南、北五味子“辨色論質(zhì)”機(jī)制及其定性識(shí)別模型研究

焦美鈺 佟月 吳浩善 康廷國 張慧

摘 要 目的：探討南、北五味子藥材顏色判斷質(zhì)量（“辨色論質(zhì)”）的內(nèi)在機(jī)制，構(gòu)建基于顏色量化值的定性識(shí)別模型。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定39批藥材樣品中6種有效成分的含量，采用色差儀測(cè)定其三色空間值[明暗程度值（ΔL*）、紅綠色色調(diào)值（Δa*）、黃藍(lán)色色調(diào)值（Δb*）]，采用SPSS 24.0軟件對(duì)6種有效成分含量與三色空間值的相關(guān)性進(jìn)行Pearson分析，采用SIMCA-P14.1軟件進(jìn)行主成分分析。結(jié)果：五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲檢測(cè)進(jìn)樣量的線性范圍分別為0.204 8～2.560 0、0.049 3～0.616 3、0.098 4～1.230 0、0.046 3～0.578 8、0.010 6～0.132 0、0.100 0～1.500 0 μg（r均大于0.999 0）;精密度、穩(wěn)定性（12 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于3%，加樣回收率分別為98.14%～101.53%（RSD=1.08%，n=6）、97.16%～101.05%（RSD=1.54%，n=6）、98.29%～101.41%（RSD=1.29%，n=6）、97.17%～100.36%（RSD=1.20%，n=6）、97.32%～102.43%（RSD=1.77%，n=6）、98.02%～100.40%（RSD=0.84%，n=6）。39批南、北五味子中上述6種成分的平均含量分別為3.25～7.39、0.96～1.98、0.46～4.74、1.62～2.60、0.06～0.58、0.48～6.11 mg/g。北五味子的平均ΔL*為-80.79～-70.54，平均Δa*為2.54～5.34，平均Δb*為5.20～12.83，平均ΔE*為71.13～81.23;南五味子的平均ΔL*為-75.90～-69.16，平均Δa*為3.77～7.82，平均Δb*為8.59～17.23，平均ΔE*為69.99～77.92。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子酯甲的含量與ΔL*、Δa*、ΔE*均呈顯著相關(guān)性（P<0.01），與Δb*均不相關(guān)（P>0.05）;五味子丙素的含量與ΔL*、Δa*呈顯著負(fù)相關(guān)性（P<0.05），與Δb*、ΔE*不相關(guān)（P>0.05）。主成分分析結(jié)果顯示，前2個(gè)主成分的累積方差貢獻(xiàn)率為89.8%，且南、北五味子可明顯區(qū)分。結(jié)論：北五味子中五味子醇甲含量較高，南五味子中五味子酯甲含量較高，且南五味子中未檢出五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素。南、北五味子的三色空間值存在差異，即北五味子亮度小，顏色偏黑，南五味子顏色偏紅、偏黃。南、北五味子有效成分含量與三色空間值具有相關(guān)性，即藥材顏色越暗、紅色程度越弱，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素、五味子丙素的含量越高;藥材表面顏色越亮、紅色程度越高，五味子甲素、五味子酯甲的含量越高;所建含量測(cè)定方法精密度高、穩(wěn)定性好，可用于測(cè)定南、北五味子的含量;所建顏色定性識(shí)別模型可用于南、北五味子的鑒別。

