青龍衣化學成分的研究

周媛媛，宋紅娟，李 健，郭 爽，王 瑩，高蕙蕊，劉 艷，劉雨新，張曉娟，付起鳳

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.哈爾濱市中醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150599；3.黑龍江中醫(yī)藥大學學術理論研究部，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江中醫(yī)藥大學實驗中心，黑龍江哈爾濱 150040）

青龍衣為胡桃科胡桃屬植物核桃楸Juglans mαndshuricaMaxim 的未成熟外果皮。我國現(xiàn)有的胡桃屬植物主要有8 種［1］，其中藥用品種主要為核桃、核桃楸2 種。藥材的枝、葉、樹 皮、根 皮、堅果內隔、外果皮等部位均可入藥［2］。其不僅具有補氣益血、調燥化痰、益智健腦等保健功能，還具有治療皮膚病、子宮脫垂、高血壓、糖尿病等多種臨床病癥的作用［3-5］，尤其是該屬植物顯著的抗腫瘤作用已經(jīng)成為醫(yī)藥領域的研究熱點。目前研究報道表明青龍衣抗腫瘤作用尤為顯著，且該資源每年以廢物形式大量丟棄不僅污染環(huán)境，也不利于藥用資源合理利用。本實驗對青龍衣開展系統(tǒng)成分研究，從中分離得到14 個化合物，其中化合物1～5、7～8、10、12～14 為首次從青龍衣中分離得到。

1 材料

NE-1101 型旋轉蒸發(fā)儀（日本東京理化株式會社）；AV-400 型超導核磁共振儀（美國Bruker 公司）；Q-TOF（ESI）高分辨質譜儀（美國Waters公司））；Sephadex LH-20（瑞 士Pharmacia 公司）；Anton Paar-MCP 600 旋光儀（奧地利Anton Paar 公司）；柱色譜硅膠（200～300 目）和薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）；515-2414 半制備型高效液相色譜（美國Waters 公司）。用于半制備液相的試劑為色譜純；其余均為分析純。

青龍衣藥材于2017 年7 月采自吉林省長白山地區(qū)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院王振月教授鑒定為胡桃科植物核桃楸Juglαns mαndshuricαMaxim 的未成熟外果皮，標本（20170715）保存于黑龍江中醫(yī)藥大學中藥化學教研室。

2 提取與分離

將陰干的青龍衣藥材（10.0 kg）適當粉碎，以8 倍量95%乙醇溶液室溫浸泡7 d，收集濾液，上述操作重復3 次，減壓濃縮得到浸膏（695.5 g）。浸膏加適量蒸餾水分散后，二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和的正丁醇多次萃取，得到二氯甲烷萃取部位浸膏（270.2 g）、乙酸乙 酯萃取 部位浸 膏（180.6 g）。

取二氯甲烷組分，采用硅膠柱層析法以石油醚-乙酸乙酯（100∶0～0∶100）梯度洗脫，每一流份經(jīng)薄層檢識后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.7。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色 譜，石油 醚-乙酸乙酯（100∶0～20∶1）系統(tǒng)進行梯度洗脫，重結晶，分離得化合物14（14.2 mg）、13（10.5 mg）。Fr.3經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯（50∶0～10∶1）梯度洗脫，分離得化合物11（5.8 mg）、10（13.6 mg）。Fr.5 經(jīng)硅膠 柱色譜，石油醚-乙酸乙 酯（20∶1～0∶1）梯度洗脫，Sephadex LH-20（甲醇-水=80∶20），分離得化合物4（12.6 mg）。

取乙酸乙酯組分，通過硅膠柱層析法以二氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，每一流份經(jīng)薄層檢識后相近者合并，共得到Fr.1～Fr.5。Fr.1 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶1～15∶1）梯度洗脫，分離得化合物12（13.1 mg）、9（8.9 mg）、8（10.2 mg）、7（6.7 mg）。Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（30∶1～20∶1）梯度洗脫，Sephadex LH-20（甲醇），分離得化合物6（14.3 mg）、5（13.2 mg）。Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脫，分離得化合物3（8.2 mg）、2（9.5 mg）。Fr.5 經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（15∶1～0∶1）梯度洗脫，結合反相ODS 柱色譜（甲醇-水=60∶40）和半制備型HPLC（甲醇-水=50∶50）分離得化合物1（4.5 mg）。

3 結構鑒定

化合物9：淡黃色油狀物質。HR-ESI-MSm/z：327.157 8 ［M+H］+，分子式 C20H22O4。IH-NMR（CDCl3，400 MHz）δ：7.08（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′），6.81（1H，d，J=8.0 Hz，H-5″），6.78（1H，d，J=16.6 Hz，H-5），6.71（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′），6.64（1H，brs，H-2″），6.63（1H，brd，J=8.0 Hz，H-6″），6.06（1H，d，J=16.6 Hz，H-4），5.82（1H，brs，4′-OH），5.57（1H，brs，4″-OH），3.82（3H，s，3-OCH3），2.83（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），2.82（2H，t，J=7.2 Hz，H-2），2.66（2H，m，H-7），2.50（2H，m，H-6）；13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ：200.3（C-3），153.6（C-4′），146.8（C-5），146.3（C-3″），143.4（C-4″），132.6（C-1′），132.6（C-1″），130.8（C-4），129.3（C-2′，C-6′），120.7（C-6″），115.5（C-3′，C-5′），114.2（C-5″），110.7（C-2″），56.1（3″-OCH3），42.1（C-2），34.8（C-6），34.2（C-7），29.6（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為1-（4′-羥基苯 基）-7-（3″-甲基苯 基-4″-羥基苯基）-4-烯-3-庚酮。

4 討論

二芳基庚烷類化合物是2 個不同程度氧化或取代的芳香環(huán)，被一具有7 個碳原子的氧化脂肪鏈通過1，7-位連接形成的一類化合物的總稱。由于其特殊的結構特征和抗腫瘤的藥理活性較為顯著，近年來受到國內外學者的廣泛關注［17-18］。目前為止，課題組在青龍衣中發(fā)現(xiàn)的二芳基庚烷類多為環(huán)醚型（化合物1、4、10～11），除此之外還有直線型（化合物5～7、9、12）和大環(huán)聯(lián)苯型（化合物8、12），以期為進一步開展構效關系以及抗腫瘤藥理活性研究奠定了藥效物質基礎。