兒童血清25(OH)D水平與其流感病毒感染之間的相關(guān)性

吳碧濤，任艷，蔣文強(qiáng)

綿陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 綿陽(yáng) 621000

流感是由流感病毒感染引起的急性呼吸道疾病，是人類面臨的主要公共衛(wèi)生健康問(wèn)題之一，可引起暴發(fā)流行。流感具有高度的傳染性，19～20世紀(jì)曾造成致命的流行病，并導(dǎo)致全球數(shù)百人死亡[1]。盡管所有年齡段都可能因流感發(fā)生嚴(yán)重疾病，但兒童不成比例地承擔(dān)著流感病毒感染的高風(fēng)險(xiǎn)，兒童的流感感染率始終最高[2-3]。全球每年約有87 000名5歲以下兒童因流感住院[4]。NAIR等[5]的薈萃分析估計(jì)，每年有28 000～111 500例5歲以下兒童的死亡可歸因于流感相關(guān)原因。研究發(fā)現(xiàn)，維生素D除參與鈣磷代謝、維持骨礦鹽平衡外，還具有廣泛的骨骼外效應(yīng)，尤其是其對(duì)免疫系統(tǒng)的作用越來(lái)越受到重視。維生素D可通過(guò)促進(jìn)抗菌肽的表達(dá)，影響細(xì)胞因子分泌等調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能[6]，通過(guò)對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)進(jìn)而對(duì)感染性疾病產(chǎn)生影響。本文擬探討0～12歲兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源 回顧性分析2019年1月1日至3月31日于綿陽(yáng)市中心醫(yī)院門診和住院診治的741例兒童(≤12歲)的臨床及實(shí)驗(yàn)室檢查資料。所有患兒均行流感病毒抗原篩查，并于篩查前后一周內(nèi)做血清25(OH)D水平檢測(cè)。

1.2 試劑和儀器 甲型/乙型流感病毒抗原檢測(cè)試劑盒(膠體金法)由Princeton Biomeditech Corporation提供；25(OH)D檢測(cè)試劑盒由山東濟(jì)南英盛生物技術(shù)有限公司提供，檢測(cè)儀器為API3200 MDTMLC/MS/MSSystem。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 流感病毒抗原檢測(cè) 通過(guò)化學(xué)試劑提取樣本中病毒抗原，再用固相免疫層析法檢測(cè)甲型和/乙型流感病毒抗原。收集的鼻咽拭子樣本放置于裝有提取液的提取孔中1 min，裂解病毒并釋放出抗原，將測(cè)試板豎直并輕拍，再平放測(cè)試板，使提取液孔中的提取液與染料墊上膠體金標(biāo)記的凍干抗體結(jié)合，并在虹吸作用下沿著檢測(cè)膜移動(dòng)，10～15 min內(nèi)讀取結(jié)果，在第15 min確認(rèn)陰性結(jié)果。

1.3.2 血清25(OH)D檢測(cè) 按照現(xiàn)行靜脈血采集方法空腹采血2 mL，將血液注入促凝管中，3 000 r/min離心15 min，取上清800μL～1.5 mL離心管中，并加入8μL保護(hù)劑，充分混勻后冷凍(-20℃或以下)保存，由專業(yè)人員采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法集中檢測(cè)血清25(OH)D，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)及儀器SOP操作。參照2018年中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)《維生素D及其類似物的臨床應(yīng)用共識(shí)》[7]，血清25(OH)D＜20 ng/mL定義為缺乏，20～30 ng/mL定義為不足，≥30 ng/mL定義為適宜。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組 按年齡將患兒分為0～1歲組、1～3歲組、3～6歲組及6～12歲組；按性別不同劃分為男性組與女性組；按患兒血清25(OH)D水平不同分為25(OH)D缺乏組、不足組、適宜組；按流感病毒抗原檢測(cè)結(jié)果分為陽(yáng)性與陰性組。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。經(jīng)Q-Q概率圖分析顯示，計(jì)量資料呈正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，兩組均數(shù)比較采用student t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同性別及年齡兒童流感病毒感染情況 共計(jì)檢測(cè)咽拭子樣本741份，其中，流感病毒感染陽(yáng)性樣本263例(包括Flu A陽(yáng)性197例及Flu B陽(yáng)性66例)，陽(yáng)性率為35.49%。男性患兒共408例，其中陽(yáng)性樣本154例，陽(yáng)性率為37.75%；女性患兒共333例，其中陽(yáng)性樣本109例，陽(yáng)性率為32.73%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，男性與女性患兒流感病毒感染陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.01，P=0.16)。對(duì)年齡進(jìn)行分層分析后發(fā)現(xiàn)：0～1歲組312例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性84例，陽(yáng)性率為26.92%；1～3歲組230例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性90例，陽(yáng)性率為39.13%；＞3～6歲組128例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性59例，陽(yáng)性率為46.09%；＞6～12歲組71例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性30例，陽(yáng)性率為42.25%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，各年齡組患兒流感病毒感染陽(yáng)性率比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.04，P＜0.01)，其中，3～6歲組患兒流感病毒感染陽(yáng)性率最高，而0～1歲組患兒流感病毒感染陽(yáng)性率最低。

2.2 流感病毒感染陽(yáng)性與陰性組間血清25(OH)D水平比較 流感病毒感染陰性組血清25(OH)D平均水平為(28.40±10.95)ng/mL，感染陽(yáng)性組血清25(OH)D平均水平為(27.32±9.01)ng/mL，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.36，P=0.18)。

