QuEChERS/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定香蕉中8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留

吳學(xué)進(jìn)　王明月　馬晨　張群　龐朝海

摘 ?要：為了測(cè)定植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在香蕉中的殘留，本研究建立了 QuEChERS 結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定香蕉中8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的分析方法。以1%乙酸-乙腈（V/V）為提取溶劑，樣品前處理采用 QuEChERS 方法。以Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18柱為分離色譜柱，甲醇和5 mmol/L 乙酸銨-0.1%甲酸緩沖溶液為流動(dòng)相，0.25 mL/min的流速梯度洗脫，10 min內(nèi)可實(shí)現(xiàn)8種目標(biāo)待測(cè)物分離。8種目標(biāo)待測(cè)物經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下測(cè)定，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，在5.0～100.0 μg/kg范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（r2）≥0.999;檢出限（LODs）范圍為0.03～0.6 μg/kg，定量限范圍為0.10～2.0 μg/kg。在10、20、100 μg/kg 3個(gè)添加水平范圍內(nèi)，平均回收率在73.5%～107.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于11%。本方法簡(jiǎn)便、快速、便捷、靈敏、準(zhǔn)確，適用于香蕉中8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的測(cè)定。本方法的建立可為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在其他果蔬中的殘留檢測(cè)提供參考。

關(guān)鍵詞：QuEChERS;植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑;超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;香蕉

中圖分類號(hào)：S668.1 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Simultaneous Determination of 8 Plant Growth Regulator Residues in Banana by Using Ultra High Performance Liquid Chromatography- Tandem Mass Spectrometry in Combination with QuEChERS Metho-

dology

WU Xuejin， WANG Mingyue*， MA Chen， ZHANG Qun， PANG Chaohai

Analysis and Testing Center， Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences / Hainan Provincial Key Laboratory of Quality and Safety for Tropical Fruits and Vegetables， Haikou， Hainan 571101， China

Abstract： In order to determine the residue of plant growth regulators in banana， a method was developed for the simultaneous determination of 8 plant growth regulators residues （PGRs） in banana by using QuEChERS （quick， easy， cheap， effective， rugged and safe） purification coupled with ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）. Using acetonitrile containing 1% acetic acid （V/V） as extraction solvent， the samples was prepared by the modified QuEChERS method. The chromatographic separation of 8 target compounds was accomplished in an Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 column using methanol and 5 mmol/L ammonium acetate-0.1% formic acid buffer solution as mobile phase by gradient elution at a flow rate of 0.25 mL/min in 10 min. The 8 target compounds were analyzed by using UPLC-MS/MS in selective reaction monitoring （SRM） mode and then were quantified by the matrix matched standard calibration curve method. The method evaluation was done by matrix-matched calibration with linearity ranging from 5 to 100 ?g/kg with a correlation coefficient more than 0.999. The detection and quantification limit ranged from 0.03 to 0.6 ?g/kg and 0.10 to 2.0 ?g/kg， respectively. The average recoveries at three spiked concentration levels of 10， 20， 100 ?g/kg for all target compounds in the samples were in the range of 73.5% to 107.2%， with relative standard deviations （RSD） not more than 11%. The method is simple， quick， convenient， sensitive， and can be applied to analyze 8 plant growth regulators in banana. This method will provide a reference for the residue detection of plant growth regulators in other fruits and vegetables.

Keywords： QuEChERS; plant growth regulators; ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS/MS）; banana

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.11.022

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（plant growth regulators， PGRs）是化學(xué)合成的與植物內(nèi)源激素有相似生理作用的一類物質(zhì)，在較低濃度下就能調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育和代謝過(guò)程，達(dá)到增產(chǎn)增效、改善品質(zhì)等目的，在現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用[1]。PGRs大部分屬于無(wú)毒或低毒化學(xué)品，但近些年來(lái)，媒體對(duì)PGRs在果蔬中殘留的問(wèn)題炒作事件時(shí)有耳聞，引發(fā)公眾對(duì)PGRs殘留在食品安全問(wèn)題上的關(guān)注和擔(dān)憂。如前幾年“乙烯利催熟香蕉”事件，不僅嚴(yán)重沖擊了海南香蕉產(chǎn)業(yè)，也使部分消費(fèi)者產(chǎn)生了恐慌心理。

