聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)高脂血癥大鼠影響

田禎祥，耿青青，徐德剛

(1.棗莊學(xué)院體育學(xué)院，山東 棗莊 277160;2.山東體育學(xué)院，山東 濟(jì)南 250001)

近年來(lái)，隨著生活質(zhì)量的提高和生活方式的改變，高血脂癥患病率正逐年遞增，這是誘發(fā)脂肪肝、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的首要因素，患者機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂的同時(shí)伴隨著整體抗氧化水平的顯著降低。HO/CO系統(tǒng)體內(nèi)有HO-1、HO-2、HO-3三種同工酶，作為一種新興的內(nèi)源性介質(zhì)，該系統(tǒng)對(duì)機(jī)體抗氧化、抗炎癥、抗細(xì)胞增殖等方面具有重要的作用。其中，HO-1是一種對(duì)多種細(xì)胞有應(yīng)激反應(yīng)的血液降解酶，在傳統(tǒng)上被認(rèn)為能夠產(chǎn)生對(duì)氧化應(yīng)激、炎癥和血管收縮的適應(yīng)性反應(yīng)[1]，到目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HO-1在所有細(xì)胞類型的研究中都會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)，其亞細(xì)胞的定位、表達(dá)水平、誘導(dǎo)性和功能與病理狀態(tài)下高度相關(guān)[2]。HO-1的作用機(jī)制包括NF-кB、sGC、Akt-eNOS以及MAPKs多個(gè)通路，MAPKs通路最為重要，MAPKs能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、分化以及對(duì)環(huán)境、刺激的反應(yīng)[2,3]。內(nèi)源性CO主要由HO-1/CO系統(tǒng)中血紅素合酶對(duì)血紅素的分解而來(lái)，是細(xì)胞重要的信使分子，通過(guò)激活可溶性cGMP，可增加環(huán)鳥苷酸的合成，發(fā)揮信使作用[4]。越來(lái)越多研究表明，HO-1及其反應(yīng)產(chǎn)物膽紅素和CO在心臟缺血性誘導(dǎo)損傷(如心肌梗死、缺血再灌注損傷和梗死后結(jié)構(gòu)重構(gòu)等)中具有特殊的保護(hù)作用。CO也被證明介導(dǎo)了許多有益的HO-1作用，包括抗氧化損傷、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)炎癥和促進(jìn)血管生成。

激素敏感脂肪酶(Hormone-sensitve lipase，HSL)是存在于多種動(dòng)物體內(nèi)，調(diào)節(jié)脂肪分解的關(guān)鍵酶。研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥中的脂質(zhì)代謝紊亂與基因的改變有關(guān)，同時(shí)也與HSL的活性密切相關(guān)。前人在對(duì)肌肉、胰腺、睪丸、腎上腺等組織的研究中發(fā)現(xiàn)，HSL不僅對(duì)此有所反應(yīng)，而且發(fā)揮的作用更加獨(dú)特?，F(xiàn)有研究表明饑餓、禁食、運(yùn)動(dòng)等生理刺激可以通過(guò)激活腎上腺素能系統(tǒng)，再激活PKA，進(jìn)而激活HSL等酶和相關(guān)蛋白質(zhì)，最終刺激脂肪分解和增加脂肪動(dòng)員[5]。脂蛋白脂肪酶(lipoprteinpase，LPL)是在脂質(zhì)代謝和運(yùn)轉(zhuǎn)中起到關(guān)鍵作用的酶類物質(zhì)，它不僅調(diào)控各種脂蛋白，而且參與降解血漿中富含脂質(zhì)的脂蛋白，因此與機(jī)體脂代謝密切相關(guān)[6]。

中藥降脂由來(lái)已久，常用的藥材有荷葉、絞股藍(lán)、紫蘇葉等。荷葉中的槲皮素、生物堿和黃酮類等有效成分，具有抑制胰脂肪酶、抗氧化、抑菌等藥理作用[7]。紫蘇葉主要含有多糖類和黃酮類化合物，其中黃酮類化合物是調(diào)節(jié)血脂的功能因子，可有效降低甘油三酯，防止動(dòng)脈硬化。絞股藍(lán)的提取物絞股藍(lán)總苷素有“南方人參”之稱，有防止高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化的作用[8]。本實(shí)驗(yàn)所采用的復(fù)方中藥制劑是由荷葉、紫蘇葉、絞股藍(lán)的提取物，以2∶1∶1的比例混合而成的，富含多種活性成分，如黃酮類化合物、β-胡蘿卜素、α-生育酚、維生素C等。本實(shí)驗(yàn)選取SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以荷葉、紫蘇葉及絞股藍(lán)3種植物提取物為原料制成的中藥復(fù)方制劑，筆者將其加以有氧運(yùn)動(dòng)作為對(duì)比聯(lián)合實(shí)驗(yàn)，以探究HO-1/CO系統(tǒng)在脂質(zhì)紊亂機(jī)體降脂過(guò)程中可能發(fā)揮的保護(hù)作用。

