關(guān)微生物及其代謝產(chǎn)物防治土傳病害，促進(jìn)植物生長的報(bào)道逐年增多。木霉菌屬（Trichoderma）部分真菌廣泛存在于土壤和植物根系，是迄今為止防治植物病害中研究較多的生防菌（韓長志，2016）。木霉菌生長迅速、產(chǎn)孢能力強(qiáng)，可通過營養(yǎng)競爭、重寄生、分泌拮抗性次級代謝產(chǎn)物及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性等多種方式防治植物病害，同時(shí)可產(chǎn)生生長激素、降低土壤pH、提高養(yǎng)分利用率，進(jìn)而改善土壤微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)植物生長（Hermosa et al.，2012）。因此，研究木霉生防因子及其促植物生長機(jī)制，對保護(hù)生態(tài)環(huán)境和保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展均具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，國內(nèi)外學(xué)者研究較多的木霉主要有哈茨木霉（T. harzianum）、擬康寧木霉（T. pseudokoningii）、長枝木霉（T. longibrachialum）、綠色木霉（T. viride）和里氏木霉（T. reesei）等，發(fā)現(xiàn)木霉對大多數(shù)作物，如水稻、玉米、小麥、馬鈴薯、瓜類、番茄和棉花等的病害，以及一些園林植物和藥用植物病害均有防治作用，且能促進(jìn)植株生長，尤其是木霉在生長過程中會(huì)產(chǎn)生鐵載體、蛋白酶、纖維素酶和幾丁質(zhì)酶等生防因子（Zhao and Zhang，2015），其與植物互作可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生過氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）等重要防御酶以防治植物病害（覃柳燕等，2017）。倪方方等（2017）發(fā)現(xiàn)哈茨木霉發(fā)酵濾液中的蛋白酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶活性及生長素含量較高，可有效促進(jìn)白術(shù)生長，降低發(fā)病率。臺(tái)蓮梅等（2018）利用分光光度法測定長枝木霉對大豆葉片防御酶活性變化的影響，發(fā)現(xiàn)木霉能誘導(dǎo)大豆葉片PAL、POD、PPO、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化物酶（CAT）活性增強(qiáng)，有效防治大豆疫病。木霉與植物互作過程中，除了誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性外，還產(chǎn)生生長素、赤霉素、脫落酸等植物激素及解磷、解鉀物質(zhì)，提高植物養(yǎng)分利用率。張英（2013）研究發(fā)現(xiàn)木霉培養(yǎng)液pH的降低與有效磷含量的增加存在一定相關(guān)性，說明木霉在鹽堿地改良方面具有應(yīng)用潛力。近幾年，國外對棘孢木霉（T. asperellum）的研究相對較多，國內(nèi)研究主要集中在棘孢木霉的抑菌能力方面，且證實(shí)棘孢木霉通過營養(yǎng)競爭、重寄生作用、抗生作用等多重生防機(jī)制抑制病原菌生長（張眉等，2019）?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】木霉屬的一些種作為生物防治真菌不僅對生態(tài)環(huán)境友好，還具有防治植物土傳病害、提高植物酶活、促進(jìn)植物生長等多種功能。目前，已有較多研究表明木霉對單一病原菌的抑制效果及對植物的促生作用，但比較不同木霉對多種植物病原菌的抑制效果及木霉代謝產(chǎn)物抑菌能力與產(chǎn)生吲哚乙酸（IAA）含量間關(guān)系的研究報(bào)道較少。【擬解決的關(guān)鍵問題】比較棘孢木霉和綠色木霉及其代謝產(chǎn)物的抑菌活性，檢測2種木霉發(fā)酵液中生防因子和促生物質(zhì)的分泌情況，進(jìn)一步通過辣椒盆栽試驗(yàn)檢測2種木霉可能引起辣椒產(chǎn)生系統(tǒng)抗性的因素，以期為木霉防治植物病害、促進(jìn)植物生長的田間應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

1. 1. 1 生防菌 綠色木霉購自中國工業(yè)微生物菌種保藏中心，編號為M1;棘孢木霉由蘭州交通大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定，編號為M2。