香蕉（Musa spp.）屬于芭蕉科（Musaceae）芭蕉屬（Musa L.），由于其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，甘甜可口，是世界四大水果之一。根據(jù)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)（香蕉）技術(shù)體系抽樣調(diào)查，2017年我國(guó)香蕉種植面積年總產(chǎn)量分別為393 333.3 hm2和1250萬(wàn)t[2]，香蕉產(chǎn)業(yè)已成為我國(guó)海南、福建、廣東、廣西、云南等熱區(qū)重要農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)之一。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑作為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高效農(nóng)業(yè)的一項(xiàng)技術(shù)措施，也廣泛應(yīng)用用于香蕉的生產(chǎn)[3-4]。我國(guó)在GB 2763—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中規(guī)定了乙烯利在香蕉殘留限量值為2.0 mg/kg，但對(duì)其他PGRs在香蕉上并未規(guī)定殘留限量值。目前國(guó)內(nèi)外已有采用QuEChERS結(jié)合LC-MS/MS測(cè)定多種水果中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的研究報(bào)道，但單獨(dú)針對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在香蕉中殘留檢測(cè)相關(guān)研究尚未見報(bào)道。研究開發(fā)快速、便捷、可靠的多組分植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在香蕉中殘留的檢測(cè)方法對(duì)于提高香蕉產(chǎn)品質(zhì)量安全、保障香蕉產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。

本文采用QuEChERS結(jié)合超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，通過(guò)優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)和色譜條件，考察了色譜柱、流動(dòng)相、提取方法、凈化材料和基質(zhì)效應(yīng)等因素，建立超高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定香蕉殘留中8種PGRs殘留的檢測(cè)方法。本方法的建立可為香蕉及其他水果基質(zhì)中多種PGRs的殘留檢測(cè)提供參考。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?材料與試劑 ?香蕉樣品購(gòu)自海南省?？谑挟?dāng)?shù)厮袌?chǎng)。甲醇、乙腈、甲酸，均為HPLC級(jí)，美國(guó)Fisher公司;乙酸銨（HPLC級(jí)），美國(guó)TEDIA 公司;陶瓷均質(zhì)子（貨號(hào)：5982-9313）、QuEChERS 萃取鹽包（貨號(hào)：5982-6650）、QuEChERS 凈化試劑盒（貨號(hào)：5982-5022，5982-5122，5982-0028，5982-5421），美國(guó)Agilent公司;超純水，經(jīng)Milli-Q超純水系統(tǒng)制備。

8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品：甲哌啶（mepiquat chloride）、矮壯素（chlormequat chloride）、氯吡脲（forchlorfenuron）、噻苯?。╰hidiazuron），購(gòu)自美國(guó) Cato公司;6-芐基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）、蕓苔素內(nèi)酯（brassinolide）、抑芽唑（triapentheno），購(gòu)自德國(guó) Dr. Ehrenstorfer 公司;多效唑（paclobutrazol，1000 mg/L）購(gòu)自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心。以上標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量濃度均大于97%。

1.1.2 ?儀器與設(shè)備 ?TSQ Quantum Access MAX 超高壓液相–三重四極桿質(zhì)譜儀，美國(guó)Thermo Scientific公司;L204型電子分析天平，瑞典梅特勒托利多公司;MS 3basic 圓周振蕩器，德國(guó)IKA公司;Eppendorf 5415R小型冷凍離心機(jī)，艾本德中國(guó)有限公司;LXJ-ⅡB型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠;TXW-80A 微型渦旋混合儀，上海滬西分析儀器廠有限公司。

1.2 ?方法

1.2.1 ?標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 ?單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：將矮壯素等8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)品分別用甲醇配制成為質(zhì)量濃度為100 mg/L單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，將其置于–18 ℃避光密封儲(chǔ)存?zhèn)溆茫ㄓ行跒?個(gè)月）。

單標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取0.1 mL的上述單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL的容量瓶，用甲醇定容，配制成1.0 mg/L的單標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于質(zhì)譜檢測(cè)條件優(yōu)化使用（有效期為7 d）。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備中間液：準(zhǔn)確吸取8種單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1.0 mL置于10 mL容量瓶，用甲醇定容，配制成10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備中間液，將其置于4 ℃避光保存（有效期為30 d）。