1 材料方法

1.1 動(dòng)物與分組

雄性 SD大鼠(體重100～180 g，購(gòu)于廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)， SPF級(jí)喂養(yǎng)， 室內(nèi)空氣流通，溫度23±2 ℃，濕度50 %～60 %，晝夜節(jié)律用日光燈控制，每日光照時(shí)間12小時(shí)。大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠4只，基礎(chǔ)飼料選用由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物混合飼料； 高脂飼料配方為78.8%基礎(chǔ)飼料，1%膽固醇，10%蛋黃粉，10%豬油，0.2%膽鹽。大鼠自由進(jìn)食，飲水。動(dòng)物飼養(yǎng)籠具、飲水瓶定期消毒，動(dòng)物房?jī)?nèi)定期用紫外燈照射消毒。

動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，取靜脈血測(cè)定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)，按 TC水平和體重分為對(duì)照組(C組)、復(fù)方中藥制劑組(M組)、單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)、中藥+有氧運(yùn)動(dòng)組(Y2組)。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，各組間體重與TC均無(wú)明顯差異，P>0.05。如表1所示：

表1 實(shí)驗(yàn)前大鼠體重、TC比較(X±S)

本實(shí)驗(yàn)所采用的荷葉、紫蘇葉及絞股藍(lán)提取物復(fù)方制劑由廣州一方制藥有限公司提供。造模30 d后，復(fù)方中藥制劑組(M組)和中藥+有氧運(yùn)動(dòng)組(Y2組)進(jìn)行中藥制劑灌胃；高脂模型對(duì)照組(C組)、有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)每天進(jìn)行同劑量的生理鹽水灌胃。灌胃標(biāo)準(zhǔn)為300 mg/kg體重，灌胃量為0.5 ml/100g，相當(dāng)于70 kg成人飲用250 ml的量。連續(xù)治療5周。

1.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案

運(yùn)動(dòng)組(Y1、Y2組)大鼠先進(jìn)行一周的適應(yīng)性運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練：跑臺(tái)(0°，10 mmin)，持續(xù)運(yùn)動(dòng)10分鐘；運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)前2 h禁食，所有大鼠正式實(shí)驗(yàn)前半小時(shí)灌胃。運(yùn)動(dòng)組大鼠進(jìn)行5周訓(xùn)練，每周6日，每天1次，每次30 min，25 m/s的有氧運(yùn)動(dòng)。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

本研究測(cè)試以下指標(biāo):大鼠血清T-AOC值、骨骼肌和心肌血紅素氧合酶1(HO-1)水平及 CO含量、骨骼肌甘油三酯及骨骼肌HSL與LPL酶活性。

1.3.1 血清總抗氧化能力(T-AOC值)的測(cè)定

采用化學(xué)比色法測(cè)定，試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。將試劑及樣本參照說(shuō)明書比例混入，用旋渦混勻器充分混勻，放置10min，96孔板加樣雙蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光值。1cm光徑，520nm處測(cè)各吸光度，代入以下公式并進(jìn)行計(jì)算：

1.3.2 大鼠心肌和骨骼肌組織HO-1的測(cè)定

分別稱取適量的骨骼肌和心肌放入玻璃勻漿器中，加入生理鹽水在冰浴中充分研磨，制成濃度為10 %的溶液，3000 轉(zhuǎn)/min 離心30 min，吸取上清液分裝待測(cè)。用純化的抗體包被微孔板，做成固相載體，在微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗目的蛋白抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。

1.3.3 大鼠心肌和骨骼肌組織CO含量的測(cè)定

通過(guò)722分光光度計(jì)測(cè)定樣品568 nm與581 nm的吸光度，計(jì)算ΔOD的絕對(duì)吸光值差，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)回歸方程計(jì)算得出待檢稀釋碳氧血紅蛋白百分比濃度，即HbCO %。

