榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)研究進(jìn)展

王小河 辜夕容 李杰 崔瑤

（西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，重慶 400715）

榧樹屬（Torreya Arn.），為裸子植物門（Gymnospermae）紅豆杉科（Taxaceae）常綠喬木，葉交叉對(duì)生或近對(duì)生，基部扭轉(zhuǎn)排成兩列，條形或條狀披針形，堅(jiān)硬，先端有刺狀尖頭，基部下延生長(zhǎng)，上面微拱凸，中脈不明顯或微明顯，下面有兩條較窄的氣孔帶，橫切面維管束之下方有1個(gè)樹脂道，雌雄異株，稀同株；雄球花單生葉腋，橢圓形或短圓柱形，有短梗，雄蕊排列成4-8輪，每輪4枚，各有4（稀3）個(gè)向外一邊排列有背腹面區(qū)別的下垂的花藥，藥室縱裂，藥隔上部邊緣有細(xì)缺齒；雌球花無(wú)梗，兩個(gè)成對(duì)生于葉腋，每一雌球花具兩對(duì)交叉對(duì)生的苞片和一枚側(cè)生的苞片，胚珠1個(gè)，直立，生于漏斗狀珠托上，通常僅一個(gè)雌球花發(fā)育，受精后珠托增大發(fā)育成肉質(zhì)假種皮。種子第二年秋季成熟，核果狀，全部包于肉質(zhì)假種皮中，基部有宿存的苞片，胚乳略內(nèi)皺或周圍向內(nèi)深皺，或胚乳具兩條縱槽而周圍向內(nèi)深皺，發(fā)芽時(shí)子葉不出土［1］。榧樹屬植物現(xiàn)存7種［2］，其中北美2種［佛羅里達(dá)榧（T.taxifoliaAm.）和加州榧（T. californica）］，日本1種［日本榧（T. nucifera（L.）Sieb. et Zucc）］，我國(guó)4種［榧樹（T. grandis，栽培種為香榧（T. grandis cv. Merrillii））、巴山榧樹（T. fargesii franch）、長(zhǎng)葉榧樹（T. jackii）和云南榧樹（T. yunnanensis）］。該屬植物形態(tài)優(yōu)美、木材結(jié)構(gòu)緊密，是良好的觀賞和用材樹種［1］。而且日本榧和香榧的種仁可入藥，有化痰、止咳、潤(rùn)肺、明目、殺蟲、殺菌、改善脂質(zhì)代謝的功效［3-5］，炒熟后松脆可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，香味獨(dú)特；提取的香榧油可預(yù)防血管硬化、冠心病，是集藥用、果用、油用、觀賞為一體的優(yōu)良干果經(jīng)濟(jì)樹種［3-6］。香榧種仁年產(chǎn)值每公傾可達(dá)15萬(wàn)元-45萬(wàn)元［7-8］，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益。

然而，榧樹屬植物現(xiàn)存資源稀少，多為漸危至瀕危狀態(tài)。如巴山榧樹為漸危植物［9］，長(zhǎng)葉榧樹瀕臨滅絕［10］，它們與云南榧樹一起被列為我國(guó)二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物［9，11-12］；佛羅里達(dá)榧也處于瀕危狀態(tài)，被認(rèn)為是北美最稀有的針葉樹［13-14］；加州榧樹更是即將消失［15］。種群自然分布區(qū)域狹窄，密度小，生長(zhǎng)環(huán)境惡劣，生殖障礙大，開花結(jié)實(shí)率低，加上種子后熟，天然下種后出苗慢，成苗率低等，是導(dǎo)致榧樹屬植物漸?；?yàn)l危的主要原因［4，9-11，14-16］?？朔浞庇y題，在短期內(nèi)擴(kuò)大其種群規(guī)模，是保護(hù)榧樹屬植物以及開展后期研究利用的必要前提。由于種子稀少且難以獲得，人們對(duì)榧樹屬植物主要采取無(wú)性繁殖的方式，目前集中于嫁接、組織培養(yǎng)和扦插3種技術(shù)的研究，且香榧是其中研究得最多的榧樹屬樹種。

1 榧樹屬植物的嫁接技術(shù)

嫁接是將接穗與砧木相互結(jié)合，使它們愈合生長(zhǎng)在一起并發(fā)育成完整植株的方法。接穗與砧木的親和力及活力，嫁接方法與嫁接時(shí)期等都會(huì)影響榧樹屬植物的嫁接成功率。