關(guān)鍵詞 南五味子;北五味子;高效液相色譜法;含量測(cè)定;三色空間值;相關(guān)性分析;辨色論質(zhì);定性識(shí)別模型

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To investigate the internal mechanism of Schisandra sphenanthera and Schisandra chinensis in determining quality by color （“color discrimination grading”） of medicinal materials， and to construct a qualitative identification model based on color quantization value. METHODS： HPLC method was used to determine the contents of 6 active components from 39 batches of samples. The colorimeter was used to determine 3-color spatial value [lightness value （ΔL*）， red-green value ?（Δa*）， yellow-blue value （Δb*）]. SPSS 24.0 statistical software was used to analyze the correlation between the contents of 6 active components and 3-color spatial values. Principal component analysis （PCA） was performed by using SIMCA-P14.1 software. RESULTS： The linear range of schizandrol A， schizandrol B， schisandrin A， schisandrin B， schisandrin C， schisantherin A were 0.204 8-2.560 0， 0.049 3-0.616 3， 0.098 4- 1.230 0， 0.046 3-0.578 8， 0.010 6-0.132 0， 0.100 0-1.500 0 μg （r>0.999 0）; RSDs of precision， stability （12 h） and repeatability tests were all less than 3%. The recoveries were 98.14%-101.53%（RSD=1.08%，n=6）， 97.16%-101.05%（RSD=1.54%，n=6）， 98.29%-101.41%（RSD=1.29%，n=6）， 97.17%-100.36%（RSD=1.20%，n=6）， 97.32%-102.43%（RSD=1.77%，n=6）and 98.02%-100.40%（RSD=0.84%，n=6）， respectively. Among 39 batches of ? ? ? ?S. sphenanthera and S. chinensis， average contents of above 6 components were 3.25-7.39， 0.96-1.98， 0.46-4.74， 1.62-2.60， 0.06-0.58， 0.48-6.11 mg/g， respectively. Average ΔL* of ? ? ?S. chinensis was -80.79--70.54， average Δa* was 2.54-5.34， average Δb* was 5.20-12.83， average ΔE* was 71.13-81.23; average ΔL* of S. sphenanthera was -75.90- ? -69.16， average Δa* was 3.77-7.82， average Δb* was 8.59-17.23， average ΔE* was 69.99-77.92. The results of relationship analysis showed that the contents of schizandrol A， schizandrol B， schisandrin A， schisandrin B and schisantherin A were significantly correlated with ΔL*， Δa*， ΔE* （P<0.01）， with no significant correlation with Δb*（P>0.05）. There was a negative correlation of the content of schisandrin C with ΔL* and Δa* （P<0.05）， and there was no significant correlation with Δb* and ΔE* （P>0.05）. Results of PCA showed that accumulative variance contribution rate of primary 2 main components was 89.8%， and ? S. sphenanthera and S. chinensis could be identified significantly. CONCLUSIONS： The content of schizandrol A in S. chinensis is high relatively， and content of schisantherin A in S. sphenanthera is high relatively. Schizandrol A， schizandrol B and schisandrin B were not detected in S. sphenanthera. The 3-color spatial value of S. sphenanthera and S. chinensis are different， that is， the brightness of S. chinensis is small and the color is slant black， while the color of S. sphenanthera is slant red and yellow. The contents of active components of S. sphenanthera and S. chinensis is related to the surface 3-color spatial values， that is， the darker the color is， the weaker the red degree is， and the higher the contents of schizandrol A， schizandrol B， schisandrin B and schisandrin C are; the brighter the surface color is， the stronger the red degree is， and the higher the contents of schisandrin A and schisantherin A are. The established content determination method is precise and stable， and can be used for the content determination of S. sphenanthera and S. chinensis. The color qualitative identification model can be used for the identification of ? S. sphenanthera and S. chinensis.

KEYWORDS ? Schisandra sphenanthera; Schisandra chinensis; HPLC; Content determination; 3-color spatial value; Correlation analysis; Color discrimination grading; Qualitative identification model

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實(shí)，習(xí)稱“北五味子”，主要分布于我國吉林、遼寧、黑龍江等省;南五味子為木蘭科植物華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils的干燥成熟果實(shí)，主要分布于我國陜西、山西、河南等省[1-2]。兩藥均有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效[1]，具有保肝、鎮(zhèn)靜催眠、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)等作用[3-5]，且二者化學(xué)成分相似，均含有木脂素類、揮發(fā)油、多糖等成分[3]。其中，五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用[6-7]，五味子醇乙、五味子乙素、五味子丙素和五味子酯甲具有保護(hù)肝細(xì)胞作用[8]。但歷代醫(yī)家認(rèn)為，北五味子為正品，功效偏于補(bǔ)益心腎，而南五味子則偏于斂肺止咳，滋陰藥當(dāng)入北五味子為宜，可見南、北五味子在傳統(tǒng)用藥上存在差異[3]。雖然二者植物來源不同，但為同科屬植物，其性狀、顯微特征和化學(xué)成分也相似[9]，因此通過常規(guī)的鑒別方法難以區(qū)分，導(dǎo)致南、北五味子藥材市場(chǎng)混亂現(xiàn)象嚴(yán)重，故亟需建立一種快速的鑒別方法。