取未處理的10 %組織勻漿上清液0.05 ml，加入2.5 ml的血紅蛋白測(cè)定應(yīng)用液，混勻，靜置5分鐘后，用1 cm光徑蒸餾水調(diào)零，540 nm測(cè)定各管吸光度值。

組織勻漿中血紅蛋白含量的計(jì)算公式為：血紅蛋白克數(shù)/升=540 nm處吸光度值*73.54

1.3.4 組織勻漿中組織蛋白的測(cè)定：

混勻，放入37 ℃水浴10分鐘，流水冷卻后，波長(zhǎng)540 nm，光徑1 cm，用蒸餾水調(diào)零，測(cè)各管吸光度OD值

蛋白含量mg/ml=(測(cè)定管OD值-空白管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)×蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)

1.3.5 肌內(nèi)甘油三酯(IMTG)的測(cè)定

肌內(nèi)甘油三酯(IMTG)，試劑盒購(gòu)于創(chuàng)燁生物有限公司。采用722分光光度計(jì)，將波長(zhǎng)調(diào)為546 nm，光徑調(diào)為10 mm進(jìn)行測(cè)定。

1.3.6 HSL與LPL活性的測(cè)定

HSL與LPL活性采用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附法，嚴(yán)格按照試劑盒操作步驟進(jìn)行測(cè)定， 實(shí)驗(yàn)儀器為TECAN Infinite M200瑞士TECAN公司，由廣州體院提供。

操作步驟

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

本研究數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，并用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行各組間的差異顯著性檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有顯著性，P<0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方中藥制劑聯(lián)合有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠體重和血清總抗氧化能力(T-AOC)的變化

相對(duì)于對(duì)照組(C組)大鼠體重，復(fù)方中藥制劑組(M組)、單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)和運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)體重?cái)?shù)分別降低了4.13(P<0.05)、4.97(P<0.05)和5.35(P<0.01)。提示：復(fù)方中藥制劑和有氧運(yùn)動(dòng)均具有減脂降體重的作用，單純有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)較復(fù)方中藥制劑干預(yù)的降體重效果更明顯，而兩者結(jié)合效果更好(見(jiàn)表2)。

相對(duì)于對(duì)照組(C組)大鼠的血清總抗氧化能力(T-AOC)，復(fù)方中藥制劑組(M組)、單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)和運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)分別升高了24.67 %(P>0.05)、33.92 %(P<0.05)和45.37 %(P<0.01)。這表明復(fù)方中藥制劑和有氧運(yùn)動(dòng)均能不同程度地提高機(jī)體抗氧化水平且有氧運(yùn)動(dòng)改善機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的作用較顯著(P<0.05)；此外，兩種因素聯(lián)合干預(yù)具有累加效應(yīng)，即Y2組較C組具有非常顯著性差異(P<0.01)，這表明機(jī)體在服用復(fù)方中藥制劑的同時(shí)堅(jiān)持有氧運(yùn)動(dòng)更有利于提高機(jī)體抗氧化能力，但兩者是否是簡(jiǎn)單的累積效應(yīng)仍需進(jìn)一步的研究。

表2 復(fù)方中藥制劑結(jié)合有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)比大鼠體重和血清總抗氧化能力的影響(M±SD)

注：與高脂模型對(duì)照組(C)比較，*P<0.05，有顯著性差異，**P<0.01，有非常顯著性差異；與單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1)比較，△P<0.05，有顯著性差異，△△P<0.01，有非常顯著性差異；與復(fù)方中藥制劑組(M)組比較，◇P<0.05，有顯著性差異，◇◇P<0.01，有非常顯著性差異

