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    UPLC-MS/MS 法檢測黃鱔中氯霉素類藥物殘留探析

    2020-01-12 12:11:50于芳
    中國畜禽種業(yè) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:錐孔氯霉素乙腈

    于芳

    (新疆獸藥飼料監(jiān)察所 830063)

    1 試驗(yàn)材料

    1.1 樣品選取

    本次試驗(yàn)中選取的黃鱔樣品來源于當(dāng)?shù)靥K果超市,經(jīng)過12d 的人工養(yǎng)殖,在養(yǎng)殖期間只投喂蚯蚓等飼料,養(yǎng)殖采用的水源經(jīng)過陽光暴曬清除內(nèi)部氯氣,經(jīng)過12d 后取出,將可以食用的部分肌肉粉碎,放入-20℃的冰箱中冷藏。

    1.2 試劑制備

    本次試驗(yàn)使用的對照品中氯霉素為K0350706,濃度為99.5%;甲砜霉素為K0241009,濃度為99.7%;氟苯尼考為C13665000,濃度為99.0%;在本次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品中,d3-甲砜霉素為T344163,劑量為1mg;d3-氟苯尼考型號為F405751,劑量為1mg;標(biāo)準(zhǔn)液d5-氯霉素XA111200AC,劑量為100μg/ml;乙腈與甲醇均為色譜純;無水硫酸鈉為分析純;氯霉素類藥物的儲備液均稱取適量的氯霉素、氟苯尼考與甲砜霉素混合,經(jīng)過甲醇溶解定容后配制出100μg/ml 的儲備液,放置在-20℃下存儲;氯霉素工作液的制備:采用100μg/ml 的氯霉素藥物標(biāo)準(zhǔn)液,經(jīng)過甲醇稀釋后配制成標(biāo)準(zhǔn)工作液,放置在4℃溫度下存儲[1]。

    1.3 儀器

    本次試驗(yàn)主要采用高速冷凍離心機(jī)、超聲波清洗器、渦旋混合儀、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀、氮吹機(jī)。

    2 試驗(yàn)方法

    2.1 液相條件

    色譜柱采用尺寸為2.1mm×50mm,直徑為1.7,型號為C18 柱;流速為0.4ml/min;柱體溫度控制在40℃左右;進(jìn)樣量為10μL;其流動相條件如下:當(dāng)時間為0 時,水含量為83%,乙腈含量為17%;當(dāng)時間為3.0min 時,水含量為17%,乙腈含量為83%;當(dāng)時間為4.0 時,水含量為17%,乙腈含量為83%;當(dāng)時間為4.1 時,水含量為83%,乙腈含量為17%;當(dāng)時間為5.0 時,水含量為83%,乙腈含量為17%。

    2.2 質(zhì)譜條件

    離子源采用電噴霧類型;毛細(xì)管電壓為2500V;監(jiān)測模式采用多反應(yīng)、負(fù)離子模式;錐孔電壓為40V;離子源的溫度在500℃左右,對不同分析物的錐孔電壓、駐留時間、碰撞能量與離子對指標(biāo)進(jìn)行分析,結(jié)果如下:對氯霉素分析時母離子為321m/z、子離子為152m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為18eV、錐孔電壓為40V;對甲砜霉素進(jìn)行分析時,母離子為354m/z、子離子為185m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為23eV、錐孔電壓為40V;對氟苯尼考分析時,母離子為356m/z、子離子為336m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為9eV、錐孔電壓為40V;對d3 甲砜霉素分析時,母離子為357m/z、子離子為188m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為22eV、錐孔電壓為40V。

    2.3 穩(wěn)定性

    檢測儲備液時,取100μg/ml 氯霉素儲備液,放置在-20℃下存儲,分別存儲0、3、6 月去除,將其稀釋為濃度較低的工作液,即20μg/ml,將劑量為100μL 的內(nèi)標(biāo)工作液混合后進(jìn)行監(jiān)測,6 個月后檢驗(yàn)其穩(wěn)定性。

    2.4 檢測限與定量限

    分別將3 種藥劑添加到空白餌料中,每個濃度重復(fù)5 次;檢測限為3 倍信噪比濃度;定量限為10 倍信噪比濃度[2]。

    2.5 回收率與精密度

    將高、中、低3 個濃度的混合溶液加入空白餌料中,通過加標(biāo)回收試驗(yàn)的方式,每個濃度采用5 個相同的樣品,連續(xù)測定3d,對回收率與精密度進(jìn)行計算。

    3 試驗(yàn)結(jié)果

    3.1 穩(wěn)定性

    將氯霉素藥物儲備液分別放置0 月、3 月與6 月去除,從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知,該藥物在-20℃環(huán)境下較為穩(wěn)定,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 數(shù)值低于20%。由此可見,此類藥物在此溫度下至少可存儲6 個月。通過凍融穩(wěn)定性試驗(yàn)可知,經(jīng)反復(fù)凍融后,濃度穩(wěn)定性較強(qiáng),精密度RSD 的數(shù)值不超過15%,可見該樣品可以冷凍存儲,且不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生不良影響。

    3.2 檢測限與定量限

    通過檢測結(jié)果可知,甲砜霉素、氯霉素與氟苯尼考在黃鱔中的檢測限為0.1μg/ml,定量限為0.3μg/ml。其中氯霉素檢測限與歐盟標(biāo)準(zhǔn)相比較低,另外兩種與規(guī)定相比均低于百倍以上,滿足藥物殘留靈敏度的要求。

    3.3 精密度與回收率

    試驗(yàn)結(jié)果表明,黃鱔中氯霉素為0.3、0.45、0.6μg/kg 時,回收率為92.89%~111.26%;氟苯尼考的添加量為50、100、150μg/kg 時,回收率為86.76%~107.30%;甲砜霉素的添加量在25、50、75μg/kg 時,回收率為96.21%~104.14%。從整體來看,上述3 種藥物的回收率均值處于86.76%~111.26%,日精密度在2.16%~13.66%。

    4 結(jié)語

    綜上所述,UPLC-MS/MS 法的應(yīng)用無需使用較多樣品與溶劑,且步驟較為簡便,檢測周期較短,色譜與質(zhì)譜中分離能力、離子化特性較為相似,可有效降低基質(zhì)效應(yīng)的影響,可見UPLC-MS/MS 法具有較強(qiáng)的可靠性。

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