1.1 接穗與砧木的親和力

親和力是影響嫁接能否成功的主要因素之一。接穗和砧木結(jié)合時(shí)，會(huì)彼此識(shí)別和適應(yīng)內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)、遺傳性質(zhì)和生理特性［17］。一般而言，兩者親緣關(guān)系越近，親和力越強(qiáng)，越能相互愈合成為完整植株，增加嫁接成功可能性［18］。如杜敏紅等［19］以來(lái)自于18個(gè)地方的接穗嫁接浙江東陽(yáng)的3年生香榧實(shí)生苗發(fā)現(xiàn)，接穗來(lái)源顯著影響嫁接成功率，這可能與接穗和砧木間的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近有關(guān)［18-20］。

1.2 接穗與砧木的活力

榧樹屬植物嫁接時(shí)，選取的接穗多從樹冠發(fā)達(dá)的盛產(chǎn)期優(yōu)樹上獲得，砧木則多為1-2年生或2-3年生榧樹實(shí)生幼苗，也有進(jìn)行高接換種的大樹［21-28］。此外，近年來(lái)人們開始探索以胚根萌發(fā)后的種子為砧木的胚枝嫁接方式［29］，或者以組織培養(yǎng)的嫩枝作接穗的微型嫁接方式［30-31］。無(wú)論哪一種嫁接方式，接穗與砧木活力的高低會(huì)直接影響到嫁接成功率。

1.2.1 砧木活力 砧木活力對(duì)嫁接愈合率及嫁接苗生長(zhǎng)都有顯著影響。砧木的年齡越小其活力越強(qiáng)，則嫁接越易成功。如郭欽標(biāo)等［32］發(fā)現(xiàn)，以胚根萌發(fā)后的種子為砧木得到的嫁接苗根系發(fā)達(dá)，苗木粗壯；金航標(biāo)等［31］用4種年齡的實(shí)生苗為砧木進(jìn)行嫁接發(fā)現(xiàn)，3月齡砧木的嫁接后成活率可達(dá)86.67%，而6月齡、1年生和2年生砧木的嫁接成活率分別依次降低至68.33%、31.67%和6.67%。但也有研究發(fā)現(xiàn)1年生和2年生砧木對(duì)嫁接成活率無(wú)顯著影響，但兩種嫁接苗的生長(zhǎng)差異明顯，1年生砧木嫁接苗生長(zhǎng)量不如2年生砧木嫁接苗［26］。

1.2.2 穗條活力 穗條活力主要受枝齡的影響。榧樹嫁接用枝條多為樹冠中上部的直立、粗壯、頂芽健全、組織充實(shí)的1年生或2年生枝硬枝，也有未形成頂芽的嫩梢［29］、半木質(zhì)化嫩梢［24］和組織培養(yǎng)的嫩枝［28，30-31］。吳連海等［28］發(fā)現(xiàn)，1年生枝和嫩枝接穗的活力高于2年生枝，前者的嫁接成活率可達(dá)85%以上，而后者僅為40%，建議不以2年生枝為接穗。雖然穗條粗細(xì)、頂枝側(cè)枝對(duì)嫁接成活率無(wú)顯著影響，但穗條粗的新梢生長(zhǎng)量大［33］；而頂枝的枝條向上且冠幅好，側(cè)枝斜向生長(zhǎng)嚴(yán)重［32］。因此，為有利于穗條的后期快速生長(zhǎng)并保持良好樹冠，應(yīng)盡量選擇較粗的頂枝作嫁接用穗條。

1.3 嫁接方法

可用于榧樹屬植物的嫁接方法很多，有劈接［23，25，29-34］、切 接［21-22，30］、切 腹 接［25，29-30，33］、貼枝接［28］、挖骨皮接［21，34］、挑皮接［21］、鉆孔接［29］和根接［25］等，其中常用的是劈接和切接。嫁接方法的差異會(huì)顯著影響嫁接成活率和嫁接苗的生長(zhǎng)。如谷紅霞等［29］比較了劈接、鉆孔接和切腹接3種方法后發(fā)現(xiàn)，劈接法在香榧嫁接苗的成活率、接穗萌芽動(dòng)態(tài)、接穗生長(zhǎng)量以及嫁接工效上具有明顯優(yōu)勢(shì)，其嫁接成活率可達(dá)89.7%；吳連海等［28］比較了貼枝接和劈接發(fā)現(xiàn)，貼枝接的嫁接成活率、新梢抽生數(shù)、新梢個(gè)數(shù)、新梢生長(zhǎng)量等都高于劈接，前者的嫁接成活率達(dá)到90.58%，而后者為76.67%。