中藥“辨狀論質(zhì)”理論是指根據(jù)藥材的外在性狀評(píng)價(jià)其質(zhì)量的真?zhèn)?、?yōu)劣，顏色是藥材外在性狀鑒別的關(guān)鍵要素之一[10]。據(jù)《本草綱目》記載，“五味今有南北之分，南產(chǎn)者色紅，北產(chǎn)者色黑，入滋補(bǔ)藥必用北產(chǎn)者良”[11]，且行業(yè)內(nèi)評(píng)價(jià)五味子的“辨狀論質(zhì)”標(biāo)準(zhǔn)為“以粒大、果皮紫紅、肉厚、柔潤者為佳”[12]，該標(biāo)準(zhǔn)是目前藥材市場(chǎng)流通領(lǐng)域鑒別藥材質(zhì)量的共識(shí)方法，可見顏色是判定五味子質(zhì)量的一個(gè)重要因素，應(yīng)用歷史悠久，且已被證實(shí)具有科學(xué)性[13]。但中藥“辨色論質(zhì)”的內(nèi)在機(jī)制，即通過顏色判斷五味子質(zhì)量的科學(xué)內(nèi)涵是什么，目前尚未有合理詮釋。

色度學(xué)是研究顏色視覺規(guī)律、顏色測(cè)量理論和技術(shù)的科學(xué)，現(xiàn)代色度學(xué)的基礎(chǔ)是國際照明委員會(huì)（CIE）標(biāo)準(zhǔn)色度系統(tǒng)，是基于每種顏色都能用3個(gè)選定的原色按適當(dāng)比例混合而成的基本事實(shí)建立起來的[14]。分光測(cè)色儀（即色差儀）可通過探測(cè)樣品的光譜成分確定其顏色參數(shù)，精度高、穩(wěn)定性好，可反映波長反射率光譜曲線圖的變化[15]?；诖?，本研究在以高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定兩藥中活性成分（五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲）含量的基礎(chǔ)上，采用色差儀測(cè)定了南、北五味子藥材的三色空間值[明暗程度值（ΔL*）、紅綠色色調(diào)值（Δa*）、黃藍(lán)色色調(diào)值（Δb*）]，并通過分析含量與顏色的相關(guān)性來揭示南、北五味子“辨色論質(zhì)”的內(nèi)在機(jī)制，同時(shí)構(gòu)建南、北五味子的定性識(shí)別模型，旨在為其質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1260型HPLC儀，包括G1312C型二元泵、G1316A型柱溫箱、G1314F-VWD型紫外檢測(cè)器、ChemStation C.O 1.03工作站（美國Agilent公司）;NR-10QC型色差儀（深圳三恩時(shí)科技有限公司）;AR2140型萬分之一電子分析天平[奧豪斯儀器（上海）有限公司];AB135-S型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）;KQ-250D型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

