聚類肽高分子材料結(jié)構(gòu)與應(yīng)用

田 新

（新疆輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830021）

1 類肽結(jié)構(gòu)的研究進(jìn)展

N-取代的甘氨酸的低聚物，也即類肽代表了用于研究生物分子現(xiàn)象的一類通用的擬肽類高分子材料。類肽具有吸引力的原因至少有3個(gè)，其中包括：①它們易于合成；②它們的蛋白水解穩(wěn)定性；③可以納入其酰胺側(cè)鏈的多種非天然官能團(tuán)。這些特征促使類肽作為探測多種生物過程的工具和作為治療劑的發(fā)展，最近的例子包括類肽衍生的轉(zhuǎn)錄因子模擬物，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用抑制劑，抗微生物劑，肺表面活性劑模擬物。這些研究中的大多數(shù)是類肽功能與類肽結(jié)構(gòu)之間的聯(lián)系[1]。

對于某些應(yīng)用，類肽折疊得很好，這對于類肽的活性是必不可少的。結(jié)構(gòu)上，與α 肽主鏈相反，類肽主鏈既缺乏手性中心又沒有氫鍵供體，與簡單的叔酰胺異構(gòu)體相結(jié)合，將會(huì)降低類肽鏈的構(gòu)象剛度。實(shí)施更可預(yù)測的類肽折疊的一種策略是將手性中心或氫鍵供體“重新安裝”到類肽側(cè)鏈中，前一種方法對于類肽螺旋的構(gòu)建特別有用[2]。即，將R-手性包含在內(nèi)，類肽中的芳族或R-手性脂肪族酰胺側(cè)鏈可增強(qiáng)螺旋構(gòu)象，這使人聯(lián)想起I 型多脯氨酸螺旋，每匝具有所有順式酰胺鍵和三個(gè)殘基。

類肽螺旋的合成已經(jīng)被很多研究所報(bào)道，并已通過計(jì)算技術(shù)，圓二色性（CD）光譜，X 射線晶體學(xué)和2D NMR 進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。大多數(shù)類肽螺旋是主要由（S）-N-（1-苯乙基）甘氨酸單元組成（Nspe），通常通過診斷性CD 光譜進(jìn)行識(shí)別，其特征在于192、202和218nm 處的峰。通過分析各種長度和組成的Nspe 型寡聚體，類肽螺旋的合成逐漸形成了一套預(yù)測規(guī)則。簡而言之，包含50%R-手性側(cè)鏈的低聚物或沿著螺旋的縱向面延伸的“芳族面”（即，以3次折疊為一個(gè)周期的模式的芳族側(cè)鏈）預(yù)計(jì)會(huì)形成最穩(wěn)定的螺旋，并且當(dāng)C 末端殘基為R-手性且寡聚物長度超過12個(gè)殘基時(shí)，類肽螺旋將進(jìn)一步穩(wěn)定。在最近設(shè)計(jì)的各種天然R 肽螺旋的擬肽模擬物中，這些規(guī)則已被證明是有價(jià)值的[3]。

通過仔細(xì)研究類肽螺旋，Barron 及其同事發(fā)現(xiàn)了一種新的類肽結(jié)構(gòu)—螺紋環(huán)結(jié)構(gòu)，到目前為止，類肽螺旋是類肽中唯一已知的定義二級結(jié)構(gòu)，這一發(fā)現(xiàn)意義重大。發(fā)現(xiàn)R-手性芳族側(cè)鏈的擬肽九聚體（Nspe）9（三氟乙酸鹽）在乙腈中顯示出獨(dú)特的CD 標(biāo)記，在203nm 處有一個(gè)明顯強(qiáng)度的寬峰。進(jìn)一步分析的結(jié)果表明它是一種新型類肽環(huán)狀結(jié)構(gòu)。通過從主鏈羰基到N 末端仲銨的三個(gè)分子內(nèi)氫鍵和從主鏈羰基到C 末端伯酰胺的一個(gè)分子內(nèi)氫鍵使這一類肽環(huán)狀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。與類肽螺旋相反，螺紋環(huán)結(jié)構(gòu)具有四個(gè)順式和四個(gè)反酰胺鍵。由于只有Nspe 九聚體和具有緊密相關(guān)的R-手性殘基的九聚體能夠形成帶螺紋的環(huán)，因此這種低聚物的長度似乎可以使其自身緊密并形成四個(gè)分子內(nèi)氫鍵。的確，Nspe 五聚體到八聚體，到更長的Nspe 低聚物，都顯示出更高傾向的螺旋形成過程，這表明對于九個(gè)殘基長的類肽來說，形成螺紋環(huán)所必需的分子接觸，也即分子內(nèi)氫鍵方向和數(shù)目都是獨(dú)特的。值得注意的是，可以通過添加能夠破壞分子內(nèi)氫鍵的溶劑（例如甲醇）將擬肽九聚體（Nspe）9中的帶螺紋的環(huán)轉(zhuǎn)化為螺旋。