1.4 嫁接時(shí)期

榧樹屬植物喜溫涼濕潤(rùn)氣候，幼年時(shí)期喜陰，不耐強(qiáng)光和高溫。嫁接時(shí)的溫度、濕度和光照等都會(huì)影響榧樹屬植物的嫁接成活率。每年春季為榧樹形成層活躍時(shí)期，因而多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)［21，23-24，26，28-29，31，33］，每年的2-4月為香榧的嫁接適宜期，此時(shí)溫度、濕度和光照都有利于砧穗愈合，過(guò)早或過(guò)晚都不利于嫁接成活。如吳連海等［28］發(fā)現(xiàn)，在2-4月間的嫁接時(shí)期對(duì)嫁接成活率無(wú)顯著影響，但隨嫁接時(shí)間推遲新梢生長(zhǎng)量減??；莊觀山［24］認(rèn)為，香榧的嫁接時(shí)期以“驚蟄”至3月底最為適宜，此時(shí)接穗未綻芽，適合嫁接。

榧樹屬植物雖然喜濕潤(rùn)，但若嫁接時(shí)為雨天或嫁接后短期有降雨，則不利于嫁接苗的成活。如陽(yáng)桂平等［26］發(fā)現(xiàn)，晴天嫁接的成活率在91.5%以上，明顯高于雨天嫁接或嫁接后1 h內(nèi)有降雨的成活率（61.5%-77.3%），因雨天易使嫁接面水分過(guò)多，增加病菌感染機(jī)率，不利于砧穗愈合。此外，莊觀山［24］認(rèn)為嫁接后適當(dāng)遮蔭有利于嫁接成活，但吳連海等［28］發(fā)現(xiàn)嫁接枝用箬葉包扎防曬對(duì)嫁接成活率無(wú)明顯作用。

2 榧樹屬植物的組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)因能保持母體植株的優(yōu)良遺傳特性、繁殖系數(shù)高、繁殖速度快，且能使繁殖材料在短期內(nèi)恢復(fù)幼態(tài)等優(yōu)點(diǎn)而廣泛利用于植物的無(wú)性繁殖。近年來(lái)，不少學(xué)者開展了一些榧樹屬植物如香榧、佛羅里達(dá)榧、云南榧樹的組織培養(yǎng)研究，其中部分獲得成功。在這些研究中發(fā)現(xiàn)，基因型、外植體類型與取材時(shí)間、基本培養(yǎng)基、激素種類及濃度、外源添加物、培養(yǎng)環(huán)境等都會(huì)影響榧樹屬植物的組織培養(yǎng)效果。

2.1 基因型

榧樹屬植物的基因型顯著影響組織培養(yǎng)效果。如Ma等［14］離體培養(yǎng)佛羅里達(dá)榧6個(gè)株系的未成熟合子胚后發(fā)現(xiàn)，各個(gè)株系的離體胚萌發(fā)率從64%到82%不等，存在明顯差異；陳怡和劉海琳［4］以榧樹11個(gè)品系進(jìn)行組織培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)組織培養(yǎng)效果因品種不同而異：雄榧的愈傷組織誘導(dǎo)率與分化率、莖段不定芽誘導(dǎo)率、不定芽生根率都最高，分別達(dá)到69%與5.6%、73.3%、46.7%，并且得出榧樹各基因型在組織、器官的再生能力上具有同一性，即愈傷組織誘導(dǎo)與分化能力強(qiáng)的品系其不定芽誘導(dǎo)和生根能力也強(qiáng)。劉海琳等［35］還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)選育出來(lái)的產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)、生長(zhǎng)健壯的優(yōu)良品系在組培時(shí)也有較強(qiáng)的生長(zhǎng)勢(shì)和莖段再生能力。此外，不同基因型所用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度、生根所需時(shí)間與不定根生長(zhǎng)量等方面也存在差異［4］。