1. 1. 2 植物病原真菌 棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum）、茄子菌核病菌（Sclero-tinia sclerotiorum）、番茄鏈格孢病菌（Alternaria solani）、茄腐鐮刀病菌（F. solani）、尖孢鐮刀病菌（F. oxysporum）、枸杞炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）均由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院保存提供，番茄匍柄霉病菌（Stemphylium lycopersici）由蘭州交通大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室在番茄病株上分離獲得。

1. 1. 3 培養(yǎng)基 PDA培養(yǎng)基、PKO無機(jī)磷培養(yǎng)基、脫脂牛奶瓊脂培養(yǎng)基、Avicel培養(yǎng)基、幾丁質(zhì)檢測培養(yǎng)基和CAS檢測培養(yǎng)基（Palaniyandi et al.，2011;楊妍等，2019）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 生防木霉活化 將M1和M2菌株從保存的斜面試管中轉(zhuǎn)接到含有PDA培養(yǎng)基的平皿上活化，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)72 h后轉(zhuǎn)接培養(yǎng)。

1. 2. 2 木霉菌株抑菌率測定 采用平板對峙法，將培養(yǎng)7 d的8種病原菌用直徑9 mm打孔器打取菌餅分別接種至滅菌的PDA培養(yǎng)基中央，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，用滅菌牙簽分別挑取活化培養(yǎng)的M1和M2菌株菌絲十字交叉接種于距病原菌2 cm處的培養(yǎng)基上，以只接種植物病原菌菌餅為對照，28 ℃黑暗條件下對峙培養(yǎng)5～7 d后測定抑菌率（黃雪蓮和于新，2011）。每處理3個(gè)重復(fù)。

2. 3 木霉揮發(fā)性物質(zhì)對病原菌的抑制作用

2株木霉產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對不同病原菌具有不同的抑菌效果。由表1可知，M1和M2菌株產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對番茄匍柄霉病菌、番茄灰霉病菌、枸杞炭疽病菌和茄子菌核病菌的抑菌率均在90.00%以上，且M1菌株對上述4種病原菌的抑制率較M2菌株略高;M1和M2菌株對番茄鏈格孢病菌的抑菌率在72.00%以上，對尖孢鐮刀病菌、棉花枯萎病菌和茄腐鐮刀病菌的抑制率均在42.00%以上。表明木霉產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對番茄匍柄霉病菌、番茄灰霉病菌、枸杞炭疽病菌和茄子菌核病菌有較強(qiáng)的抑制作用，對番茄鏈格孢病菌的抑制作用次之。

2. 4 木霉生防因子及其促生長能力測定結(jié)果

2. 4. 1 木霉生防因子 蛋白酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶和鐵載體等因子是判斷菌株是否具有生防作用的主要因素。從表2可看出，在4種生防因子中，M1和M2菌株產(chǎn)生的纖維素酶活性水平最高，蛋白酶和鐵載體活性水平較高，幾丁質(zhì)酶活性相對較低。

2. 4. 2 木霉IAA含量 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液IAA制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖4-A）。由圖4-B可知，木霉菌株發(fā)酵液中IAA含量隨著發(fā)酵時(shí)間的延長而變化，其中M2菌株發(fā)酵液中的IAA含量比M1菌株高，M1菌株發(fā)酵9 d時(shí)IAA含量達(dá)最大值，為3.389 mg/L，顯著高于其他發(fā)酵時(shí)間處理，隨后IAA含量呈下降趨勢;M2菌株發(fā)酵液中的IAA含量呈先上升后下降再緩慢上升的變化趨勢，發(fā)酵11 d時(shí)IAA含量達(dá)最高值，為11.638 mg/L，顯著高于其他發(fā)酵時(shí)間處理。