南、北五味子藥材共39批[編號(hào)：S1～S29（北五味子），S30～S39（南五味子）]，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院張慧教授鑒定分別為木蘭科植物五味子S. chinensis（Turcz.）Baill的干燥成熟果實(shí)和木蘭科植物華中五味子S. sphenanthera Rehd. et Wils的干燥成熟果實(shí)，其樣品信息來源見表1。五味子醇甲對(duì)照品（批號(hào)：110857- 201815，純度：99.7%）、五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)：110764-201714，純度：99.3%）、五味子乙素對(duì)照品（批號(hào)：110765-201813，純度：99.1%）、五味子酯甲對(duì)照品（批號(hào)：111529-201706，純度：95.2%）均購自中國食品藥品檢定研究院;五味子醇乙對(duì)照品（批號(hào)：P28S6F3984，純度：≥98%）、五味子丙素對(duì)照品（批號(hào)：P28J8F3696，純度：≥98%）均購自上海源葉生物科技有限公司;乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 南、北五味子中活性成分的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：菲羅門XB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫[洗脫條件1（五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素）：0～10 min，50%A;10～15 min，50%A→75%A;15～25 min，75%A;25～30 min，75%A→50%A;洗脫條件2（五味子酯甲）：0～40 min，59%A;40～45 min，59%A→95%A;45～55 min，95%A;55～60 min，95%A→59%A];檢測(cè)波長：217 nm;柱溫：30 ℃;流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量：10 μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素對(duì)照品適量，加甲醇溶解制得上述成分質(zhì)量濃度分別為2.048 0、0.493 0、0.984 0、0.463 0、0.106 0 mg/mL的混合對(duì)照品貯備液;精密量取該貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度分別為0.204 8、0.049 3、0.098 4、0.046 3、0.010 6 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，于2～4 ℃冷藏，備用。另取五味子酯甲對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，混勻，制得質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的單一對(duì)照品溶液，于2～4 ℃冷藏，備用。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別取南、北五味子藥材，粉碎，過50目篩，取粉末約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇25 mL溶解，稱定質(zhì)量，超聲（功率：250 W，頻率：20 kHz）處理30 min，放至室溫，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，靜置，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別吸取上述兩種對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液（甲醇），按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，各成分均基線分離，其分離度均大于1.5，理論板數(shù)以五味子醇甲計(jì)均大于3 000;空白溶液對(duì)測(cè)定無干擾，詳見圖1。

2.1.5 線性關(guān)系考察 取“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻;另取五味子酯甲單一對(duì)照品溶液0.10、0.25、0.50、1.00、1.25、1.50 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，混勻。分別精密吸取上述溶液各10 μL，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以各待測(cè)成分進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表2。

2.1.6 精密度試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S1）適量，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲峰面積的RSD均小于3%（n=6），表明方法精密度良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品粉末（編號(hào)：S1）約0.5 g，共6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲含量的RSD均小于3%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)：S1）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時(shí)按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲峰面積的RSD均小于3%（n=6），表明供試品溶液于室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的樣品粉末（編號(hào)：S1），約0.25 g，共6份，分別加入“2.1.2”項(xiàng)下兩種對(duì)照品溶液適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子酯甲的加樣回收率分別為98.14%～101.53%（RSD=1.08%，n=6）、97.16%～ 101.05%（RSD=1.54%，n=6）、98.29%～101.41%（RSD=1.29%，n=6）、97.17%～100.36%（RSD=1.20%，n=6）、97.32%～102.43%（RSD=1.77%，n=6）、98.02%～ 100.40%（RSD=0.84%，n=6）。

2.1.10 樣品含量測(cè)定 取39批南、北五味子樣品粉末適量，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，每樣品平行測(cè)定4次，記錄峰面積并按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表3（表中，均以檢測(cè)結(jié)果的平均值表示，下同）。由表3可知，北五味子中五味子醇甲含量較高，南五味子中五味子酯甲含量較高，且南五味子中未檢出五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素。

2.2 顏色測(cè)定

2.2.1 三色空間值的測(cè)定方法 每批藥材樣品隨機(jī)選取一定量，平鋪滿整個(gè)測(cè)試器皿。每份樣品隨機(jī)選10處，平行3份，采用色差儀測(cè)定ΔL*、Δa*、Δb*，取平均值，以白紙為標(biāo)準(zhǔn)樣品。其中，ΔL*與亮度呈正相關(guān)，ΔL*越大，樣品顏色越明亮;Δa*為紅-綠色軸，Δa*越大表示樣品越紅，越小表示樣品越綠;Δb*為黃-藍(lán)色軸，Δb*越大表示樣品越黃，越小表示樣品越藍(lán);ΔE*表示待測(cè)樣品顏色的總色差，ΔE*=（ΔL*2+Δa*2+Δb*2）1/2[16] 。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 取樣品（編號(hào)：S1）適量，置于測(cè)試器皿中，按“2.2.1”項(xiàng)下方法于同一時(shí)間連續(xù)測(cè)定三色空間值6次。結(jié)果，ΔL*、Δa*、Δb*的RSD分別為1.84%、2.44%、2.25%（n=6），表明方法精密度良好。

2.2.3 不同光照強(qiáng)度下的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品（編號(hào)：S1）適量，置于測(cè)試器皿中，按“2.2.1”項(xiàng)下方法分別于同日內(nèi)8：00、10：00、12：00、13：00、15：00、17：00時(shí)測(cè)定三色空間值，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果，ΔL*、Δa*、Δb*的RSD分別為1.63%、2.92%、2.46%（n=6），表明不同光照強(qiáng)度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性影響較小。

