影響動物疫病實驗室檢測結(jié)果的因素分析

文│辛光英 李穎（山東省青島市黃島區(qū)動物疫病預(yù)防與控制中心）

實驗室檢測是動物疫病防治工作的重要環(huán)節(jié)，不僅能檢測動物免疫抗體水平，還能發(fā)現(xiàn)早期動物感染病原，保證動物產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量。但在動物疫病實驗室檢測過程中，實際結(jié)果與檢測結(jié)果可能存在誤差，主要因素如下。

一、檢測人員因素

檢測人員是影響實驗室檢測結(jié)果的重要因素。檢測人員的文化水平、專業(yè)技術(shù)水平、工作熟練程度、對待工作的態(tài)度以及分析問題、解決問題的能力，直接影響到實驗室檢測結(jié)果的準確度。近年來，國家級、省級、區(qū)級獸醫(yī)主管部門都非常重視檢測人員的檢測能力，每年都會組織獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室進行能力比對，以查找出結(jié)果偏差的原因，并及時進行培訓。

《質(zhì)量手冊》等相關(guān)文件規(guī)定，檢測人員需有大專以上文化程度，有從事檢測控制的相關(guān)專業(yè)知識，了解有關(guān)標準、計量、質(zhì)量管理及相關(guān)法律法規(guī)知識，并經(jīng)培訓考核合格后持證上崗。例如血凝和血凝抑制試驗，人員倍比稀釋至關(guān)重要，直接影響結(jié)果，稀釋的均勻和不均勻，效價會有所不同，配制抗原的比例也就不同，結(jié)果就會出現(xiàn)偏差。

二、檢測樣品因素

動物檢測樣品有血清、抗凝血、組織、排泄物、分泌物等。要求血清無溶血、無膠凍以及新鮮，否則影響抗體檢測結(jié)果。采樣方法、采樣部位、采樣數(shù)量、采樣時間和樣品保存質(zhì)量直接決定檢測結(jié)果的準確性和結(jié)論的科學性。采集的樣品要無菌且避免交叉感染，采集的樣品必須有代表性，采取的臟器組織應(yīng)為病變明顯部位。

例如檢測免疫動物抗體水平時，多采用靜脈采血，要在免疫14天或21天以后采血；檢測禽流感、新城疫病原時，多采集咽喉、泄殖腔棉拭子或者采集新鮮糞便，要保存在濃度10%甘油的PBS溶液中；檢測非洲豬瘟病毒實時熒光PCR試驗時，采集的全血需放在抗凝管中，搖勻避免凝固，如要采集組織器官，則要采集脾臟等病變明顯部位；檢測一些寄生蟲疫病時，需采集腸道或者糞便，均需冷藏保存，及時送檢。

三、檢測試劑因素

檢測樣品所用的試劑盒，因生產(chǎn)廠家、批次等不同，試劑的穩(wěn)定性、敏感性、特異性等會有所不同，并且同一廠家的不同品種或者同一廠家的不同批次質(zhì)量也會有所不同，所以檢測結(jié)果也會有所不同。實驗室要求做好標準試劑驗收記錄，從試劑的效價評定、生產(chǎn)廠家、運輸條件、包裝等方面進行驗收，驗收合格后方可入庫使用。這就需要檢測人員提高鑒別分析能力，選擇一些規(guī)范化、口碑好的試劑。

四、儀器設(shè)備的因素

不同試驗所用的儀器設(shè)備不相同，儀器設(shè)備因功能、生產(chǎn)廠家、型號、技術(shù)參數(shù)等不同，檢測性能和誤差都會有差別。例如移液器有不同的量程，要根據(jù)試驗的要求選擇量程范圍，否則不僅會損壞移液器，還會產(chǎn)生較大的誤差。冰箱分超低溫、低溫、冷藏；離心機有高速、低速、常溫、低溫。要根據(jù)試驗要求選擇合適的儀器，否則會破壞樣品和試劑，導(dǎo)致試驗結(jié)果有較大差別。

一些精密儀器需要的生產(chǎn)廠家比較嚴格，有的需要進口品牌，例如移液器一般選擇德國、芬蘭等進口的，用起來輕便、順滑且精準度比較高。

五、檢測方法的因素

不同的試驗檢測方法和操作規(guī)范不相同。常用的檢測方法有血凝和血凝抑制試驗、液相阻斷ELISA試驗、熒光RT-PCR試驗、瓊脂擴散試驗和病毒中和試驗等。不同的檢測項目所用的檢測方式不同，而檢測用的標準和操作規(guī)程也不同，即使是相同的檢測項目，使用的檢測手段也有差異，所以檢測的結(jié)果和準確性也存在差異。例如檢測禽流感免疫效果，要選擇血凝抑制試驗，因為檢測的是禽流感抗體水平；檢測是否感染禽流感病毒，要選擇禽流感病毒熒光RT-PCR，檢測的是病原。檢測口蹄疫免疫效果要選擇口蹄疫抗體液相阻斷ELISA試驗，而口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC單抗阻斷ELISA抗體試驗檢測的是存不存在感染抗體，最終確診是否感染口蹄疫病毒要用熒光RT-PCR試驗。所以要選擇正確的檢測方法，以免影響結(jié)果。

六、環(huán)境因素

環(huán)境因素主要指試驗過程中溫度、濕度和試驗環(huán)境的清潔度等。例如血凝和血凝抑制試驗、液相阻斷ELISA試驗等都要求室溫，溫度過高或過低都會影響試驗的反應(yīng)速度甚至嚴重時會影響試驗結(jié)果。如果試驗環(huán)境被污染，就易出現(xiàn)一些假陽性或假陰性，所以在試驗中要減少污染的可能性，同時防治氣溶膠的產(chǎn)生，試驗完畢及時通風、消毒。

綜上所述，影響動物疫病實驗室結(jié)果準確性的因素比較多，需實驗人員認真閱讀每種試劑盒的說明書，對試驗中出現(xiàn)的問題認真分析，找出預(yù)防措施，加強培訓學習，不斷提升自身的專業(yè)技能水平，以促進畜牧業(yè)的健康發(fā)展。