黃芪不同部位黃芪甲苷及毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定

徐文慧，常麗靜，段連政，姜柔齊，宮喜艷，陳 新，邱智東

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，在《本草綱目》中稱為“補(bǔ)藥之長”。黃芪具有補(bǔ)氣升陽，固表斂汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌等功效[2-5]。據(jù)統(tǒng)計，目前約15%臨床使用的方劑中均含有黃芪，且多作為君藥使用，2018 年國家發(fā)布了《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[6]100 首，其中10%的方劑中含有黃芪。黃芪藥材質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)系到黃芪臨床應(yīng)用的功效，因此如何提高黃芪藥材質(zhì)量的優(yōu)質(zhì)性、穩(wěn)定性和可控性是目前亟待解決的問題。

黃芪的入藥部位為地下部分的根系，其為雙子葉植物，屬于直根系。直根系由主根、側(cè)根及纖維根組成，但在實際處理黃芪藥材過程中，常稱其纖維根為須根?！吨袊幍洹?015年版中規(guī)定黃芪為春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干。黃芪中主要成分為皂苷類、黃酮類及多糖類[7-9]，其中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷為其有效成分，也作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。本次研究通過對不同產(chǎn)地、不同部位黃芪藥材中的黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量進(jìn)行檢測、對比、分析，旨在為黃芪藥材入藥部位的合理應(yīng)用提供依據(jù)，提高黃芪藥材臨床應(yīng)用的科學(xué)性、合理性，尤其為制備均一、可控的經(jīng)典名方“物質(zhì)基準(zhǔn)”提供優(yōu)質(zhì)藥材資源。

1 材料

1.1 儀器 FA2004B 型電子天平（上海天美天平儀器有限公司），安捷倫1260 高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），KQ-250B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），SY-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），DZKW-4 電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），DE-100g 萬能高速粉碎機(jī)（浙江紅景天工貿(mào)有限公司）。

1.2 試劑 黃芪甲苷對照品（批號：110781-201616，純度97.4%，中國食品藥品檢定研究院），毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（批號：111920-201606，純度97.6%，中國食品藥品檢定研究院）。甲醇（分析純，北京化工廠），乙醇（分析純，北京化工廠），正丁醇（分析純，北京化工廠），氨水（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司），甲酸（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），乙腈（色譜純，美國Fisher 公司），屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司），娃哈哈純凈水（吉林娃哈哈啟力飲料有限公司）。

1.3 藥材 不同產(chǎn)地黃芪藥材樣品10 批，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)張景龍教授鑒定均為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 的干燥根。各黃芪樣品產(chǎn)地見表1。

表1 試驗用黃芪藥材采集情況

將各產(chǎn)地黃芪樣品按各部位分開，即根頭、主根、側(cè)根、纖維根以及地下全株，分別用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，過篩，使其全部通過四號篩，將藥材粉末分別裝于自封袋中，于干燥陰涼處密封保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪甲苷的含量測定 黃芪甲苷的含量測定方法參照《中國藥典》2015 年版。

2.1.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，流動相為乙腈—水（32:68），對照品進(jìn)樣量為10 μL，20 μL，供試品進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為25 ℃。蒸發(fā)光檢測器參數(shù)：蒸發(fā)器溫度60 ℃，霧化器溫度60 ℃，載氣流速1.2SLM。

2.1.2 對照品溶液的制備 取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 按《中國藥典》2015 年版一部黃芪藥材[含量測定]項下黃芪甲苷含測供試品溶液的制備方法，制備黃芪藥材不同部位含測供試品溶液。

2.1.4 供試樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液10 μL、20 μL，供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。

2.2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定 毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測定方法參照《中國藥典》2015 年版。

2.2.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，以乙腈為流動相A，以0.2%甲酸溶液為流動相B，采用梯度洗脫：0～20 min，20%～40%A，80%～60%B；20～30 min，40%A，60%B；流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為 25 ℃，檢測波長為260 nm。

2.2.2 對照品溶液的制備 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 按《中國藥典》2015 年版一部黃芪藥材[含量測定]項下毛蕊異黃酮葡萄糖苷含測供試品溶液的制備方法，制備黃芪藥材不同部位含測供試品溶液。

2.2.4 供試樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 黃芪甲苷含量測定結(jié)果 按2.1 項下方法對10 批不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表2，測定結(jié)果顯示，其中纖維根中黃芪甲苷含量最高，而根頭中黃芪甲苷含量最低。