機(jī)體抗氧化能力由多方面因素決定，如抗氧化酶活性、自由基的產(chǎn)生與清除體系的動(dòng)態(tài)平衡等，但T-AOC/MDA的變化更能反映自由基產(chǎn)生與清除的平衡關(guān)系，作為反映整個(gè)抗氧化防御系統(tǒng)的適應(yīng)性指標(biāo)，其意義更加重大[9]。為了增加其非凡的抗氧化能力，膽綠素和膽紅素都可以通過(guò)抑制活性氧(ROS)的形成來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，有效中和脂質(zhì)過(guò)氧化作用，通過(guò)降低白細(xì)胞黏附分子和中性粒細(xì)胞黏附的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗炎作用[10]。該結(jié)果揭示：中藥制劑中的生物堿、黃酮類成分和絞股藍(lán)總苷素等多種活性成分有影響脂肪的分解與合成的作用，另一方面有氧運(yùn)動(dòng)促進(jìn)脂肪的燃燒,增加了脂肪的動(dòng)員和分解，抑制脂肪的合成。因此，在選擇有效中藥制劑的同時(shí)，結(jié)合適量的運(yùn)動(dòng)會(huì)使減肥效果更好。

2.2 復(fù)方中藥制劑結(jié)合有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠骨骼肌和心肌HO-1水平的變化

表3中顯示，大鼠骨骼肌組織中HO-1含量的變化：相對(duì)于對(duì)照組C組，中藥組(M組)HO-1降低了21.43 %(P<0.01)，單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1)和運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)較中藥M組有所回升，但仍分別低于對(duì)照組(C組)11.53 %(P>0.05)和17.10 %(P<0.05)。大鼠心肌組織中HO-1含量的變化：與高脂模型對(duì)照組(C)相比，復(fù)方中藥制劑組(M組)和有氧運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)分別降低了20.76 %(P<0.05)和16.39 %(P<0.05)，單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)升高了8.95 %(P>0.05)。心肌組織各組HO-1含量與骨骼肌組織相應(yīng)各組HO-1含量比較，均沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表3 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑對(duì)比肥胖大鼠骨骼肌HO-1水平的影響(M±SD)

注：與高脂模型對(duì)照組(C)比較，*P<0.05，有顯著性差異，**P<0.01，有非常顯著性差異；與單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1)比較，△P<0.05，有顯著性差異，△△P<0.01，有非常顯著性差異；與復(fù)方中藥制劑組(M)組比較，◇P<0.05，有顯著性差異，◇◇P<0.01，有非常顯著性差異

本實(shí)驗(yàn)中，骨骼肌和心肌的Y1組HO-1水平較M組和Y1組呈升高狀態(tài)，可以推測(cè)有氧運(yùn)動(dòng)與復(fù)方中藥制劑提高機(jī)體抗氧化能力的機(jī)制是完全不一樣的。提示：有氧運(yùn)動(dòng)通過(guò)升高HO-1表達(dá)抑制機(jī)體病理狀態(tài)，而復(fù)方中藥制劑是通過(guò)降低血脂等有害因子進(jìn)而使HO-1表達(dá)降低，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。國(guó)內(nèi)已有研究證明長(zhǎng)期運(yùn)動(dòng)可以激發(fā)主動(dòng)脈平滑肌中的HO-CO的活性水平，并且隨著運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的增加，HO-CO的活性可相應(yīng)上調(diào)[11]。筆者在本文對(duì)骨骼肌和心肌中也得到了相應(yīng)的結(jié)論。

骨骼肌中M組HO-1水平較C組顯著下降，具有非常顯著性差異，表明伴隨復(fù)方中藥制劑增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的同時(shí)，應(yīng)激升高的HO-1有所回落；Y1組HO-1水平較M組升高，但仍低于C組，兩者之間沒(méi)有顯著性差異，這一現(xiàn)象提示考慮增加正常體重個(gè)體與肥胖個(gè)體的對(duì)比研究，更能有效探討有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)HO-1/CO系統(tǒng)的影響機(jī)制；Y2組HO-1水平則介于M組和C組之間，較C組降低明顯，具有顯著性差異，可以推測(cè)有氧運(yùn)動(dòng)可以部分抵消復(fù)方中藥制劑引起的HO-1的回落。

大鼠心肌的HO-1水平與骨骼肌HO-1水平變化趨勢(shì)基本一致，但整體上，心肌HO-1水平略高于骨骼肌HO-1水平，組間比較沒(méi)有顯著性差異。但有研究[12]表明，外界應(yīng)激因素對(duì)HO-1/CO體系的影響具有組織選擇性，這可能與HO-1/CO在不同組織的表達(dá)不同有關(guān)。