2.3 不同25(OH)D水平組間流感病毒感染情況比較 血清25(OH)D水平缺乏組156例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性52例，陽(yáng)性率為33.33%；25(OH)D不足組295例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性120例，陽(yáng)性率為40.40%；25(OH)D適宜組288例患兒，流感病毒感染陽(yáng)性91例，陽(yáng)性率為31.60%。各組患兒感染陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.36，P=0.07)。

2.4 兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平的相關(guān)性 采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示患兒流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間無(wú)相關(guān)性(R=0.039，P=0.287)。

3 討論

兒童是流感的高發(fā)人群及重癥病例的高危人群，是流感流行的前哨[1]，對(duì)兒童進(jìn)行流感監(jiān)測(cè)顯得尤為重要。流感的確診需要相對(duì)特異的病原學(xué)檢測(cè)，如病毒培養(yǎng)、免疫熒光檢測(cè)、核酸檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)和抗原快速檢測(cè)等。本研究采用膠體金法對(duì)流感病毒抗原進(jìn)行檢測(cè)，該方法簡(jiǎn)便快速、適合臨床篩查。在741份樣本中共檢出流感病毒感染陽(yáng)性樣本263份，陽(yáng)性率為35.49%，男性組與女性組患兒流感病毒感染陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與李翠珍等[8]的報(bào)道一致。不同年齡組患兒流感病毒感染陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽(yáng)性率最高的為3～6歲組，最低的為0～1歲組。其原因可能為：對(duì)于3～6歲階段的兒童，其免疫力尚未健全，并且活動(dòng)范圍廣、共用被病毒污染的用具的機(jī)會(huì)多[9]；而對(duì)0～1歲組患兒，大多通過(guò)母乳從母體處獲得保護(hù)性免疫，且多無(wú)群體生活，感染的機(jī)會(huì)相對(duì)減少，故該年齡段嬰幼兒流感病毒感染陽(yáng)性率最低，這也與彭質(zhì)斌等[10]報(bào)道的＜6月齡是流感病毒感染的保護(hù)性因素的結(jié)論相吻合。

維生素D(VitD)是一種常見(jiàn)的脂溶性類固醇激素。循環(huán)中VitD首先在肝臟被羥化為25-羥基維生素D。因其含量豐富、半衰期長(zhǎng)、性質(zhì)穩(wěn)定，25(OH)D常被用作評(píng)價(jià)體內(nèi)VitD營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的指標(biāo)。本研究采用的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)，具有較高的特異性及靈敏度，被認(rèn)為是目前檢測(cè)血清25(OH)D的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法。維生素D除經(jīng)典的骨骼系統(tǒng)作用外，還與自身免疫性疾病、感染性疾病、心血管疾病、神經(jīng)精神疾病甚至腫瘤等密切相關(guān)[11]，并參與多種免疫介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過(guò)程[12]。有研究稱兒童期哮喘、毛細(xì)支氣管炎、肺結(jié)核等的發(fā)病均與維生素D相關(guān)，妊娠期補(bǔ)充維生素D可減少兒童呼吸道感染的發(fā)生[13]。張曉丹等[6]認(rèn)為維生素D缺乏的人群更易發(fā)生感染，而補(bǔ)充維生素D具有一定的輔助抗感染作用，主要包括急性呼吸道感染、皮膚軟組織感染及敗血癥、細(xì)菌性陰道炎等，維生素D可能通過(guò)促進(jìn)抗菌肽的產(chǎn)生，上調(diào)維生素D受體的mRNA表達(dá)，影響免疫調(diào)節(jié)，影響細(xì)菌細(xì)胞膜通透性來(lái)發(fā)揮輔助抗感染作用[6]。在本研究中，流感病毒感染陽(yáng)性組與陰性組患兒血清25(OH)D水平差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)，血清25(OH)D缺乏組、不足組以及適宜組患兒的流感病毒感染陽(yáng)性率差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兒童流感病毒感染與其血清25(OH)D水平之間可能并無(wú)相關(guān)性?；仡櫸墨I(xiàn)后發(fā)現(xiàn)，2016年一項(xiàng)囊括了來(lái)自高、中、低等收入國(guó)家的3 198名5歲內(nèi)兒童的大型臨床試驗(yàn)表明[14]：未找到補(bǔ)充維生素D后兒童肺炎或腹瀉的感染發(fā)生率有所下降的相關(guān)證據(jù)。在一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，GUI等[15]的研究顯示1,25(OH)2D治療H9N2感染小鼠時(shí)對(duì)固有免疫產(chǎn)生負(fù)性調(diào)控，尤其是在疾病的晚期階段。2017年，AGLIPAY等[16]的研究發(fā)現(xiàn)在1～5歲健康兒童中，每日補(bǔ)充高劑量維生素D與常規(guī)劑量補(bǔ)充相比，并未減少兒童患上呼吸道感染的風(fēng)險(xiǎn)，其發(fā)現(xiàn)不支持給予兒童高劑量維生素D補(bǔ)充劑以預(yù)防病毒性上呼吸道感染的觀點(diǎn)。

由此可見(jiàn)，兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染的關(guān)系尚存爭(zhēng)議和疑問(wèn)，基于維生素D作用的廣譜性，不排除維生素D在預(yù)防或治療流感中發(fā)揮積極作用的可能性。我們的研究發(fā)現(xiàn)兒童血清25(OH)D水平與其流感病毒感染無(wú)明顯相關(guān)性，其可能原因有：所選樣本的數(shù)量、研究地域、季節(jié)、人種等方面存在局限和偏倚。因此，今后尚需針對(duì)更廣泛兒童群體的研究，進(jìn)一步探討兒童血清維生素D水平與其流感病毒感染之間的關(guān)系。