2. 4. 3 木霉溶磷能力

2. 4. 3. 1 木霉溶磷能力定性測定結(jié)果 土壤中的磷元素大多數(shù)不能被植物吸收利用，而造成營養(yǎng)元素?fù)p失。如圖5所示，根據(jù)溶磷圈直徑（D）與菌落直徑（d）比值初步確定，以磷酸三鈣為唯一磷源的培養(yǎng)基培養(yǎng)2株木霉均出現(xiàn)不同程度的透明圈，表現(xiàn)出一定的溶磷能力，M1和M2菌株溶解無機(jī)磷的D/d比值分別為1.162和1.194。

2. 4. 3. 2 木霉溶磷能力定量測定結(jié)果 以梯度磷溶液的吸光值（OD700 nm）為縱坐標(biāo)、梯度磷溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖6）。利用鉬銻抗比色法測定搖瓶培養(yǎng)的供試木霉菌株的溶磷能力，結(jié)果表明，M1菌株的溶磷量為67.236 μg/mL，比CK高65.483 μg/mL，M2菌株的溶磷量為151.905 μg/mL，比CK高150.152 μg/mL;2株木霉的溶磷量均高于對照，且M2菌株的溶磷量高于M1菌株。另外，培養(yǎng)液的pH值由初始的7.37，M1菌株降至5.21，M2菌株降至4.74，說明木霉具有較高的溶磷性能，且能降低土壤的堿性，對改良土壤有巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

2. 5 木霉對盆栽辣椒抗性酶活的影響

從表3可看出，經(jīng)木霉發(fā)酵液處理過的辣椒葉片葉綠素含量及3種抗性酶活性水平均有所提高，其中，木霉發(fā)酵原液稀釋150倍時(shí)M1菌株與M2菌株處理組間的葉綠素含量和PAL活性差異顯著，而其他稀釋倍數(shù)下二者間的葉綠素含量及3種抗性酶活性差異不顯著。與CK相比，木霉發(fā)酵原液稀釋100倍時(shí)M1和M2菌株處理組的葉綠素含量分別提高18.53%和27.72%，而稀釋50和150倍的處理組葉綠素增加量大致相同。木霉發(fā)酵原液稀釋50倍時(shí)，M1和M2菌株處理組的POD活性分別較CK提高27.60%和29.36%，但隨著稀釋倍數(shù)的增加其活性降低;稀釋100倍時(shí)，M1和M2菌株處理組的PPO活性分別較CK提高58.73%和62.70%，PAL活性分別提高47.77%和49.06%，稀釋150倍時(shí)2種酶活性的影響效應(yīng)最低。木霉發(fā)酵液對辣椒葉片葉綠素含量及PPO和PAL活性以稀釋100倍最佳，對POD活性以稀釋50倍最佳;在3種酶活性中，木霉發(fā)酵液對PPO活性的影響效應(yīng)最高。以上結(jié)果表明，噴施木霉發(fā)酵液可顯著提高辣椒葉片葉綠素含量及3種抗性酶活性，且M2菌株整體上較M1菌株對辣椒葉片的影響效應(yīng)更高。