2.2 外植體類型與取材時(shí)間

在榧樹屬植物的組織培養(yǎng)研究中，常用的外植體類型有未成熟合子胚［36-37］、莖段［30-31，35，38-39］、葉和芽［30，38］等。外植體類型不同其組織培養(yǎng)效果不一，以未成熟合子胚和莖段為外植體的培養(yǎng)效果較好。如Ma等［14］以佛羅里達(dá)榧的未成熟合子胚誘導(dǎo)出體胚；項(xiàng)偉波等［36-37］以香榧未成熟合子胚為外植體，成功誘導(dǎo)出愈傷組織并分化出叢生棒狀體胚；王輝［38］以香榧的葉、芽、莖段為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，發(fā)現(xiàn)莖段的誘導(dǎo)率最高，且形成的愈傷組織可繼代增殖、誘導(dǎo)出叢生芽并生根，而由葉或芽誘導(dǎo)出的愈傷組織易褐化死亡致不能繼代；陳怡等［4］、劉海琳等［35］、金航標(biāo)等［30-31］等也都以香榧莖段為外植體成功誘導(dǎo)出愈傷組織或不定芽。

此外，外植體的取材時(shí)間也明顯影響組織培養(yǎng)效果，以榧樹屬植物生理活性強(qiáng)、生長(zhǎng)旺盛時(shí)期較好。如劉海琳等［35］于4月、6月、10月和12月分別采集香榧莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，以4月下旬到6月中旬期間的莖段不定芽分化時(shí)間最短，生長(zhǎng)速度最快；金航標(biāo)［30］在4月、7月、11月分別采集香榧莖段作組織培養(yǎng)，同樣發(fā)現(xiàn)4月比7月和11月采集的莖段有更高的腋芽誘導(dǎo)率。

2.3 基本培養(yǎng)基

榧樹屬植物組織培養(yǎng)用到的培養(yǎng)基有多種，包括B5、MS、WPM、SH、LM、DCR、BM、White和BW［30，35-39］等，不同的外植體所適宜的基本培養(yǎng)基種類有所差異。如香榧莖段在B5、1/2B5、MS培養(yǎng)基上均能誘導(dǎo)分化出叢生芽，但在B5培養(yǎng)基上的誘導(dǎo)效果好于1/2B5和MS培養(yǎng)基［30］；劉海琳等［35］、金航標(biāo)等［30］也發(fā)現(xiàn)B5培養(yǎng)基更適于香榧莖段腋芽的誘導(dǎo)，而MS培養(yǎng)基則較適于腋芽的繼代培養(yǎng)；符榮等［39］則認(rèn)為WPM培養(yǎng)基有利于降低云南榧樹的外植體污染率。對(duì)于未成熟合子胚的培養(yǎng)，不同榧樹屬植物適宜的培養(yǎng)基有異：SH培養(yǎng)基適宜于香榧未成熟合子胚的萌發(fā)［36］，針葉樹培養(yǎng)基可用于佛羅里達(dá)榧未成熟合子胚的培養(yǎng)［14］。

2.4 激素種類和濃度

培養(yǎng)基中添加的激素種類和濃度對(duì)外植體誘導(dǎo)與分化、無(wú)根芽苗的繼代增殖和生根培養(yǎng)都非常重要。在榧樹屬植物的組織培養(yǎng)中，常用的植物激素有2，4-D、IBA、NAA、BA、KT、BR、ABA、GA等［14，30-31，35-39］，其中BR、ABA和GA主要用于未成熟合子胚的培養(yǎng)［14，36］。適宜的激素種類和濃度配比因樹種、外植體和培養(yǎng)階段不同而異。如王輝［38］發(fā)現(xiàn)，香榧葉片在KT 0.5 mg/L+ 2，4-D 0.5mg/L的激素組合時(shí)出愈率最高，可達(dá)81.7%，芽在KT 0.5 mg/L+ 2，4-D 2.0 mg/L時(shí)的出愈率最高，可達(dá)79.8%，而莖段在KT 0.1 mg/L+ IBA 0.8 mg/L時(shí)出愈率最高，達(dá)84.2%；莖段愈傷組織繼代增殖以BA 0.5 mg/L+ 2，4-D 0.5 mg/L，叢生芽發(fā)生則以BA 0.1 mg/L+ NAA 2.0 mg/L為宜；莖段腋芽誘導(dǎo)在KT 0.1 mg/L+ NAA 2.0 mg/L時(shí)誘導(dǎo)率最高，可達(dá)144%。劉海琳等［35］發(fā)現(xiàn)KT 0.1 mg/L+ IBA 0.5 mg/L適于誘導(dǎo)莖段不定芽，IBA 0.1 mg/L適于不定芽生根。金航標(biāo)等［30］發(fā)現(xiàn)香榧莖段的腋芽誘導(dǎo)適于BA 0.1 mg/L+ NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L，腋芽繼代適于BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L，愈傷組織誘導(dǎo)的最適組合則為2，4-D 1.0 mg/L+ BA 0.1 mg/L。相對(duì)于莖段培養(yǎng)，榧樹屬植物的未成熟合子胚培養(yǎng)所用的激素種類和配比明顯不同。如Ma等［14］啟動(dòng)培養(yǎng)佛羅里達(dá)榧未成熟合子胚時(shí)用到的激素種類和配比為2，4-D 0.5 mmol/L + 6-BA 0.2 mmol/L + KT 0.2 mmol/L + BR 0.1 mmol/L + ABA 3.8 mmol/L，而用于其體胚萌發(fā)的為ABA 37.8 μmol/L +BR 0.1 μmol/L；而項(xiàng)偉波等［36-37］僅用一種激素即NAA 0.1 mg/L就可誘導(dǎo)香榧未成熟合子胚產(chǎn)生愈傷組織并分化出叢生棒狀體胚。

