中蔬四號番茄無菌系的初步建立

王愛玲 王璐 張鵬飛 田時敏 段國琪 梁哲軍

摘? ? 要： 以中蔬四號番茄種子為試材，研究不同種子浸泡時間、NaClO濃度、培養(yǎng)基和光照時間對其無菌苗生長的影響。結(jié)果表明：浸泡16 h有利于中蔬四號番茄種子萌發(fā)和成苗;10%和15%的NaClO處理的中蔬四號番茄種子萌發(fā)率和成苗率均高;接種至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子萌發(fā)率和成苗率，均為100%;暗培養(yǎng)3 d和不暗培養(yǎng)的番茄種子萌發(fā)率和成苗率相同。結(jié)合經(jīng)濟效益，綜合認為浸泡16 h的種子，用10%的NaClO處理中蔬四號番茄種子，接種至1/2MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)3 d，有利于中蔬四號番茄種子的萌發(fā)和成苗。

關(guān)鍵詞：番茄;NaClO;無菌系;建立;暗培養(yǎng)

中圖分類號：S641.2? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ?DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.12.002

Preliminary Establishment of Sterile System of Chinese Vegetable Tomato NO.4

WANG Ailing， WANG Lu， ZHANG Pengfei， TIAN Shimin， DUAN Guoqi， LIANG Zhejun

（Cotton research institute， Shanxi Agricultural University， Yuncheng， Shanxi 044000，China）

Abstract：Using the seed of Chinese vegetable tomato NO.4 as test material， the effects of different soaking time，NaClO concentration， medium and light time on the? growth of non-bacterial tomato seeds were studied. The results showed that soaking for 16 h was beneficial to seed germination and seedling formation of tomato NO.4. The germination rate and seedling rate of tomato NO.4 treated with 10% and 15%NaClO were both high. The germination rate and seedling rate of tomato seeds inoculated to 1/2MS and1/2MS+0.3 mg·L-1IBA were 100%.The germination rate and seedling rate of tomato in 3 d dark culture and no dark culture were the same. Combined with economic benefits it was concluded that soaking the seeds for 16 h and treating them with 10% NaClO and inoculation to 1/2MS medium for dark culture of 3 d were conducive to the germination and seedling formation of tomato seeds for medium vegetable NO.4.

Key words： tomato; NaClO; sterile system; set up; darkness

番茄又稱西紅柿，茄科番茄屬，是一年生或多年生的草本植物[1]。由于其用途廣、適應(yīng)性強、營養(yǎng)豐富和產(chǎn)量高等特點[2-4]，尤其因番茄中含有豐富的番茄紅素和胡蘿卜素具有氧化功能和預(yù)防衰老和癌癥等功能[5-7]，深受消費者的青睞。同時，番茄轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究，也是其育種研究者的研究方向之一。建立一套完整高效的再生體系成為其轉(zhuǎn)基因研究的前提，而建立再生體系，首先要建立高效的無菌系。目前，建立番茄無菌系的報道很多，但說法不一。同時，設(shè)施農(nóng)業(yè)的迅速發(fā)展，提高了農(nóng)民的經(jīng)濟效益。番茄種植目前以實生苗為主，容易受到干旱等危害，致使良種的抗性降低而影響其產(chǎn)量和品質(zhì)。中蔬四號番茄，無限生長型，中熟，果實成熟前呈白綠色，成熟果粉紅色，不裂果，單果重150～200 g，果面光滑，果肉厚，風(fēng)味佳，商品性好，耐貯運。本研究旨以中蔬四號番茄種子為材料，建立番茄無菌系，為其再生體系的建立提供大量的材料，以及為工廠化番茄無菌苗育苗的研究作出可靠的參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材 料

中蔬四號番茄種子由河北省青縣興運蔬菜良種繁育中心提供。

1.2 方 法

1.2.1 不同種子浸泡時間 將中蔬四號番茄種子用無菌水清洗后，用無菌水分別浸泡0 h、16 h和24 h，然后在超凈工作臺內(nèi)消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用無菌水沖洗3次，均接種至1/2MS（Murashige and Skoog medium）培養(yǎng)基。各處理每瓶4粒，重復(fù)5次。

1.2.2 不同NaClO濃度 番茄種子用無菌水清洗并用其浸泡16 h后，在超凈工作臺內(nèi)進行種子消毒，75%酒精消毒1 min，分別用濃度為2.5%，5%，10%和15%的NaClO，消毒20 min，最后用無菌水沖洗3次，均接種至1/2MS培養(yǎng)基。各處理每瓶4粒，重復(fù)5次。

1.2.3 不同培養(yǎng)基 將番茄種子用無菌水清洗后，用無菌水分別浸泡16 h，然后在超凈工作臺內(nèi)消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用無菌水沖洗3次，分別接種至1/2MS、1/2MS+0.3 mg·L-1IBA（Indo Van le-3-butyric acid）、MS和MS+0.3 mg·L-1IBA培養(yǎng)基。各處理每瓶4粒，重復(fù)5次。