2.2.4 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品（編號(hào)：S1）適量，置于測(cè)試器皿中，按“2.2.1”項(xiàng)下方法于室溫下連續(xù)5天在同一時(shí)間點(diǎn)測(cè)定三色空間值。結(jié)果，ΔL*、Δa*、Δb*的RSD分別為1.85%、2.65%、2.82%（n=5），表明樣品穩(wěn)定性良好，在短期內(nèi)表面顏色無明顯變化。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（編號(hào)：S1）適量，共6份，置于測(cè)試器皿中，按“2.2.1”項(xiàng)下測(cè)定方法在同一時(shí)間測(cè)定三色空間值。結(jié)果，ΔL*、Δa*、Δb*的RSD分別為1.81%、2.81%、2.95%（n=6），表明樣品顏色重復(fù)性較好。

2.2.6 樣品三色空間值的測(cè)定 取39批南、北五味子藥材樣品適量，置于測(cè)試器皿中，按“2.2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定三色空間值，每樣品平行測(cè)定3次，結(jié)果見表4。由表4可知，南、北五味子的三色空間值存在一定差異，其中北五味子的ΔL*整體偏小，亮度小，即顏色偏黑;南五味子的Δa*、Δb*整體均大于北五味子，即南五味子相對(duì)于北五味子顏色偏紅、偏黃。

2.3 相關(guān)性分析

采用SPSS 24.0軟件對(duì)39批南、北五味子的ΔL*、Δa*、Δb*、ΔE*與6種木脂素類成分含量的相關(guān)性進(jìn)行Pearson分析。以相關(guān)系數(shù)（r）>0.5且雙尾檢驗(yàn)概率（顯著性）<0.05或0.01為顯著正相關(guān)，以r<-0.5且雙尾檢驗(yàn)概率（顯著性）<0.05或0.01則為顯著負(fù)相關(guān)[16]，結(jié)果見表5。由表5可知，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素的含量與ΔL*、Δa*均呈顯著負(fù)相關(guān)性（P<0.01），與ΔE*呈顯著正相關(guān)性（P<0.01），與Δb*不相關(guān)（P>0.05）;五味子甲素、五味子酯甲的含量與ΔL*、Δa*呈顯著正相關(guān)性（P<0.01），與ΔE*呈顯著負(fù)相關(guān)性（P<0.01），與Δb*不相關(guān)（P>0.05）;五味子丙素的含量與ΔL*、Δa*呈負(fù)相關(guān)性（P<0.05），與Δb*、ΔE*不顯著（P>0.05）。

2.4 南、北五味子化學(xué)識(shí)別模型構(gòu)建分析

以37批樣品的ΔL*、Δa*、Δb*為指標(biāo)，采用SIMCA-P14.1軟件進(jìn)行主成分分析（因S2為陳五味子可導(dǎo)致顏色改變，S39含量與顏色普遍低于正常水平，故剔除這2批樣品數(shù)據(jù)），得到前2個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率分別為56.5%、33.3%，累積方差貢獻(xiàn)率為89.8%（>50%），提示前2個(gè)主成分可以反映藥材樣品的整體信息。根據(jù)主成分分析結(jié)果，構(gòu)建主成分分析得分圖，結(jié)果見圖2。由圖2可知，南、北五味子分布在模型的兩個(gè)區(qū)域，南五味子位于得分圖的右側(cè)，北五味子位于得分圖的左側(cè)，能夠?qū)崿F(xiàn)有效區(qū)分。

3 討論

本課題組在試驗(yàn)前期通過對(duì)甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水等不同流動(dòng)相進(jìn)行考察，最終確定了分離度好、基線平穩(wěn)的乙腈-水（梯度洗脫）為流動(dòng)相。含量測(cè)定結(jié)果顯示，北五味子中五味子醇甲含量較高，南五味子中五味子酯甲含量較高，且南五味子中未檢出五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素。隨后，本研究基于色差原理測(cè)定了39批南、北五味子藥材的三色空間值。結(jié)果顯示，南、北五味子的三色空間值存在一定差異，其中北五味子的ΔL*整體偏小，亮度小，即顏色偏黑，南五味子的Δa*、Δb*整體均大于北五味子，即南五味子相對(duì)于北五味子顏色偏紅、偏黃。這提示通過顏色可以區(qū)分南、北五味子，測(cè)定結(jié)果符合《本草綱目》記載的“五味今有南北之分，南產(chǎn)者色紅，北產(chǎn)者色黑”的論述[11] 。