2.5 外源添加物

香榧、巴山榧、佛羅里達(dá)榧等含有香榧酯、18-氧彌羅松酚、18-羥基彌羅松酚、花柏酚、4-epiagathadial等較多的酚類物質(zhì)［3］，在組織培養(yǎng)過(guò)程中易褐變死亡［30］。因此，在培養(yǎng)基中往往通過(guò)添加活性炭等物質(zhì)來(lái)降低褐變率，且添加的濃度因榧樹屬植物種類、外植體類型、培養(yǎng)階段而異，多為800 mg/L。如榧樹的11個(gè)品系中，多數(shù)品系在含800 mg/L活性炭的培養(yǎng)基中褐變率較低，但兩性榧、米榧和細(xì)榧仍易褐變［4］；由香榧莖段誘導(dǎo)的愈傷組織能在含800 mg/L活性炭的培養(yǎng)基上繼代增殖，但由葉和芽誘導(dǎo)的愈傷組織卻仍褐變死亡［30］；香榧未成熟合子胚在含500 mg/L活性炭的培養(yǎng)基上即可誘導(dǎo)出愈傷組織并產(chǎn)生原胚，在含400 mg/L活性炭的培養(yǎng)基上可促萌［30］；而在佛羅里達(dá)榧未成熟合子胚培養(yǎng)中，添加的活性炭濃度在誘導(dǎo)階段為250 mg/L，在體胚發(fā)生階段為1 000 mg/L［14］。

此外，在佛羅里達(dá)榧或香榧的未成熟合子胚培養(yǎng)時(shí)，還在培養(yǎng)基中添加有乙磺酸、丙酮酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白等外源物質(zhì)［14］。

2.6 培養(yǎng)環(huán)境

榧樹屬植物為慢生樹種，喜溫涼濕潤(rùn)氣候，細(xì)胞分裂生長(zhǎng)緩慢［40］。組織培養(yǎng)時(shí)若能給予適當(dāng)?shù)牡蜏夭⑷豕馓幚?，可減輕褐變率，有利于外植體成活。如劉海琳等［35］發(fā)現(xiàn)，將香榧莖段接種后，先4℃低溫處理3 d，再置于溫度18-22℃和光照強(qiáng)度400 lx的弱光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，其不定芽誘導(dǎo)率明顯比常溫25±1℃和光照強(qiáng)度1 600 lx下的高。

3 榧樹屬植物的扦插技術(shù)

扦插繁殖是快速繁育苗木的常規(guī)技術(shù)，廣泛用于珍稀瀕危植物的無(wú)性繁殖。在榧樹屬植物的扦插繁殖中，影響因素有很多，包括植物種類或品系，采穗母樹的年齡，插穗年齡、長(zhǎng)度、粗度與留葉量等內(nèi)在因素，以及扦插基質(zhì)、插條預(yù)處理方式、扦插后管理等外在因素。

3.1 插穗選擇與處理

榧樹屬植物插穗一般從生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害、無(wú)機(jī)械損傷的優(yōu)樹樹冠外圍中上部健壯枝條中選取，采集后用濕毛巾包裹以防止插穗失水和氧化。插穗的年齡、長(zhǎng)度、粗度、留葉量等都會(huì)影響扦插生根率。

3.1.1 插穗年齡 多數(shù)研究認(rèn)為，枝條越嫩，其生長(zhǎng)素含量越高，生根率也越高，以半木質(zhì)化的當(dāng)年生嫩枝或木質(zhì)化的1年生帶踵枝作插條較好，2年生以上老枝發(fā)根困難，不宜用作扦插［41］。如巴山榧樹插條的生根率為1年生枝＞2年生枝，3年生插穗基本不生根［42］；日本榧的1年生越冬木質(zhì)化帶節(jié)踵枝［43-44］、香榧的當(dāng)年生半木質(zhì)化帶節(jié)踵枝［41］、云南榧樹的當(dāng)年生木質(zhì)化枝［45］以及長(zhǎng)葉榧樹的1年生越冬木質(zhì)化枝［12］都有較高的扦插生根率。