混合標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液：分別移取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備中間液，用甲醇稀釋配制成濃度為5、10、25、50、100 μg/L 系列混合標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

混合香蕉標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液：分別移取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備中間液，用空白香蕉基質(zhì)溶液稀釋成濃度為5、10、25、50、100 μg/kg 系列混合標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 ?樣品前處理 ?香蕉樣品取全果切碎打漿混勻，制成待測(cè)樣品，分裝于潔凈容器，置于–18 ℃?zhèn)溆?。稱取10.00 g （精確至0.01 g）樣品于50 mL具塞離心管中，為了讓樣品與提取液充分混勻，在離心管內(nèi)置有1個(gè)陶瓷均質(zhì)子，加入10.0 mL含1%（V/V）乙酸-乙腈溶液，置于4 ℃冰箱內(nèi)30 min;加入QuEChERS 萃取鹽包，于1500 r/min振蕩勻質(zhì)2 min;然后以4000 r/min離心3min，取1.5 mL上清液置于QuEChERS 分散凈化試劑管，渦旋混勻30 s后于10 000 r/min離心3 min;上清液用一次性注射器吸取，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，濾液按儀器優(yōu)化工作條件進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 ?提取溶劑的選用及提取操作 ?乙腈對(duì)于不同極性的物質(zhì)均有較好的溶解性能，適用于萃取極性范圍較寬的多種農(nóng)藥組分，且所提取的色素等干擾物質(zhì)較少，適合于多組分同時(shí)檢測(cè)的要求。是目前使用最廣泛的提取溶劑。黃何何等[5]發(fā)現(xiàn)，選用含1%（V/V）乙酸的乙腈溶液作為提取溶劑時(shí)，帶有羧基官能團(tuán)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如赤霉素的萃取效率較高，這是由于在酸化乙腈條件下抑制了羧基在溶液中電離成離子形態(tài)。本研究也采用含1%（V/V）乙酸的乙腈溶液為提取劑。

1.2.4 ?提取體系的選用及提取操作 ? ?QuEChERS方法[6]于2003年被提出后，經(jīng)過(guò)各國(guó)學(xué)者多年的優(yōu)化和改進(jìn)，目前形成了2種分析方法，即2007年美國(guó)發(fā)布的AOAC 2007.01法（醋酸鹽緩沖體系）和2008年歐盟發(fā)布的EN 15662法（檸檬酸鹽緩沖提取體系）。郝杰等[7]考察了原始的QuEChERS法、AOAC 2007.01法、EN 15662法等5種不同方法，結(jié)果表明，對(duì)于矮壯素等34種不同的PGRs在不同果蔬基質(zhì)中，采用EN 15662法的提取效率最優(yōu)，這可能是由于檸檬酸鹽緩沖體系使得某些對(duì)pH敏感的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑能夠被有效提取出來(lái)。因此，本研究也采用EN 15662法，所選取的QuEChERS 萃取鹽包內(nèi)含4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 檸檬酸鈉和0.5 g檸檬酸二鈉鹽。萃取鹽包內(nèi)含的MgSO4、NaCl用于去除提取體系中的水分，促進(jìn)待測(cè)物從水相轉(zhuǎn)移到有機(jī)相;檸檬酸鹽用于調(diào)節(jié)提取體系的pH，穩(wěn)定提取體系的多組分成分。

1.2.5 ?凈化方式的選用 ?QuChERS常用的吸附凈化材料有N-丙基乙二胺（PSA）、C18、石墨化炭黑（GCB）等，其中PSA吸附劑可通過(guò)其乙二胺N-丙基官能團(tuán)的極性作用，吸附樣品中的有機(jī)酸、脂肪酸和糖等干擾物;C18吸附劑可通過(guò)其在硅膠上鍵合了十八烷基官能團(tuán)的非極性作用，吸附極性較弱的脂肪酸、烯烴類及甾醇類、色素等大分子基;石墨化炭黑（GCB）對(duì)葉綠素、類胡蘿卜素等色素以及固醇類雜質(zhì)有很好的效果，但對(duì)含有平面結(jié)構(gòu)的化合物具有強(qiáng)吸附作用[8]。