2.3 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑干預(yù)后大鼠心肌和骨骼肌CO含量的變化

從表4我們可以得知大鼠心肌組織CO含量的變化：?jiǎn)渭冞\(yùn)動(dòng)組(Y1組)、運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)和復(fù)方中藥制劑組(M組)分別較高脂模型對(duì)照組(C組)降低了20.95 %(P>0.05)、39.44 %(P<0.01)和52.91 %(P<0.01)，復(fù)方中藥制劑組(M組)較單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)降低了40.43 %(P<0.05)。

表4 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑對(duì)比肥胖大鼠心肌CO含量的影響(M±SD)

注：與高脂模型對(duì)照組(C)比較，*P<0.05，有顯著性差異，**P<0.01，有非常顯著性差異；與單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1)比較，△P<0.05，有顯著性差異，△△P<0.01，有非常顯著性差異；與復(fù)方中藥制劑組(M)組比較，◇P<0.05，有顯著性差異，◇◇P<0.01，有非常顯著性差異

大鼠骨骼肌組織CO含量的變化為復(fù)方中藥制劑組(M組)與運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)較高脂模型對(duì)照組分別降低了16.01 %(P>0.05)、32.81 %(P>0.05)，單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)較高脂模型對(duì)照組(C組)顯著升高(P<0.05)；心肌各組CO含量高于骨骼肌中相應(yīng)各組CO含量(P<0.01)。

心肌中CO的含量明顯高于骨骼肌,提示內(nèi)源性CO可能在心肌中發(fā)揮著更重要的作用，以往的研究也多集中在心血管系統(tǒng)，心血管系統(tǒng)被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，具有增加血管彈性、抗炎和抗凋亡[13]、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖[12]和誘導(dǎo)血管生成的特性。同時(shí)也有研究報(bào)道Hb通過(guò)其降解產(chǎn)物(鐵、膽綠素及CO)產(chǎn)生毒性作用[13]，紅細(xì)胞溶解后釋放Hb，產(chǎn)生血紅素，同時(shí)誘導(dǎo)HO-1的明顯上調(diào)。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，骨骼肌組織中整體CO含量較低，較心肌組織相應(yīng)各組比較具有非常顯著性差異，但骨骼肌組織Y1組CO含量較其各組CO含量顯著升高，鑒于此推測(cè)相對(duì)心肌而言，骨骼肌CO的反應(yīng)受運(yùn)動(dòng)的影響較大。雖然骨骼肌總的CO含量較少，但其受到運(yùn)動(dòng)刺激的反應(yīng)明顯，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

另外，大鼠心肌組織中HO-1與CO的反應(yīng)呈正性相關(guān)，推測(cè)CO的產(chǎn)生受到HO-1的影響，這可能與心臟是心血管循環(huán)系統(tǒng)的主要器官，富含各種血色素蛋白，擔(dān)負(fù)著機(jī)體血液循環(huán)的重要功能有關(guān)。骨骼肌中HO-1與CO表達(dá)并不一致，骨骼肌組織中HO-1水平在高脂模型對(duì)照組(C組)中表達(dá)最顯著，復(fù)方中藥制劑組(M組)和有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)中HO-1都有所降低，有氧運(yùn)動(dòng)+中藥組處于M組和Y1組之間，而CO的表達(dá)則是Y1組最高，與其他各組比較均有顯著性差異，筆者推測(cè)其原因是骨骼肌中有較多的CO是由有機(jī)分子的氧化產(chǎn)生，特別是微粒體膜上類脂的過(guò)氧化。