除了帶螺紋的環(huán)和螺旋以外，最近還報(bào)道了類肽中的旋轉(zhuǎn)模體，可以通過大環(huán)化或通過引入誘導(dǎo)三唑的單元來實(shí)現(xiàn)。這些模體無疑擴(kuò)大了已知的類肽結(jié)構(gòu)的范圍。但是，還需要進(jìn)行更多的研究，以擴(kuò)大對類肽折疊成螺旋，環(huán)，匝和其他距離所必需的分子水平相互作用的理論研究。

2 聚類肽的功能研究

2.1 阿爾茲海默癥的診斷

阿爾茨海默?。ˋD）是一種神經(jīng)退行性疾病，它是最常見的癡呆癥，估計(jì)全世界有1 300萬人受到影響。雖然這種疾病的確切機(jī)制尚不完全清楚，但β 淀粉樣蛋白（Ab）的聚集似乎起著重要作用。不同長度的Ab 肽（通常為1-40和1-42）是淀粉樣前體蛋白的裂解產(chǎn)物，在AD 大腦中聚集并形成不溶性斑塊。這些斑塊的鑒定以及神經(jīng)纖維纏結(jié)和神經(jīng)元丟失是目前對AD 的明確且唯一被完全接受的診斷依據(jù)。然而，最近的報(bào)告表明，較小的可溶性Ab 寡聚體更可能是疾病的致病因子。然而，寡聚體參與AD 發(fā)病機(jī)制的確切身份仍然是個(gè)謎，它的化學(xué)成分也沒有明確的定義。AD 的一個(gè)統(tǒng)一特征是腦實(shí)質(zhì)中存在含有Ab42的斑塊。此外，Ab42似乎更容易產(chǎn)生淀粉樣蛋白，并且在斑塊中發(fā)現(xiàn)的頻率更高，盡管它的生理濃度要低得多。已知幾個(gè)與家族型AD 相關(guān)的早老素突變可增加Ab42裂解產(chǎn)物的產(chǎn)生，進(jìn)一步的研究證明了這種Ab 肽在發(fā)病機(jī)制中的作用。因此，一般認(rèn)為介導(dǎo)AD 的細(xì)胞毒性寡聚物由Ab42肽組成[4]。

雖然這種體內(nèi)生成的寡聚物的精確構(gòu)象尚不清楚，但一些證據(jù)表明聚集蛋白具有許多結(jié)構(gòu)特性。例如，由不同蛋白質(zhì)組成的淀粉樣纖維具有相似的交叉β 結(jié)構(gòu)，允許結(jié)合許多化合物，如硫黃素T 和剛果紅來進(jìn)行檢測。因此，Zuckermann和他的同事開發(fā)了一系列聚類肽，用于從血漿中選擇性捕獲Ab42，從而達(dá)到阿爾茲海默癥的早期診斷。Ab 寡聚物的捕獲劑的合成是通過馬來酰亞胺化學(xué)法將巰基化ASR1衍生物與Dynal M270羧基微珠進(jìn)行化學(xué)偶聯(lián)，生成聚集物專用試劑1（ASR1）微球從而得到的。ASR1是一種聚集特異性試劑，它優(yōu)先結(jié)合聚集蛋白而不是單體蛋白質(zhì)。ASR1也是一種聚類肽，含有N-取代甘氨酸的類肽組分，已證明其對體液中常見酶的蛋白水解消化具有抵抗力。ASR1序列來源于一種朊體肽，該肽具有很強(qiáng)聚集的朊體的能力。ASR1可以從含有過量正常折疊的朊體的溶液中捕獲微小數(shù)量的不溶性聚集寡聚物。由于淀粉樣聚集物具有相似的交叉β-片狀結(jié)構(gòu)，它們共享由淀粉樣結(jié)合分子如剛果紅和硫黃素T 以及構(gòu)象特異性抗體所共同識(shí)別的構(gòu)象表位。結(jié)果表明，ASR1能識(shí)別聚集蛋白的常見結(jié)構(gòu)表位，而不是朊體聚集體特有的表位。

