血漿Kisspetin - 10評估先兆子癇及胎兒發(fā)育狀況

孫新六

泰安市中心醫(yī)院中心實驗室，山東 泰安 271000

滋養(yǎng)細(xì)胞正常侵入母體子宮壁蛻膜是成功生殖和胚胎發(fā)育的關(guān)鍵過程，胎盤的形成是通過滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲、增殖和分化以及血管生成的過程[1-2]，植入受阻、胎盤發(fā)育異常和胎盤功能障礙可能導(dǎo)致流產(chǎn)、先兆子癇(PE)及胎兒生長受限[3]。先兆子癇作為一種妊娠綜合征，發(fā)病率約為10%，是圍產(chǎn)期常發(fā)病癥[4]。本研究的目的是評估血漿KP- 10水平在先兆子癇及胎兒發(fā)育狀況中的指標(biāo)作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

85例單胎妊娠25周孕婦，就醫(yī)于本醫(yī)院婦產(chǎn)科，醫(yī)院倫理道德委員會批準(zhǔn)了此研究，并獲得所有孕婦知情同意。孕婦分為兩組，先兆子癇組：45例先兆子癇孕婦，年齡20～42歲，平均(32.80±6.23)歲，血壓≥140/90 mmHg，伴蛋白尿，血壓正常者。排除有代謝、血管方面疾病、既往不良產(chǎn)科病史的病例。將先兆子癇婦女分為輕度PE 28例(BP≥140/90～<160/110 mmHg，蛋白尿≥300 mg/24h)，重度PE 17例(BP≥160/110 mmHg，蛋白尿≥2.0 g/24 h)。正常孕婦40例為對照組，年齡20～43歲，平均(31.24±6.36)歲。

1.2 測定血漿KP- 10水平

孕期25周時靜脈抽取2 mL血至EDTA抗凝管中，離心取血漿用于測定KP- 10濃度。KP- 10檢測采用ELISA分析試劑盒(美國Burlingame公司)，酶免疫分析試劑盒是根據(jù)夾心法酶免疫分析的原理，用于檢測特異性肽。板孔用抗KP- 10抗體預(yù)包埋過夜,棄液并PBS漂洗，甩干備用。系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品及樣品50 μL分別加入相應(yīng)孔中,每個樣品均復(fù)孔檢測。室溫放1 h,漂洗后各加入50 μL辣根過氧化酶偶聯(lián)的抗KP- 10抗體,室溫1 h,漂洗后加入100 μL TMB反應(yīng)液顯色,加入中止液后,酶標(biāo)儀測450 nm吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,以吸光值為Y軸，以對應(yīng)KP- 10濃度的對數(shù)值為X軸，處理數(shù)據(jù)產(chǎn)生半對數(shù)圖， 依據(jù)待測樣品測得的吸光值，計算出各個樣品KP- 10濃度。

1.3 多普勒彩超檢測

孕齡25周時使用西門子診斷超聲系統(tǒng)進(jìn)行超聲檢查，使用腹部探頭，孕婦處于半臥位，測量參數(shù)：胎盤厚度、胎兒雙頂徑和股骨長度。同時使用彩色多普勒成像系統(tǒng)對臍動脈血流進(jìn)行多普勒測速，檢測指標(biāo)為收縮期流速/舒張期流速比值(S/D)和阻力指數(shù)(RI)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS20.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。對定量數(shù)據(jù)采用t檢驗，對定性數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗，用皮爾遜相關(guān)法計算兩個變量的相關(guān)性，并用t檢驗分析相關(guān)性的顯著性，P≤0.05時有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般臨床指標(biāo)

孕齡方面，先兆子癇孕婦組與正常對照組[(32.80±6.23)歲和(31.24±6.36)歲]相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而孕婦收縮壓、舒張壓及產(chǎn)兒體重在兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。顯示先兆子癇影響孕婦收縮壓、舒張壓及產(chǎn)兒體重。

表1 先兆子癇組與正常對照組一般臨床指標(biāo)比較

2.2 血漿KP- 10水平

與正常對照組和輕型先兆子癇組對照，重型先兆子癇組血漿KP- 10濃度顯著降低(P<0.05)，輕型先兆子癇組血漿KP- 10與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 血漿KP- 10水平比較

2.3 血漿KP- 10水平與相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性

分析血漿KP- 10水平與產(chǎn)兒體重、多普勒檢測指標(biāo)收縮期流速/舒張期流速比值(S/D)、阻力指數(shù)(RI)相關(guān)性。重型先兆子癇血漿KP- 10水平與產(chǎn)兒體重呈正相關(guān)(r=0.742,P=0.008)，與收縮期流速/舒張期流速比值(S/D)呈負(fù)相關(guān)(r=- 0.621,P=0.023)，與阻力指數(shù)(RI)呈正相關(guān)(r=0.736,P=0.026)，見表3。

