高效液相色譜在蜂王漿藥物殘留檢測中的應用

于 芳

新疆獸藥飼料監(jiān)察所，烏魯木齊830063

在我國，蜂王漿屬于極為常見的一類保健品，其在國際上的出口量也日益增多。然而在世界經濟全球化進程的持續(xù)深入過程中，各大進口貿易國對蜂王漿藥物殘留的檢測要求也在提升。因此，有關部門應當對蜂王漿藥物殘留問題予以高度關注，致力于提升檢測技術，確保蜂王漿順利提升出口量，促進行業(yè)發(fā)展。

1 高效液相色譜基本原理

高效液相色譜主要指高壓相層析儀，此類儀器多被用在化學以及生物學領域，其檢測系統(tǒng)最重要的組成部分包含了記錄儀、儲液器、檢測儀與色譜柱等關鍵設備[1]。把待檢樣品放進儲液器，利用高壓泵直接將其打進檢測系統(tǒng)，當樣品載入到色譜柱中，其固定相和流動相中擁有各不相同的分配系數，而樣品在通過反復吸附、解吸，最終被分離，此時液體將從色譜柱逐漸流出，同時檢測儀向記錄儀發(fā)送分離信號，進而用圖譜形式把分離數據完整地打印出來。

2 高效液相色譜在蜂王漿藥物殘留檢測中的具體應用

2.1 對蜂王漿中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測

氟喹諾酮類藥物的抗菌特性比較獨特，如今已經成為醫(yī)學領域當中效果最好的一類抗菌藥物。然而在氟喹諾酮類藥物大量使用的過程中，藥物引發(fā)的不良反應越來越突出。

有關專家借助高效液相色譜對蜂王漿內多達5種的氟喹諾酮類藥物進行檢測，其中包括恩諾沙星、氧氟沙星、丹諾沙星、諾氟沙星以及鹽酸環(huán)丙沙星。在此過程中，采用酸和乙腈相結合的方式對氟喹諾酮類藥物進行提取，并借助熒光檢測器進行檢測，檢測限分別是1 μg/kg 的丹諾沙星、5 μg/kg 的氧氟沙星以及2.5 μg/kg 的諾氟沙星、恩諾沙星、鹽酸環(huán)丙沙星，其平均的回收率為82%～98%。

2.2 對蜂王漿中氯霉素殘留的檢測

在國際上，許多國家都禁止將氯霉素應用于食用性動物，也要求不可從動物源性食品里檢出氯霉素。氣相色譜-質譜和氣相色譜在檢測蜂王漿中氯霉素時存在諸多難題，因此有關專家借助高效液相色譜-串聯(lián)質譜對蜂王漿里殘留氯霉素進行測定和凈化，隨后運用高效液相色譜-噴霧電離質譜對完成凈化的樣品進行分離，經過實踐可知，此方法能夠使樣品回收率得到極大提升。

例如在檢測過程中，提取樣品1.5 μg/kg，最終其回收率能達到92%，采用固相萃取的方法對樣品進行凈化后，運用噴霧電離對樣品進行分離，可以使回收率高達90%～110%，提升效果十分顯著。

2.3 對蜂王漿中硝基呋喃類藥物殘留的檢測

硝基呋喃類藥物屬于合成廣譜抗生素，包含了呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃西林以及呋喃它酮等。然而此類藥物致癌性極高，副作用大。

有關專家使用高效液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)對以上4 類藥物代謝物殘留進行測定：將用三氯乙酸當作蜂王漿蛋白質的沉淀劑，并且為衍生反應提供必備酸環(huán)境，運用4 種同位素進行內標，對后續(xù)諸多影響進行了補償，使定量準確性得以被有效提升。經過檢測，呋喃它酮檢測下限為0.03 μg/kg，而其余幾種藥物檢測下限達到了0.05 μg/kg，最終加標的回收率高達98%～105%。

2.4 對蜂王漿中鏈霉素殘留的檢測

蜂王漿產品當中的鏈霉素殘留問題長期困擾著有關部門。部分專家借助高效液相色譜對鏈霉素殘留進行檢查的方式主要為：

1）借助烷磺酸鈉酸溶液對樣品進行提取，在凈化后使用高效液相色譜對鏈霉素殘留進行測定，最終測得回收率達到了84%～104%。

2）借助熒光檢測儀對樣品進行檢測，檢測每一個樣品的時間都較短，卻需要添加檢測樣品數量。

3）在進行檢測前對蜂王漿樣品進行溶解，使用的溶解液為磷酸提取液，進而聯(lián)合使用熒光檢測和柱后衍生高效液相色譜的梯度洗脫對鏈霉素殘留藥物加以分析，可以讓有關藥物于短期內被有效分離，其回收率可以達到約70%，這基本與相應檢測標準相符。

2.5 對蜂王漿中大環(huán)內酯類抗生素殘留的檢測

如果人體長時間攝入有大環(huán)內酯類抗生素殘留的食物，將會導致人體內腸道細菌菌群出現(xiàn)失調的不良現(xiàn)象。有關專家借助高效液相色譜質譜/質譜的方法對蜂王漿產品內5 類大環(huán)內酯類抗生素殘留進行檢測，主要包括了交沙霉素、螺旋霉素、羅紅霉素、竹桃霉素以及泰樂菌素。在檢測過程中，專家借助三氯乙酸使樣品的蛋白質被沉淀，隨后用乙腈對上層的清液進行提取，并且運用C18SPE 小柱進行凈化處理，進而使每一種抗生素選用2 個子離子、1 個母離子開始檢測。經過檢測可知，5 類抗生素檢測下限都是20 μg/kg，且在3 個加標水平中，加標的回收率能夠達到73%～90%。

3 結語

總體而言，為了確保蜂王漿得以順利出口，有關部門應當致力于創(chuàng)新檢測方法。如今許多專家對高效液相色譜檢測效果進行深入研究，并將其逐漸應用于檢測蜂王漿藥物殘留。此方法檢測質量高、效率高且成本較低，然而實際應用依然存在問題，有關人員應當對其進行深入研究，以推動蜂王漿產業(yè)更好發(fā)展。