2.2 表面活性蛋白C的仿生合成

自從外源性肺表面活性物質(zhì)廣泛應(yīng)用于新生兒呼吸窘迫綜合征以來，早產(chǎn)兒的存活率和呼吸系統(tǒng)的發(fā)病率都有了顯著的提高。盡管動(dòng)物源性表面活性劑制劑有效，但在使用過程中仍存在一些問題和困難。這促使了對合成表面活性劑制劑的研究。然而，到目前為止，臨床上沒有一種合成制劑能像天然材料那樣有效。這很大程度上是因?yàn)橐郧暗暮铣芍苿┤狈Ψ伪砻婊钚晕镔|(zhì)系統(tǒng)疏水蛋白SP-B 和SP-C 的類似物，這兩種蛋白是關(guān)鍵的功能成分。因此，最近的研究已經(jīng)轉(zhuǎn)向開發(fā)新一代的合成仿生表面活性劑，這種表面活性劑含有合成類肽和模擬肺表面活性物質(zhì)的疏水蛋白部分。

盡管SP-C 的結(jié)構(gòu)看似簡單，但由于其極強(qiáng)的疏水性和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性，使有效的SP-C 類似物的制備變得非常復(fù)雜。從大自然中汲取靈感，兩種有希望的仿生方法已經(jīng)導(dǎo)致了設(shè)計(jì)合理的生物聚合物的產(chǎn)生，這些聚合物重現(xiàn)了SP-C 的許多分子特征。第一種方法利用詳細(xì)的SP-C 構(gòu)效關(guān)系和氨基酸折疊傾向來創(chuàng)建基于肽的類似物SP-C33。在SPC33中，有問題的亞穩(wěn)聚纈氨酸螺旋被結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的聚亮氨酸螺旋取代，并包含一個(gè)位置良好的正電荷以防止聚集。SP-C33結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，消除了天然蛋白的締合傾向。第二種方法遵循相同的設(shè)計(jì)考慮，但使用非天然、多取代的甘氨酸或“類肽”支架來規(guī)避與SP-C相關(guān)的困難。通過在非天然主鏈中加入獨(dú)特的仿生側(cè)鏈，類肽模擬獲得了SP-C 的疏水特性及其螺旋結(jié)構(gòu)二級結(jié)構(gòu)。盡管結(jié)構(gòu)上存在差異，但SP-C33和SP-C 蛋白樣蛋白模擬物都捕捉到了SP-C 的許多必要特征。在表面活性劑環(huán)境中，這些類似物還可以復(fù)制功能性仿生表面活性劑治療所需的許多關(guān)鍵表面活性，同時(shí)克服與天然蛋白質(zhì)相關(guān)的困難。這些仿生表面活性劑制劑具有更好的穩(wěn)定性、更大的生產(chǎn)潛力和消除可能的致病性污染，不僅為改善呼吸窘迫綜合征的治療提供了潛力，而且也為治療其他呼吸相關(guān)疾病提供了機(jī)會(huì)[5]。

3 展望

本文綜述了一類新型非天然高分子材料聚類肽的結(jié)構(gòu)及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。與多肽和其他生物衍生聚合物相比，聚類肽在穩(wěn)定性、加工性和合成效率方面具有顯著優(yōu)勢。聚類肽是一種側(cè)鏈控制的聚合物體系，它可以生成具有廣泛化學(xué)和物理性質(zhì)的聚合物。由于合成類肽缺乏手性和主鏈中的氫鍵供體，因此只能提供簡單和自由的設(shè)計(jì)，使其成為研究不同原理和探索新材料性能的理想快速成型系統(tǒng)。同時(shí)類肽也是一種仿生材料，能夠在水中折疊成特定的蛋白樣形狀，并表現(xiàn)出強(qiáng)大的生物活性。聚類肽結(jié)合了蛋白質(zhì)和聚合物的優(yōu)點(diǎn)，是發(fā)現(xiàn)高功能生物材料的理想選擇。

聚類肽的一個(gè)主要特征是，亞單體合成方法允許從一組極為不同的側(cè)鏈官能團(tuán)（從容易獲得的試劑中衍生）高效地合成具有精確單體序列的高分子聚類肽材料。精確的序列控制和在特定位置引入大量功能單體的能力使得通過改變單個(gè)側(cè)鏈就可以方便地控制和微調(diào)分子內(nèi)和分子間的相互作用。這些特性使聚類肽成為醫(yī)學(xué)研究中一個(gè)新的平臺(tái)。