3 討論

木霉作為真菌生物防治劑已得到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛研究，不同于化學(xué)藥劑對環(huán)境的負(fù)面影響，其以生態(tài)友好和可持續(xù)發(fā)展的方式防治植物病害（葉旻碩等，2019），有效促進(jìn)植物生長（Mousumi et al.，2019）。近年來，有關(guān)木霉產(chǎn)生防御酶的研究逐漸開展。陳金蓮等（2015）研究發(fā)現(xiàn)擬康寧木霉可產(chǎn)生較多含量的鐵載體;李闖等（2017）對木霉的生物學(xué)測試結(jié)果顯示多種木霉均具有產(chǎn)纖維素酶、幾丁質(zhì)酶以及鐵載體和解磷解鉀、產(chǎn)生生長素的能力;羅鑫和于存（2019）、鄭明子等（2019）研究結(jié)果表明，擬康寧木霉、哈茨木霉和深綠木霉產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶能有效防治植物病害;本研究結(jié)果顯示綠色木霉和棘孢木霉具有較高的產(chǎn)蛋白酶和纖維素酶活性，與林潤澤（2016）研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉、里氏木霉、擬康寧木霉、深綠木霉和長枝木霉產(chǎn)生蛋白酶、纖維素酶的結(jié)論一致。Zhao和Zhang（2015）研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉將難溶性磷轉(zhuǎn)化為有效磷，產(chǎn)生生長素促進(jìn)黃瓜植株生長;劉暢等（2019）研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉的活性代謝物質(zhì)能促進(jìn)小麥發(fā)芽生長;而在本研究中棘孢木霉產(chǎn)生大量生長素，溶磷能力達(dá)151.905 μg/mL，且能降低土壤的pH，棘孢木霉的這些特性可能是促進(jìn)植物生長的主要因素。劉淑宇等（2013）通過測定綠色木霉發(fā)酵液對芒果果實(shí)抗性酶活性的影響，證實(shí)木霉發(fā)酵液可抑制病原菌生長，并提高作物葉片PAL、PPO和POD等抗氧化酶活性;覃柳燕等（2017）研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉均可提高香蕉植株SOD、POD和CAT抗氧化酶活性;而本研究的盆栽辣椒試驗(yàn)結(jié)果顯示在2株木霉中，除綠色木霉50和150倍液處理未顯著提高辣椒葉片葉綠素含量外，其他處理相比CK均顯著提高了辣椒葉片的葉綠素含量及抗性酶活性;除對POD活性以稀釋倍數(shù)50倍為最佳外，對葉綠素含量、PPO和PAL活性均以稀釋100倍為最佳，證明植物經(jīng)木霉誘導(dǎo)后體內(nèi)多種酶活增加與木霉分泌的多種物質(zhì)共同防御植物病害，促進(jìn)了植物生長，同時(shí)為木霉在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用提供了一定理論支持。

本研究發(fā)現(xiàn)木霉發(fā)酵液隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，M1菌株發(fā)酵液對棉花枯萎病菌、番茄鏈格孢病菌、尖孢鐮刀病菌、枸杞炭疽病菌、番茄匍柄霉病菌的抑制率及M2菌株發(fā)酵液對茄子菌核病菌、番茄灰霉病菌、番茄匍柄霉病菌的抑制率呈逐漸上升再下降再緩慢上升的變化趨勢，與發(fā)酵液隨著發(fā)酵時(shí)間的延長，木霉菌株發(fā)酵液中IAA含量先逐漸上升再下降再平緩上升的趨勢大致相同。木霉的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物和發(fā)酵液對8種病原菌的抑制效果存在差異，本研究中綠色木霉和棘孢木霉的揮發(fā)性代謝物質(zhì)除對茄子菌核病菌外，對其他7種病原菌的抑制率均高于發(fā)酵液的抑菌率，與Parizi等（2012）的研究結(jié)果基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)棘孢木霉對病原菌的抑制作用和促進(jìn)植物生長及提高植物葉綠素含量、抗性酶活性方面整體比綠色木霉更為明顯，下一步將對棘孢木霉進(jìn)行更深入的探究，以最大限度地挖掘棘孢木霉的抑菌能力及促生長作用。

4 結(jié)論

綠色木霉和棘孢木霉及其代謝產(chǎn)物對8種植物病原菌均具有抑制能力，且含有蛋白酶、纖維素酶、幾丁質(zhì)酶和鐵載體等生防因子;與綠色木霉相比，棘孢木霉更具抑菌和促進(jìn)植物生長及提高植物葉片葉綠素含量和抗性酶活能力，具有較好的田間應(yīng)用潛力。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）

收稿日期：2020-01-14

基金項(xiàng)目：中央引導(dǎo)地方科技專項(xiàng)（2181730）;甘肅省科技重大專項(xiàng)（18ZD2NA005）;甘肅省省級引導(dǎo)科技創(chuàng)新發(fā)展競爭性專項(xiàng)（2018ZX-11）

作者簡介：*為通訊作者，田永強(qiáng)（1972-），教授，主要從事微生物工程研究工作，E-mail：tian2918@163.com。張曉夢（1995-），研究方向?yàn)檗卓刮⑸飳W(xué)，E-mail：1185588617@qq.com