為了更好地凈化檢測(cè)液，減少干擾成分，提高分析準(zhǔn)確度，本研究設(shè)計(jì)了4種凈化方案：（1）50 mg PSA+150 mg MgSO4 ;（2）50 mg PSA+50 mg C18+150 mg MgSO4 ;（3）50 mg PSA+50 mg C18+7.5 mg GCB+150 mg MgSO4 ;（4）50 mg PSA+50 mg C18+50 mg GCB+150 mg MgSO4。取空白樣品，配制成質(zhì)量濃度為0.50 μg/mL的上述8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的混合標(biāo)液;吸取1.5 mL混合標(biāo)液加入上述4種凈化材料體系中，每種方案做6個(gè)平行樣品，通過(guò)其平均回收率考察不同方案的凈化效果，最終選定優(yōu)化方案。

1.2.6 ?基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià) ?基質(zhì)效應(yīng)（matrix effect，ME）是指樣品分析液中除分析物以外的共流出組分改變了目標(biāo)分析物的響應(yīng)值，從而影響定量分析的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性的現(xiàn)象。基質(zhì)效應(yīng)可按下列公式計(jì)算：ME=（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率/試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率）×100%[9]。若ME在80%～120%范圍內(nèi)，表明基質(zhì)效應(yīng)不明顯;若ME>120%，表明基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)顯著;若ME<80%，表明基質(zhì)抑制效應(yīng)顯著[10]。

1.2.7 ?液相條件 ?采用Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18柱（3.0 mm× 100 mm，2.7 μm）;柱溫為35 ℃;進(jìn)樣體積為2.0 μL;流速為0.25 mL/min;流動(dòng)相A為5 mmol/L 乙酸銨-0.1%甲酸（V/V）水緩沖溶液，流動(dòng)相B為甲醇。梯度洗脫程序：0～1.5 min，10% B;1～2.5 min，10%～60% B;2.5～4.0 min，60% B;4.0～5.0 min，60%～98% B;5.0～9.0 min，98% B;9.0～10.0 min，98%～100% B。

1.2.8 ?質(zhì)譜條件 ?離子源：電噴霧離子源（elaectrospray ionization，ESI），采用ES+和ES-互切換模式;監(jiān)測(cè)方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（selective reaction monitoring，SRM）;離子化溫度：350 ℃;離子傳輸管溫度：320 ℃;離子化電壓：正極4000 V，負(fù)極–2700 V;鞘氣壓力：45.0 psi;輔助氣壓力：8.0 Arb。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采集和定性分析使用儀器所配置軟件Thermo Scientific Xcalibur 4.1;定量分析使用儀器所配置軟件Thermo TraceFinder 4.1，采用外標(biāo)法模式。

2 結(jié)果與分析

2.1 ?UPLC-MS/MS工作條件優(yōu)化

采用電噴霧離子源（ESI），在正、負(fù)離子互切換監(jiān)測(cè)模式下，將質(zhì)量濃度為1.0 mg/L的8種植物調(diào)節(jié)劑單標(biāo)準(zhǔn)溶液以50 μL/min的流速分別持續(xù)注入離子源，通過(guò)一級(jí)全掃描（full scan）模式確定豐度較高且穩(wěn)定的母離子。確定母離子后，采用Q1掃描模式，優(yōu)化Tube Lens 電壓值，使分子流順利通過(guò)錐孔的母離子豐度達(dá)到最大值;在確定優(yōu)化Tube Lens 電壓值下，采用Q3掃描模式，對(duì)母離子給予一定的碰撞能量，全掃描二級(jí)子離子，選取豐度相對(duì)較高的2個(gè)子離子分別作為定量和定性離子。在8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑中，6-芐基腺嘌呤、氯吡脲、噻苯隆、蕓苔素內(nèi)酯在正負(fù)離子模式下均有響應(yīng)，但正離子模式下響應(yīng)值較高，因此最終8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑均采用正離子模式掃描。具體優(yōu)化分析條件見表1。