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，南、北五味子的三色空間值與6種成分均具有相關(guān)性，即藥材顏色越暗、紅色程度越弱、總色差值越大，則五味子醇甲、五味子醇乙、五味子乙素、五味子丙素的含量越高;藥材表面顏色越亮、紅色程度越強(qiáng)、總色差值越小，則五味子甲素、五味子酯甲的含量越高。主成分分析結(jié)果顯示，本研究所構(gòu)建的主成分分析模型可用于鑒別南、北五味子。

綜上所述，所建含量測(cè)定方法精密度高、穩(wěn)定性好，可用于測(cè)定南、北五味子的含量，所建顏色判別模型可用于南、北五味子的鑒別。本研究初步探討了中藥“辨色論質(zhì)”的內(nèi)在機(jī)制，構(gòu)建了鑒別模型，通過顏色指標(biāo)的測(cè)定，同時(shí)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析方法，實(shí)現(xiàn)了中藥材鑒別的數(shù)據(jù)化、客觀化，有效提高了鑒別的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，有利于中藥材的快速準(zhǔn)確鑒別，為建立更加準(zhǔn)確、可靠的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)體系提供了新的思路和方法。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：66-67、244.

[ 2 ] 王佳豪.五味子藥材的質(zhì)量標(biāo)志物：Q-Marker研究[D].沈陽：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[ 3 ] 劉宇靈，付賽，樊麗姣，等.南北五味子化學(xué)成分、藥理作用等方面差異的研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（12）：228-234.

[ 4 ] 羅運(yùn)鳳，高潔，柴藝匯，等.五味子藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，41（5）：93-96.

[ 5 ] ZHU PL，LI JK，F(xiàn)U XQ，et al. Schisandra fruits for the management of drug-induced liver injury in China：a review[J]. Phytomedicine，2019. DOI：10.1016/j.phymed. 2018.11.020.

[ 6 ] 劉杰，徐劍，郭江濤.五味子活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（11）：206-215.

[ 7 ] 姚辛敏，王琪，周妍妍，等.五味子醇甲對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥理作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2018，46（1）：125-127.

[ 8 ] 任海風(fēng)，王世華.五味子藥理作用研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2018，18（8）：1151-1152.

[ 9 ] 李偉，劉亞麗，宋永貴，等. UPLC-Q-TOF-MSE結(jié)合OPLS-DA模式快速鑒定南、北五味子化學(xué)成分與識(shí)別差異標(biāo)志物[J].中草藥，2015，46（15）：2212-2218.

[10] 劉天睿，金艷，孟虎彪，等.論中藥“辨狀論質(zhì)”之辨色澤與品質(zhì)評(píng)價(jià)的生物學(xué)內(nèi)涵研究[J].中國中藥雜志，2020，45（19）：4545-4554.

[11] 李時(shí)珍.本草綱目[M].王輝，主編.西安：陜西旅游出版社，2002：64.

[12] 康廷國.中藥鑒定學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2016：277-278.

[13] 湯國華，何鑄.五味子的本草考證[J].中藥材，1989，12（4）：47.

[14] 徐曼菲，吳志生，劉曉娜，等.從辨色論質(zhì)談中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法[J].中國中藥雜志，2016，41（2）：177-181.

[15] 殷放宙，吳曉燕，毛春芹，等.光譜顏色科學(xué)研究進(jìn)展及其在中藥領(lǐng)域中應(yīng)用前景分析[J].光譜學(xué)與光譜分析，2013，33（9）：2315-2320.

[16] 何婉婉，張建逵，李云靜，等.北豆根藥材粉末色澤與有效成分的相關(guān)性[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（5）：57-62.

（收稿日期：2020-08-09 修回日期：2020-11-04）

（編輯：陳 宏）