3.1.2 插條粗度與長(zhǎng)度 扦插初期插條無(wú)根，不能吸收養(yǎng)分供其生長(zhǎng)發(fā)育，此時(shí)插條自身貯藏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)越多，越有利于生根［41］。因此，選取的插穗發(fā)育越健壯充實(shí)，其生根率越高，而且插穗太短太細(xì)都不利于成苗。在香榧嫩枝扦插中，郭維華［46］比較了3種不同粗度插穗的扦插試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)插條越粗，長(zhǎng)勢(shì)越好，建議選0.3 cm以上粗度的枝條作插穗。榧樹屬植物節(jié)間普遍較短，所用插條長(zhǎng)度多12-15 cm。但何小弟等［43-44］比較了5 cm和10 cm兩種長(zhǎng)度對(duì)日本榧扦插的影響，發(fā)現(xiàn)5 cm短枝的發(fā)育年齡較輕，木質(zhì)化程度低，比10 cm長(zhǎng)枝有更高的生根率，建議以短枝作插條以提高生根率。

3.1.3 留葉量 插條上的葉片和芽能利用光能制造生根所需養(yǎng)分，但葉量過(guò)多可能導(dǎo)致蒸騰失水量大，引起插條干枯死亡，反而不利于生根［46］。因此，留葉量的多寡對(duì)插條生根率有顯著影響。香榧、云南榧樹在扦插時(shí)，多保留上端約2/3葉量，有利于插條生根和成活［46-48］。

3.2 扦插時(shí)期

榧樹屬植物在春季開始抽枝，之后進(jìn)入旺盛生長(zhǎng)期，6-7月為形成層活動(dòng)旺盛期，在秋、冬季（10月至第二年2月）進(jìn)入相對(duì)休眠期［17］，而且嫩枝的生長(zhǎng)素含量高于休眠期［17］。在6月下旬至7月上旬，榧樹屬植物的新梢發(fā)育已基本完成，此時(shí)頂芽形成，枝條處于半木質(zhì)化，正是生長(zhǎng)素含量較高且形成層活動(dòng)旺盛期［49］。因此，在春、夏、秋、冬4個(gè)季節(jié)中，夏季的扦插成活率和生根率都高于其他3季［50］，這也是大多數(shù)研究選擇6月至7月扦插香榧的重要原因［46］。

3.3 扦插基質(zhì)

基質(zhì)是插條成活的關(guān)鍵之一，良好的通氣、保水、保肥和保溫性能是對(duì)扦插基質(zhì)的基本要求［17］，這也是扦插技術(shù)中研究得較多的因素之一。榧樹屬植物多為淺根性樹種，具肉質(zhì)根，須根多，表皮上分布有多而大的氣孔，喜通透性好的基質(zhì)［51］。常用的扦插基質(zhì)有蛭石、珍珠巖、河沙、園土、泥炭土、草炭、黃心土等，其中河沙因通透性較好且易得，在榧樹屬植物特別是香榧的扦插中應(yīng)用較多，扦插效果較好，若配以保水保肥能力強(qiáng)的黃心土或黃壤土等，則更能提高扦插成活率和生根率。如王俊杰等［52］用粗河砂∶黃心土=8∶2，粗河砂、黃心土3種基質(zhì)扦插香榧發(fā)現(xiàn)，粗河砂∶黃心土=8∶2的基質(zhì)上插條生根率最高，達(dá)75.8%，其次為粗河砂，為70.4%，最差的是黃心土，僅為10.2%；李柏奇［49］以河沙、黃壤土和泥炭土扦插香榧發(fā)現(xiàn)，河沙中插條生根率最高，可達(dá)68.9%。其它基質(zhì)如蛭石、珍珠巖等雖然通透性較好，但保水保肥能力不足，插條在其中雖能生根，但生根率較低。如尚進(jìn)等［42］比較了泥炭土、蛭石、園土及3種混合（泥炭土∶蛭石∶園土=3∶1∶1）共4種基質(zhì)對(duì)巴山榧插條生根的影響后發(fā)現(xiàn)，混合基質(zhì)中的插條生根率、生根數(shù)和根長(zhǎng)等都顯著優(yōu)于單獨(dú)的3種基質(zhì)，生根率可達(dá)51.1%；李鵬等［53］以5種基質(zhì)（草炭∶珍珠巖=3∶1、河沙∶園土=1∶1、珍珠巖∶園土∶草炭=1∶1∶1、河沙∶園土∶草炭=1∶1∶1、下墊粗煤渣并上鋪礱糠灰）扦插香榧，發(fā)現(xiàn)草炭∶珍珠巖=3∶1基質(zhì)中生根率最高，可達(dá)54.1%；金侯定等［41］比較了泥炭∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1、泥炭∶珍珠巖∶蛭石=1∶2∶1、泥炭∶珍珠巖∶蛭石=1∶4∶1、泥炭∶珍珠巖∶蛭石=1∶8∶1、泥炭∶珍珠巖∶蛭石∶稻殼炭=1∶3∶1∶1共5種基質(zhì)對(duì)香榧扦插的影響，發(fā)現(xiàn)泥炭∶珍珠巖∶蛭石=1∶1∶1基質(zhì)的含水量最高，在其中的插條生根率、成活率、抽稍率、側(cè)根數(shù)、生根指數(shù)都高于其它4種基質(zhì)，生根率為23.3%。