2.2 ?色譜條件的優(yōu)化

多組分分析方法的建立需要兼顧極性差異較大的各種化合物，選擇合適的色譜柱是關(guān)鍵，因此本研究考察了Thermo Hypersil Gold C18柱（100 mm×2.1 mm， 1.9 μm）、Waters Acquity BEH C18柱（100 mm×2.1 mm， 1.7 μm）、Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18柱（2.1 mm×150 mm， 1.8 μm）、Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18柱（3.0 mm×100 mm， 2.7 μm）和Agilent ZORBAX SB-Aq柱（2.1 mm×100 mm， 1.8 μm）色譜柱對(duì)上述8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑待測(cè)組分分離的效果。在確定液相條件（見2.3節(jié)）下，經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)強(qiáng)極性的矮壯素在上述色譜柱的保留時(shí)間分別為0.43、0.60、0.87、1.82、4.00 min，但矮壯素在Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱的拖尾比較嚴(yán)重，見圖1。由于矮壯素在Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18色譜柱得到很好的保留，且其他7種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑待測(cè)化合物在全時(shí)間段上也可以均勻出峰，故最終選定Agilent Infinity Lab Poroshell 120 EC-C18柱作為后續(xù)研究用的色譜柱。

2.3 ?流動(dòng)相的比較及選擇

考察了乙腈-水、甲醇-水以及甲醇-0.1%甲酸溶液、甲醇-0.1%甲酸-乙酸銨4種緩沖溶液等作流動(dòng)相時(shí)的分離情況。結(jié)果表明，乙腈-水和甲醇-水這2個(gè)體系中，乙腈和甲醇作為強(qiáng)洗脫的流動(dòng)相都能使8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑待測(cè)化合物實(shí)現(xiàn)分離，但其整體響應(yīng)值在甲醇-水體系的相對(duì)要優(yōu)于乙腈-水體系。此外還發(fā)現(xiàn)，在甲醇-水中加入0.1%甲酸能有效改善目標(biāo)待測(cè)物的峰形;進(jìn)一步考察發(fā)現(xiàn)，在水相中加入5.0 mmol/L的乙酸銨后，在正、負(fù)模式下均能促進(jìn)各化合物電離的效果，這與張瀘文等[11]考察不同流動(dòng)相體系對(duì)殘留于果蔬中26種不同PGRs的影響結(jié)果是一致的。綜上考慮，本研究最終確定甲醇-水（內(nèi)含0.1%甲酸和5.0 mmol/L乙酸銨）緩沖溶液體系作為流動(dòng)相。圖2是在香蕉空白基質(zhì)中添加質(zhì)量濃度為100 μg/kg 8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 SRM色譜圖。

2.4 ?凈化方案比較選擇

本研究設(shè)計(jì)的4種凈化方案結(jié)果表明，PSA和C18對(duì)上述8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑均無(wú)明顯吸附作用，但GCB對(duì)6-芐基腺嘌呤、蕓苔素內(nèi)酯、氯吡脲、噻苯隆均有吸附，并且隨著GCB用量由7.5 mg增加至50 mg時(shí)，6-芐基腺嘌呤和蕓苔素內(nèi)酯的回收率均小于40%，而氯吡脲、噻苯隆的回收率則均小于10%（圖3）?；谙憬痘|(zhì)具有高糖、低脂、低色素的特點(diǎn)，結(jié)合上述4種凈化方案的效果，本研究沒有選擇C18和GCB作為凈化材料，只選擇PSA用于去除香蕉基質(zhì)中糖分和脂肪酸，其用量為50 mg，并加入150 mg MgSO4 用于去除提取液中的水分。

2.5 ?方法的線性范圍、檢出限及基質(zhì)效應(yīng)

以香蕉空白樣品提取液配制成的質(zhì)量濃度5、10、25、50、100 μg/kg系列基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在已優(yōu)化的UPLC-MS/MS的條件下進(jìn)行測(cè)定，以待測(cè)目標(biāo)化合物定量離子的峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度x（μg/kg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的線性方程及相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明，矮壯素等8種目標(biāo)待測(cè)物在質(zhì)量濃度為5～100 μg/kg范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系（r2 ≥0.999），線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。

在空白基質(zhì)中添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機(jī)檢測(cè)，以3倍信噪比（S/N≥3）計(jì)算該方法的檢出限（LOD），以10倍信噪比（S/N≥10） 計(jì)算該方法的定量限（LOQ），相關(guān)結(jié)果見表2。

研究結(jié)果還表明，6-芐基腺嘌呤和氯吡脲的基質(zhì)效應(yīng)ME<80%，存在基質(zhì)抑制效應(yīng)，其余6種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的基質(zhì)效應(yīng)ME在80%～120% 范圍內(nèi)，基質(zhì)效應(yīng)不明顯（表2）。為了校正基質(zhì)效應(yīng)的影響，提高定量的準(zhǔn)確度和可靠性，本研究采用基質(zhì)匹配外標(biāo)校準(zhǔn)曲線對(duì)樣品殘留的PGRs殘留進(jìn)行定量。

