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    草蓯蓉環(huán)烯醚萜苷抑制人肝癌SMMC-7721細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

    2020-02-07 09:18:35董學(xué)花劉莉園全吉淑尹學(xué)哲
    健康之友·下半月 2020年1期
    關(guān)鍵詞:上皮肝癌

    董學(xué)花 劉莉園 全吉淑 尹學(xué)哲

    【摘 要】目的:研究草蓯蓉環(huán)烯醚萜苷(IGBR)抑制人肝癌SMMC-7721細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的相關(guān)機制。方法:1)將SMMC-7721細胞分為3組,對照組、模型組、IGBR組,對照組給予DMEM培養(yǎng)液,模型組給予濃度為10 ng/mL的TGF-β1造模,IGBR組給予濃度為10 ng/mL的TGF-β1誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)模型,再給予濃度為500 mg/mL的IGBR造模。2)對三組模型進行蘇木素染色觀察細胞形態(tài)變化,MTT法檢測細胞黏附能力,Western blot檢測Vimentin、Snail蛋白表達,免疫熒光檢測E-cadherin在細胞中表達情況。結(jié)果:與對照組比較,模型組TGF-β1誘導(dǎo)SMMC-7721細胞數(shù)量增多(P<0.01),與模型組比較,IGBR組細胞數(shù)量減少(P<0.01);與模型組比較,IGBR組SMMC-7721細胞黏附能力降低(P<0.01);與對照組比較,模型組Vimentin、Snail蛋白表達上調(diào)(P<0.05),與模型組比較,IGBR組Vimentin、Snail蛋白表達降低(P<0.05);與對照組比較,模型組E-cadherin熒光強度減弱,與模型組比較,IGBR組E-cadherin熒光強度增強。結(jié)論:IGBR可以抑制SMMC-7721細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,其機制與Vimentin、Snail蛋白表達降低,E-cadherin表達上調(diào)有關(guān)。

    【關(guān)鍵詞】草蓯蓉環(huán)烯醚萜苷;肝癌;上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化

    【中圖分類號】R285 【文獻標識碼】A【文章編號】1002-8714(2020)01-0123-01

    肝癌以原發(fā)性肝癌多見,肝癌發(fā)病率居第六位,死亡率為第三位[1]。目前肝癌的轉(zhuǎn)移性強,其治愈率低,效果較差,肝細胞癌的轉(zhuǎn)移與上皮-間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化密切相關(guān)[2]。EMT是上皮細胞喪失上皮特性,獲得間質(zhì)細胞表型的生物過程,包括細胞形態(tài)和標記蛋白的表達[3]。

    1 材料與方法

    1.1材料與儀器

    IGBR由延邊大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生化教研室全吉淑教授惠贈;IGBR主要由從草蓯蓉中提取,人肝癌細胞SMMC-7721細胞由中國科學(xué)院上海生命科學(xué)院研究院提供;胎牛血清美國Gibco公司;兔抗人β-actin抗體、兔抗人E-cadherin抗體和鼠抗人Vimentin、Snail抗體購于Cell Signaling Technology公司;兔二抗北京中杉金橋公司;無菌超凈臺BIOAIR公司;cytation5多功能成像;儀全自動酶標儀(美國Bio Tek公司);凝膠顯像儀美國Protein Simple公司;CO2培養(yǎng)箱Thermo公司;IX70-1120倒置顯微鏡OLYMPUS公司。

    1.2實驗方法

    1.2.1細胞培養(yǎng)? 將SMMC-7721細胞置于37 ℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。DMEM培養(yǎng)液中加入10 %胎牛血清、100 U nit/mL青霉素、100 mg/mL鏈霉素,,每2~3 d傳代一次,取對數(shù)生長期(7 d)細胞進行實驗。

    1.2.2造模方法 1)隨機分為3組,對照組、模型組、IGBR 組。對照組給予DMEM進行造模,模型組給予濃度為10 ng/mL的TGF-β1進行造模;IGBR 組給予濃度為10 ng/mL 的TGF-β1誘導(dǎo)形成EMT模型,模型成功后再給予濃度為500 mg/mL的 IGBR對其進行造模。2)評估造模成功的方法:顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)變化。IGBR 組細胞給予濃度為10 ng/mL的TGF-β1誘導(dǎo)48 h后即形成EMT模型[7]。采用Westem blot檢測EMT相關(guān)蛋白。

    1.3數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件,計數(shù)資料用%表示,采用X2分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示,采用t檢驗,實驗均重復(fù)3次,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1觀察SMMC-7721細胞形態(tài)變化

    顯微鏡觀察對照組SMMC-7721細胞貼壁生長,細胞呈圓形,多邊形;模型組SMMC-7721細胞由圓型逐漸變?yōu)殚L梭形,并集聚成團,發(fā)生纖維樣改變;IGBR組SMMC-7721細胞數(shù)量減少及發(fā)生纖維樣改變的細胞數(shù)量減少;IGBR可以抑制人肝癌SMMC-7721細胞EMT發(fā)生

    2.3檢測SMMC-7721細胞黏附能力

    SMMC-7721細胞黏附率/(%)=[(試驗組OD值/對照組OD值)-1]×100%。模型組為143%,IGBR組為87%。與模型組比較,IGBR組的粘附率明顯降低(P<0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    3 討論

    肝細胞具有高度的再生能力,對人體的穩(wěn)態(tài)和組織修密切相關(guān)。有研究證實在腫瘤惡性病變時,TGF-β1是其啟動子,TGF-β1可以誘導(dǎo)肝腫瘤細胞EMT,腫瘤細胞獲得間充質(zhì)表型,細胞的黏附能力增強。本實驗研究發(fā)現(xiàn)10ng/mL的TGF-β1可誘導(dǎo)肝腫瘤SMMC-7721細胞EMT。TGF-β1誘導(dǎo)后使細胞數(shù)量增多,細胞形態(tài)發(fā)生纖維樣改變,細胞黏附力增強。IGBR可以減少肝癌SMMC-7721細胞數(shù)量,降低細胞黏附能力,EMT標志蛋白Vimentin、Snail蛋白表達降低,E-cadherin表達上調(diào),因此,IGBR可以抑制人肝癌SMMC-7721細胞EMT。

    參考文獻

    [1] Dutta R,Mahato R I.Recent advances in hepatocellular carcinoma therapy[J].Pharmacol Ther,2017,173:106-117

    [2] Giannelli G,Koudelkova P,Dituri F,et al.Role of epithelial to mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma[J].J Hepatol,2016,65(4):798-808

    [3] 張玉龍,張悅.草蓯蓉生物學(xué)特性及人工輔助寄生技術(shù)研究[J].國土與自然資源研究,2015(03):88-90

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