1.2.4 不同光照時間 將番茄種子用無菌水清洗后，用無菌水分別浸泡16 h，然后在超凈工作臺內(nèi)消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用無菌水沖洗3次，接種至1/2MS培養(yǎng)基。一個處理暗培養(yǎng)3 d，然后正常光照;另一個處理正常光照。各處理每瓶4粒，重復(fù)5次。正常光照為每天光照16 h。

1.3 統(tǒng)計分析

用EXCEL進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計算萌發(fā)率和成苗率。

萌發(fā)率（%）=×100

成苗率（%）=×100

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種子浸泡時間對無菌苗生長的影響

由表1可知，番茄種子接種7 d后的調(diào)查結(jié)果顯示，浸泡16 h的番茄種子萌發(fā)率和成苗數(shù)，分別為100%和90%，均高于未浸泡的種子和浸泡24 h的種子。未浸泡的種子沒有萌發(fā)和成苗，且浸泡24 h的種子萌發(fā)率和成苗率，分別為85%和80%，均低于浸泡16 h的種子?？梢?，浸泡16 h的番茄種子有利于提高其萌發(fā)率和成苗率。

2.2 不同NaClO濃度對無菌苗生長的影響

由表2可知，4種NaClO濃度處理的番茄種子接種至1/2MS培養(yǎng)基上，均未出現(xiàn)污染情況。10%和15%的NaClO處理的種子萌發(fā)率和成苗率均相同，分別為100%和90%。2.5%和5%的NaClO處理的種子萌發(fā)率和成苗率也均相同，分別為95%和85%，且均低于10%和15%的NaClO處理的種子萌發(fā)率和成苗率。可見，10%和15%的NaClO處理種子有利于其萌發(fā)和成苗。

2.3 不同培養(yǎng)基對無菌苗生長的影響

由表3可知，接種至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1

IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子萌發(fā)率和成苗率高于接種至MS和MS+0.3 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子。接種至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子萌發(fā)率和成苗率，均為100%。接種至MS和MS+0.3 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子萌發(fā)率和成苗率，均為90%。

2.4 不同光照時間對無菌苗生長的影響

表4可以看出，暗培養(yǎng)3 d和不暗培養(yǎng)的番茄種子萌發(fā)率和成苗率相同，均為90%，無差異。

3 結(jié)論與討論

番茄育苗，種子都需要浸泡，促使其露白，提高其成苗率。浸泡的種子不僅成苗率高，而且出苗整齊。賴呈純等[8]認為‘農(nóng)科180番茄種子浸泡10～15 h后，可以獲得整齊的無菌苗，未浸泡的番茄種子，出苗的整齊度差。本試驗結(jié)果表明，浸泡16 h的番茄種子有利于提高其萌發(fā)率和成苗率。

適宜的NaClO濃度可以徹底對番茄種子進行消毒。NaClO濃度過低，不能有效的種子消毒，污染率高，NaClO濃度過高，雖然可以有效的做到種子消毒，但是有可能傷害種子，獲得畸形苗，影響其萌發(fā)和成苗，不能大量獲得正常的番茄無菌苗。賴呈純等[8]認為10%的NaClO，消毒20 min，可以獲得整齊的無菌苗。同時，番茄研究者[9-13]也認為NaClO和HgCl2相互配合對其進行消毒效果最佳。本試驗結(jié)果表明，10%和15%的NaClO處理種子有利于其萌發(fā)和成苗。工廠規(guī)?；?，考慮成本問題，認為10%的NaClO處理種子有利于其萌發(fā)和成苗。

不同培養(yǎng)基對番茄種子萌發(fā)和成苗也有一定影響。種子中有激素，適宜的濃度激素有利于幼苗生長。本試驗結(jié)果表明，1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培養(yǎng)基上的番茄種子萌發(fā)率和成苗率均為100%，可見番茄無菌苗的生長，不添加激素也可以。因此認為1/2MS培養(yǎng)基最適宜番茄種子萌發(fā)和成苗。

消毒后并接至培養(yǎng)基的種子，未萌發(fā)之前，光照不是必要條件。本試驗結(jié)果表明，暗培養(yǎng)3 d和不暗培養(yǎng)的番茄種子，萌發(fā)率和成苗率都相同?？紤]成本問題，暗培養(yǎng)3 d適宜番茄種子的萌發(fā)和成苗。

一套經(jīng)濟且實用的番茄無菌系，可以為其轉(zhuǎn)基因研究和工廠規(guī)?；N苗生產(chǎn)提供大量整齊的番茄苗材料。綜合經(jīng)濟效益方面考慮，本試驗認為，浸泡16 h的種子，用10%的NaClO處理中蔬四號番茄種子，接種至1/2MS培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)3 d，有利于中蔬四號番茄種子的萌發(fā)和成苗。

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