3.4 外源激素的種類、濃度和處理時(shí)間

外源激素能促進(jìn)插穗薄壁細(xì)胞內(nèi)貯藏的淀粉粒轉(zhuǎn)化為水溶性糖，提高細(xì)胞的滲透壓和吸水壓，使細(xì)胞內(nèi)水分含量迅速提高、體積膨大、皮部變軟，同時(shí)細(xì)胞中酶活性提高、呼吸作用增強(qiáng)、原生質(zhì)膜透性增加、原生質(zhì)黏性降低而流動(dòng)加快，合成和分解代謝活動(dòng)維持到較高水平。這些使原有的已成熟細(xì)胞變得活躍，重新具有分生和分化能力而形成愈傷組織［17］。因此，使用適宜的外源激素可以促進(jìn)插穗根原基的誘導(dǎo)和不定根的生長(zhǎng)，提高插條生根能力［17］。在榧樹屬植物扦插中常用的外源激素有NAA［41，43-45，49，53］、IBA［41，49，52-53］、IAA［43-44，49］、ABT［41，46］等，其中使用得較多的是NAA。所用激素濃度和處理時(shí)間因植物種類、激素種類而異，一般濃度高時(shí)處理時(shí)間短，濃度低時(shí)處理時(shí)間長(zhǎng)。如香榧插條用NAA 2 000 mg/L浸泡基端10s，生根率可達(dá)72.1%［53］，NAA 100-200 mg/L處理20 min，生根率為64.4%-55.6%［41］，6號(hào)ABT生根粉速醮后的翌年保存率為83%［41，47］，NAA 1 000-1 500 mg/L處理10 s可使生根率達(dá)70.5%-72.2%［49］；巴山榧插條用ABT 1 000 mg/L+IBA 200 mg/L處理40 min，生根率為75.5%［42］；日本榧插條用NAA 2 000 mg/L浸泡基端10 s，生根率為68.6%［44］；云南榧樹插條用1 000 mg/L NAA處理30 min，生根效果較好［45］。

3.5 扦插后管理

插條在生根前失水干枯是扦插失敗的主要原因之一［41］。因此，保水保濕并降低蒸騰作用是扦插后管理技術(shù)的關(guān)鍵。榧樹屬植物喜溫涼濕潤(rùn)，幼年時(shí)喜陰，不耐強(qiáng)光和高溫，在扦插后需注意對(duì)濕度、溫度和光照的管理。一般而言，扦插后第一次應(yīng)澆透水［45-46，49-50，53］，以固定插穗，減少插穗與基質(zhì)間的孔隙，使之緊密結(jié)合；之后在有條件時(shí)盡量使用自動(dòng)化噴灌設(shè)施，可選用全日照迷霧噴施［41，44］，濕度控制在50%-100%［41，50］；無(wú)條件時(shí)增加噴灌次數(shù)來(lái)維持較高的空氣濕度和基質(zhì)水分，保持插條活力以利于生根［45-46］。此外，插床溫度控制在20-25℃范圍內(nèi)［41，45，48，53］，4月底后需搭蔭棚或遮陽(yáng)網(wǎng)遮蔭，透光率在25%-50%［41，53］，以防止強(qiáng)光照射。