2.6 ?方法的回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取10 g（精確至0.01g）空白樣品，添加8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，分別配制成添加水平為10.0、20.0、100.0 μg/kg的樣品各6份，進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，考察方法的準(zhǔn)確度和精密度，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑回收率為73.5%～107.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.3%～10.4%，符合方法學(xué)要求。

2.7 ?實(shí)際樣品檢測(cè)

采用本研究建立的方法測(cè)定了采集于?？诒镜厮l(fā)市場(chǎng)和超市的20份香蕉樣品，均未檢出上述8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。

3 ?討論

PGRs殘留的現(xiàn)有檢測(cè)方法有離子色譜法、氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、 液相色譜-質(zhì)譜法[12-17]等，其中液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法具有樣品前處理無(wú)需衍生化反應(yīng)、響應(yīng)靈敏、可同時(shí)定性定量等優(yōu)點(diǎn)，是目前PGRs殘留檢測(cè)分析的優(yōu)選方法。QuEChERS（quick， easy， cheap， effective， rugged and safe）法因其快速、簡(jiǎn)單、有效等顯著優(yōu)點(diǎn)是當(dāng)前多組分農(nóng)藥殘留檢測(cè)的前處理優(yōu)選的方法。盡管目前已有采用QuEChERS法結(jié)合超高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定多組分PGRs在蓮霧、柑橘、葡萄等水果殘留的相關(guān)研究報(bào)道。但香蕉與上述的水果基質(zhì)成分不同，其含的色素、糖分、蛋白質(zhì)以及其他其干擾物種類也不同，所需用凈化材料也不同;另外所測(cè)定的多組分PGRs化合物結(jié)構(gòu)不同，其極性不同，QuEChERS法凈化材料也有所差異;此外不同極性化合物在不同的分離色譜柱的保留時(shí)間也不相同，同步測(cè)定極性差異較大的多組分PGRs化合物所選用的色譜柱也不同。如樂(lè)淵等[18]選用C18和MgSO4作為凈化材料，選用ACQUITY BEH C18色譜柱，應(yīng)用超高效液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定氯吡脲等16種PGRs。夏虹等[19]選用PSA和MgSO4作為凈化材料，選用ACQUITY BEH C18色譜柱，建立了柑橘中矮壯素等12種PGRs殘留的測(cè)定方法。邱暑婷等[20]選用為PSA、C18和MgSO4作為凈化材料，選用Phenomenex XB-C18色譜柱，建立了同時(shí)測(cè)定葡萄中18種PGRs殘留的方法。本研究針對(duì)香蕉基質(zhì)設(shè)計(jì)了4組凈化方案，經(jīng)過(guò)比較最終選用PSA和MgSO4為凈化材料，并細(xì)致地比較了目標(biāo)待測(cè)物在5種色譜柱分離和保留的效果，最終選用Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18作為本研究的分離柱。

本文通過(guò)優(yōu)化色譜條件和質(zhì)譜條件，考察提取和凈化方法，建立了QuEChERS/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定香蕉中8種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)

劑殘留的分析方法。該方法前處理簡(jiǎn)單、便捷、靈敏度高，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，加標(biāo)回收率、精密度、最低檢出限和定量限均能滿足農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求，可用于香蕉中PGRs殘留檢測(cè)分析。該方法的建立，完善香蕉基質(zhì)中多組分農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)技術(shù)，進(jìn)一步完善香蕉產(chǎn)業(yè)體系技術(shù)體系建設(shè)，對(duì)于提高香蕉產(chǎn)品質(zhì)量安全、保障香蕉產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。

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收稿日期 ?2019-11-27;修回日期 ?2020-02-13

基金項(xiàng)目 ?現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（No. CARS-31-13）;國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目“豇豆中典型農(nóng)藥殘留風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估”（No. GJFP2019006）;中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（No. 1630082017003）。

作者簡(jiǎn)介 ?吳學(xué)進(jìn)（1982—），男，碩士，助理研究員，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。*通信作者（Corresponding author）：王明月（WANG Mingyue），E-mail：hkwmy0815@vip.163.com。