2.4 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑干預(yù)后大鼠骨骼肌甘油三酯含量的變化

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對(duì)照組(C組)相比，復(fù)方中藥制劑組(M組)、單純有氧運(yùn)動(dòng)組(Y1組)以及運(yùn)動(dòng)+中藥組(Y2組)骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量均有所下降(P<0.05)，與Y，Z組大鼠差異無(wú)顯著性。經(jīng)過(guò)6周實(shí)驗(yàn)后，模型對(duì)照組骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量最高為0.0366±0.0046 mmol/L，各實(shí)驗(yàn)組大鼠與模型對(duì)照組相比，骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量均有所下降。運(yùn)動(dòng)組(Y1)，和中藥組(M)骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量分別降低了17.49 %(P>0.05)、和17.49 %(P>0.05)，這說(shuō)明有氧運(yùn)動(dòng)和降脂中藥制劑均有使骨骼肌甘油三酯減少的作用。運(yùn)動(dòng)加中藥組(Y2)骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量只有0.025 5±0.005 2 mmol/L，降低了30.32 %(P<0.05)，說(shuō)明有氧運(yùn)動(dòng)與中藥制劑對(duì)肌內(nèi)甘油三酯氧化增加有協(xié)同作用。目前有關(guān)中藥對(duì)肌內(nèi)甘油三酯影響的研究較少，但是中藥制劑能起到預(yù)防性減肥和降脂的作用，其原因可能是本實(shí)驗(yàn)所采用的復(fù)方中藥制劑是由荷葉、紫蘇葉及絞股藍(lán)組成，它們均含有大量活性成分，前人的研究顯示荷葉、紫蘇葉及絞股藍(lán)均有調(diào)節(jié)血脂的作用，都能使甘油三酯含量下降。有研究[14-15]通過(guò)對(duì)生物總堿干預(yù)高脂血癥大鼠，提示荷葉生物總堿能明顯抑制大鼠的體重增長(zhǎng)，使甘油三酯下降。紫蘇中富含的α-亞麻酸能夠改變大鼠腦和肝臟中的脂肪酸含量,也可以降低血清中較高的甘油三酯含量(見(jiàn)表5)。

表5 骨骼肌內(nèi)甘油三酯含量比較(X±S)

注： 和對(duì)照組比較*P<0.05，有顯著性差異

2.5 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑干預(yù)后大鼠骨骼肌HSL酶活性變化

脂肪沉積受飲食、內(nèi)分泌、神經(jīng)及自身等多方面因素的影響，這決定了它將是一個(gè)復(fù)雜的生理生化過(guò)程。動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝始終處于動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，其限速酶活性受到激素的調(diào)控，故稱為激素敏感脂肪酶。經(jīng)過(guò)6周實(shí)驗(yàn)后，與模型對(duì)照組(C)相比，其余三組大鼠骨骼肌HSL酶活性均有不同程度升高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：運(yùn)動(dòng)組(Y1)，中藥組(M)大鼠骨骼肌 HSL酶的活性，分別升高了25.08%(P>0.05)和17.92%(P>0.05)，說(shuō)明降脂中藥制劑與有氧運(yùn)動(dòng)都有提高骨骼肌HSL酶活性的作用。運(yùn)動(dòng)加中藥組(Y2)骨骼肌HSL酶的活性比對(duì)照組升高了49.73%(P<0.05)。降脂中藥制劑結(jié)合有氧運(yùn)動(dòng)提高骨骼肌HSL酶活性的效果顯著，表明降脂中藥制劑的作用機(jī)理與提高大鼠骨骼肌LPL和HSL酶活性有關(guān)。其可能原因是：制劑中每種植物的活性成分都具有減肥降脂的作用，并能使脂蛋白代謝酶活性發(fā)生變化。降脂中藥中的有效成分不僅能夠降低甘油三酯含量，還能上調(diào)HSLmRNA與LPLmRNA的表達(dá)，使其酶活性升高(見(jiàn)表6)。

表6 骨骼肌HSL酶的活性比較(X±S)

注： 和對(duì)照組比較*P<0.05，有顯著性差異

2.6 有氧運(yùn)動(dòng)結(jié)合復(fù)方中藥制劑干預(yù)后大鼠骨骼肌LPL酶活性變化

本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)6周實(shí)驗(yàn)，與高脂模型對(duì)照組相比，中藥組(M)大鼠骨骼肌LPL活性上升了3.65%。目前關(guān)于降脂中藥對(duì)骨骼肌LPL活性的影響研究較少，有待深入研究。但有關(guān)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)總皂甙能使 LPL酶活性增高，而酶活性的增加能加快TG脂蛋白的代謝，降低血清和組織TG的含量；黃酮類物質(zhì)也可以改變脂肪組織與骨骼肌組織中LPL的活性比值，從而影響血漿脂蛋白及TG水平。研究顯示，荷葉黃酮對(duì)高脂血癥大鼠有明顯降低體重、降低血清膽固醇、降低血清甘油三酯和升高血清HDL-C和血清脂蛋白脂酶(LPL)活力的作用(見(jiàn)表7)。

表7 骨骼肌LPL酶的活性比較(X±S)