需注意的是，插穗自帶病菌或插床濕度較高時(shí)都易發(fā)生病菌感染?？蓮膬煞矫孢M(jìn)行防治：一是插條消毒滅菌處理，可用1%的高錳酸鉀溶液浸泡插條基部15 min［45］，或0.125%多菌靈（25%有效含量）浸泡插條2 min［41］，或0.5%波爾多液噴施插條［47］，或1 000倍多菌靈噴施消毒［45］；二是土壤消毒處理，可用2%硫酸亞鐵［47-48，52］、敵克松［46］或1 500倍多菌靈水溶液噴霧防治［46］。此外，每周使用多菌靈800倍液噴施一次插條［45］，也能有效預(yù)防病害。

4 榧樹屬植物無(wú)性繁殖技術(shù)研究中存在的問(wèn)題與建議

目前對(duì)榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)研究已取得較大進(jìn)展，部分技術(shù)較為成熟且在生產(chǎn)上已得到廣泛應(yīng)用，為該屬植物的保護(hù)和開發(fā)利用提供了種苗保障。然而，為更好更快地繁育出榧樹屬植物的良種壯苗，仍有部分問(wèn)題亟待解決。

4.1 組織培養(yǎng)技術(shù)和扦插技術(shù)還有待提高

在常用的3種無(wú)性繁殖技術(shù)中，嫁接技術(shù)較為成熟且應(yīng)用最廣。而組織培養(yǎng)技術(shù)和扦插技術(shù)基本上還停留在摸索階段。組織培養(yǎng)技術(shù)中的愈傷組織再分化、褐化與生根問(wèn)題，以及扦插技術(shù)中的生根率低、生根時(shí)間長(zhǎng)、扦插苗偏冠等問(wèn)題仍未有效解決。因此，未來(lái)還應(yīng)繼續(xù)探索解決這些問(wèn)題的方法，以能盡快推廣應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)和扦插技術(shù)。

4.2 除香榧外的其他榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)亟需探索

在榧樹屬的現(xiàn)存7種植物中，研究得最多、開發(fā)利用最廣的是香榧，目前在浙江諸暨等地已廣泛種植并獲得較高的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和社會(huì)效益，其嫁接、組織培養(yǎng)和扦插技術(shù)也研究得最多。而對(duì)于其他種類，特別是巴山榧樹的無(wú)性繁殖技術(shù)則研究較少。這些榧樹屬植物目前尚處于漸危至瀕危狀態(tài)，短期內(nèi)繁殖出大量種苗是保護(hù)和后期開發(fā)利用它們的重要保障。因此，未來(lái)需加強(qiáng)巴山榧樹等榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)研究，以盡快獲得大量種苗來(lái)擴(kuò)大其種群規(guī)模。

4.3 無(wú)性繁殖中的機(jī)理研究薄弱

從現(xiàn)有文獻(xiàn)看，對(duì)榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)研究多停留在憑經(jīng)驗(yàn)摸索階段，對(duì)導(dǎo)致無(wú)性繁殖難以成功的原因則少有探索。未來(lái)可對(duì)無(wú)性繁殖過(guò)程的激素作用機(jī)理和規(guī)律、酶的作用及活性變化、代謝物的產(chǎn)生與作用、促進(jìn)或抑制生根的原因、褐變的產(chǎn)生等生理、生化及分子機(jī)理進(jìn)行探索，從根本上了解榧樹屬植物無(wú)性繁殖難的原因并提出相應(yīng)解決措施。

5 結(jié)論

榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)主要有嫁接、組織培養(yǎng)和扦插，其中嫁接技術(shù)最成熟、適用植物最多、育苗效果最好。

榧樹屬植物的嫁接技術(shù)主要受接穗與砧木的親和力及活力、嫁接方法與嫁接時(shí)期的影響；組織培養(yǎng)技術(shù)主要受植物基因型、外植體類型與取材時(shí)間、基本培養(yǎng)基種類、激素種類及濃度、外源添加物、培養(yǎng)環(huán)境等的影響；扦插技術(shù)主要受插穗類型、扦插時(shí)間、扦插基質(zhì)、外源激素（包括激素的種類、濃度和處理時(shí)間）和扦插后管理等的影響。

榧樹屬植物的無(wú)性繁殖技術(shù)還有待提高，未來(lái)可重點(diǎn)關(guān)注無(wú)性繁殖機(jī)理研究，從根本上探索榧樹屬植物無(wú)性繁殖困難的原因并據(jù)此提出解決措施。