表3 血漿KP- 10水平與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)分析(r)

注：*P<0.05，相關(guān)有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.4 多普勒彩超檢測

按血漿 KP- 10水平分成0～2.0 ng/mL和2.1～5.0 ng/mL兩組，與2.1～5.0 ng/mL組比較，0～2.0 ng/mL組胎盤厚度、股骨長度、雙頂徑及產(chǎn)兒體重均降低，兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,見表4。

表4 血漿KP- 10不同水平組的指標(biāo)值

3 討 論

先兆子癇的發(fā)生與滋養(yǎng)細(xì)胞異常侵襲相關(guān)，滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮壁組織是胚胎發(fā)生和胎盤形成的關(guān)鍵[5]，kisspeptins(KPs)及其受體在此過程中起著重要作用[6]。

KPs是KISS- 1基因的肽產(chǎn)物，能與G- 蛋白偶聯(lián)受體54(GPR54)結(jié)合[7]。KISS- 1基因的初始蛋白產(chǎn)物是145個氨基酸肽，它被切割成更短的生物活性肽如KP- 54、KP- 14、KP- 13和KP- 10，KP- 10是C末端十肽，為KPs共有序列[8]。

KP- 10及其受體在絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，KP/GPR54系統(tǒng)影響妊娠和著床[9]，還能抑制瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[10]。KP是滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲的調(diào)節(jié)因子，特別是KP- 10，孕早期滋養(yǎng)層細(xì)胞就能產(chǎn)生。滋養(yǎng)細(xì)胞異常侵襲導(dǎo)致子宮胎盤灌注減少，誘發(fā)先兆子癇發(fā)生，可能引發(fā)早產(chǎn)或胎盤早剝[11]，先兆子癇是圍產(chǎn)期孕婦發(fā)病和死亡的主要病癥。由于KP- 10能調(diào)節(jié)胎盤侵襲，因而它在先兆子癇致病機(jī)理中具有重要性。

胎盤KP肽能調(diào)節(jié)胎盤侵襲，其特點是減少滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲[12]，然而因胎盤植入不良而導(dǎo)致先兆子癇的孕婦，卻發(fā)現(xiàn)其血漿中KP- 10水平顯著降低。Kavvasoglu等人[13]發(fā)現(xiàn)血漿KP- 10低水平與胎盤功能障礙顯著相關(guān)。而高水平KP- 10對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲也具有抑制作用[14]。這種相反作用，可能是體內(nèi)KP- 10參與胎盤侵襲的雙向調(diào)控，高水平的KP- 10抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力，而低表達(dá)的KP- 10也降低滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力。

我們實驗顯示母體血漿KP- 10水平與重型先兆子癇患者的產(chǎn)兒體重相關(guān)，重型先兆子癇患者血漿KP- 10水平顯著低于正常對照組，先兆子癇組產(chǎn)兒體重也顯著降低。

在胎兒臍動脈多普勒測速檢測中，先兆子癇組患者胎兒的S/D比值、RI與母體血漿KP- 10水平均有顯著相關(guān)性，臍動脈血流參數(shù)異常反映了胎盤和胎兒之間血流不足。重型PE患者血漿KP- 10水平與胎兒S/D比值呈負(fù)相關(guān)、與RI呈正相關(guān)。 KP- 10可能作為胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞局部旁分泌調(diào)節(jié)因子，使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生血管活性介質(zhì)，從而使血管收縮與擴(kuò)張?zhí)幱谄胶鉅顟B(tài)，KP- 10水平過高和過低均能誘發(fā)先兆子癇的產(chǎn)生。

胎兒的臍動脈多普勒測速檢查，血漿KP- 10水平低的先兆子癇組胎兒S/D比值和RI顯著低于正常對照組的胎兒，孕婦血漿KP- 10可以做為胎盤灌注血運(yùn)不佳的指標(biāo)。

KISS在妊娠期間表達(dá)失調(diào)可能導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不當(dāng)導(dǎo)致病理性妊娠。PE患者滋養(yǎng)細(xì)胞Kiss- 1 mRNA和KP- 54肽水平顯著高于正常妊娠期滋養(yǎng)細(xì)胞[15]，但PE孕婦血漿中KP- 10含量顯著低于正常對照孕婦。

綜上所述，PE患者KP- 10水平降低可能反映疾病的嚴(yán)重程度，并可能是病理性子宮胎盤灌注和預(yù)測胎兒生長受限的潛在標(biāo)志。