2.4 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定結(jié)果 按2.2 項下方法對10 批不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表3，測定結(jié)果顯示，其中主根中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高，而根頭中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最低。

表2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量測定結(jié)果（，n=6） %

表2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量測定結(jié)果（，n=6） %

表3 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定結(jié)果（，n=6） %

表3 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定結(jié)果（，n=6） %

3 分析與討論

3.1 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量相關(guān)性分析 以黃芪甲苷含量為參數(shù)對黃芪藥材不同部位，即根頭、主根、側(cè)根、纖維根及地下全株進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖1）表明黃芪藥材的不同部位黃芪甲苷含量存在顯著性差異，聚類分析的結(jié)果表明，當(dāng)歐式距離為10 時，黃芪藥材中的不同部位根據(jù)其黃芪甲苷的含量差異大致可分為三大類，其中主根、側(cè)根和地下全株為一類，而其中主根和側(cè)根的黃芪甲苷含量最為相似，而纖維根含量較高，根頭含量較低，二者與其他部位差異較大，故纖維根及根頭各為單獨一類。

3.2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量相關(guān)性分析 以毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為參數(shù)對黃芪藥材不同部位，即根頭、主根、支根、須根及全株進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖2）表明黃芪藥材的不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量存在顯著性差異，聚類分析的結(jié)果表明，黃芪藥材中的不同部位根據(jù)其毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異大致可分為三大類，其中主根、側(cè)根含量最為接近，因此為一類，而其纖維根與地下全株為一類，根頭含量較低，故根頭單獨為一類。

圖1 不同部位黃芪甲苷含量聚類分析結(jié)果

圖2 不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量聚類分析結(jié)果

3.3 討論 該次實驗中選用十批不同產(chǎn)地黃芪，包括甘肅、河北、內(nèi)蒙古等地，均為黃芪的道地主產(chǎn)區(qū)，具有一定代表性。采用HPLC-ELSD 法對十批不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明黃芪藥材各部位中主根和側(cè)根黃芪甲苷含量接近，而纖維根黃芪甲苷含量最高，約為其主根和側(cè)根的近3倍，根頭中黃芪甲苷含量最低。據(jù)研究表明，黃芪甲苷是黃芪正性肌力作用的主要活性成分[10]，其還具有廣泛的藥理作用，如調(diào)節(jié)免疫[11]、缺血保護(hù)、心臟保護(hù)、抗炎、抗氧化、抗病毒和抗腫瘤等作用[12-15]。而《中國藥典》2015 年版中規(guī)定黃芪為春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干。因此在黃芪的實際產(chǎn)地加工過程中，多采用“揉搓”等方式對黃芪原藥材進(jìn)行處理[16]，大量破壞其纖維根及側(cè)根，這就造成了黃芪甲苷的大量浪費(fèi)。因此建議能夠取下黃芪原藥材纖維根，對黃芪甲苷成分進(jìn)行提取處理，讓黃芪藥材得到合理化應(yīng)用，避免資源的大量浪費(fèi)。

另一含測指標(biāo)毛蕊異黃酮葡萄糖苷也為黃芪中主要藥效成分，其具有抗氧化、抗病毒、抗癌、降血糖、神經(jīng)保護(hù)、骨骼保護(hù)、改善疲勞等多方面的藥理作用[17-18]。根據(jù)以上對不同部位的黃芪甲苷及毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)兩含量指標(biāo)中，主根、側(cè)根均為一類，說明其含量相似度較高，雖然纖維根中黃芪甲苷含量較高，但其毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量則明顯低于主根及側(cè)根，因此若對纖維根進(jìn)行保留，在實際黃芪藥材檢驗中則會造成部分黃芪藥材毛蕊異黃酮葡萄糖苷含測結(jié)果不合格，而且由于采收方式及運(yùn)輸方式的影響，造成各批次黃芪藥材中纖維根占比差異較大，嚴(yán)重影響黃芪藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性，因此不建議在原藥材中保留纖維根。

綜上所述，在黃芪原藥材處理過程中，應(yīng)將其纖維根完整取下，并對其黃芪甲苷進(jìn)行提取加以應(yīng)用，有效避免資源浪費(fèi)。本實驗證明了黃芪藥材處理的科學(xué)性及合理性，讓黃芪藥材得到了更加合理、有效的應(yīng)用。