注： 和對(duì)照組比較*P<0.05，有顯著性差異

3 討論

高脂血癥是血漿脂質(zhì)濃度超出正常值的病理癥狀。中醫(yī)學(xué)中并無(wú)“高脂血癥”這一名稱，但其癥狀多散見(jiàn)于“肥胖、中風(fēng)、眩暈、失眠”等病的記載中，屬中醫(yī)學(xué)中的“污血病”范疇[13-15]。高脂飲食誘導(dǎo)高脂血癥后會(huì)造成體內(nèi)自由基的大量增加，同時(shí)伴隨自由基清除能力的下降[14]。T-AOC作為機(jī)體酶類和非酶類抗氧化物的總水平，其參數(shù)水平的變化可以反映機(jī)體自由基抗氧化系統(tǒng)。高脂飲食誘發(fā)高脂血癥后可造成實(shí)驗(yàn)大鼠血清中抗氧化物酶活性下降，自由基產(chǎn)生過(guò)量，體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)，導(dǎo)致過(guò)氧化損傷的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：復(fù)方中藥制劑和有氧運(yùn)動(dòng)可有效地逆轉(zhuǎn)高脂飲食造成的機(jī)體抗氧化能力下降。

現(xiàn)代學(xué)者為提高內(nèi)源性抗氧化能力，嘗試了多種方法，但到目前為止尚無(wú)有效方法能夠快速促進(jìn)機(jī)體抗氧化能力。一項(xiàng)有趣的研究甚至提出通過(guò)HO-1控制參與ROS生成的含血紅素蛋白的活性來(lái)降解血紅素[17]。前人已通過(guò)較多研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)科學(xué)有效地運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練個(gè)體，其肌肉中抗氧化酶和非酶抗氧化物水平有升高的趨勢(shì)，并對(duì)運(yùn)動(dòng)引起的或與之相關(guān)的氧化應(yīng)激產(chǎn)生較高的耐受性[18]。我們推測(cè)這些適應(yīng)可歸因于重復(fù)訓(xùn)練對(duì)抗氧化酶基因在體內(nèi)表達(dá)的累積效應(yīng)，正如Finkel和Holbrook[19]提出的氧化應(yīng)激本身就是提高機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力的最好方法。本實(shí)驗(yàn)所用的三種中藥復(fù)方制劑，因其有效成分使機(jī)體血脂水平及抗氧化水平得到廣泛關(guān)注。荷葉依靠荷葉槲皮素、生物堿類和黃酮類的活性成分，荷葉多酚也能夠不同程度地清除羥基自由基、DDPH和ABST自由基。更有研究結(jié)果表明：槲皮素可通過(guò)HO-1/CO系統(tǒng)在體內(nèi)和體外增強(qiáng)線粒體的生物發(fā)生[20]。同時(shí)，臨床研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)有降脂作用，絞股藍(lán)總皂苷能不同程度地降低肥胖大鼠血脂及自由基水平。不同含量絞股藍(lán)皂苷對(duì)降低高脂血癥大鼠血脂水平是不同的，有研究顯示絞股藍(lán)皂苷對(duì)DPPH自由基的清除率在濃度為4mg/ml可達(dá)到92%，對(duì)羥基自由基的清除率在濃度為3mg/ml可達(dá)到82%，對(duì)超氧陰離子的清除率在濃度為3mg/ml可達(dá)到73 %，且與總皂苷含量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系[21]。并且家兔實(shí)驗(yàn)[6]表明紫蘇葉提取物有調(diào)節(jié)血脂作用，可明顯降低家兔動(dòng)脈粥樣硬化血液中 TC 和 TG 水平。

Niess等學(xué)者[22]指出有氧運(yùn)動(dòng)能夠促進(jìn)內(nèi)源性CO合成，在本實(shí)驗(yàn)中也得到了相應(yīng)的體現(xiàn)，進(jìn)而參與機(jī)體免疫反應(yīng)，提高機(jī)體抵抗疾病的能力。范學(xué)輝等[23]學(xué)者的研究則顯示單純的有氧運(yùn)動(dòng)并沒(méi)有完全消除高脂飲食的負(fù)面影響，他們指出藥物和飲食是高脂血癥治療中不可或缺的兩個(gè)方面；而在本實(shí)驗(yàn)的研究中三種復(fù)方中藥制劑和運(yùn)動(dòng)聯(lián)合干預(yù)達(dá)到了更好的效果，中藥提取物中的藥物效應(yīng)在本實(shí)驗(yàn)中得到很好的凸顯。