豬偽狂犬病簡述

陳培強(qiáng)，張果，宇凌

（1.山東省菏澤市定陶區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，山東菏澤274000；2.山東省菏澤市定陶區(qū)馬集鎮(zhèn)政府，山東菏澤274000；3.山東省菏澤市動物疫病防控控制中心，山東菏澤274000）

偽狂犬?。≒seudorabies，PR），也稱奧耶斯基氏病（Aujeszky's disease），牛發(fā)病又稱“瘋癢病”（mad itch），是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種急性傳染病，可導(dǎo)致多種家畜如豬、牛、羊、犬、家兔和野生動物如水貂、狐、小鼠等發(fā)病[1]。PR的傳播途徑十分廣泛，其主要的傳播方式是直接接觸傳播，也可通過帶有病毒的空氣飛沫傳播此病，由呼吸道、皮膚傷口、消化道等侵入機(jī)體。PRV的自然宿主和傳播者是豬，其主要傳染源為病豬、隱性不發(fā)病帶毒豬以及帶毒鼠類[2]。臨床上，不同年齡階段的豬感染PRV后，表現(xiàn)出不同的癥狀。育肥豬表現(xiàn)為僵豬、生長發(fā)育遲緩，料肉比高；保育豬和新生仔豬常表現(xiàn)出典型的神經(jīng)癥狀、頑固腹瀉以及呼吸系統(tǒng)綜合征，病死率高；公豬常表現(xiàn)為辜丸腫脹或萎縮，種用功能降低甚至喪失；母豬感染多表現(xiàn)為產(chǎn)死胎、木乃伊胎、流產(chǎn)等繁殖障礙性疾病[3]。

1 病原學(xué)

1.1 PRV的分類和形態(tài)結(jié)構(gòu)

PRV主要由囊膜、衣殼、核心組成，外形為橢圓形或圓形，其粒子直徑為150～180 nm[4]。PRV屬于皰疹病毒科，甲型皰疹病毒亞科，水泡病毒屬的豬皰疹病毒I型[4]。PRV的基因組大小約為150 kb，是線性雙股DNA分子，由長獨特區(qū)（UL）、短獨特區(qū)（US），以及US兩側(cè)的末端重復(fù)序列（TR）與內(nèi)部重復(fù)序列（IR）組成。

PRV基因組的G+C含量是皰疹病毒中最高的，可高達(dá)73%[5-6]，至少包含了70個基因，可編碼70～100種病毒蛋白[7]。PRV的基因組能夠表達(dá)在感染機(jī)制中充當(dāng)不同作用的調(diào)控蛋白，主要由囊膜層蛋白和中間層控制其致病性[8]。目前已發(fā)現(xiàn)了分泌蛋白gG和10種病毒囊膜蛋白gH、gM、gK、gE、gL、gI、gC、gB、gD和gN。10種病毒囊膜蛋白在病毒感染、病毒和細(xì)胞的相互作用等病理過程和免疫原性中分別發(fā)揮著特殊的作用[9]。這些糖蛋白可根據(jù)其在病毒復(fù)制過程中具有的不同作用分為非必需糖蛋白和必需糖蛋白。其中g(shù)B、gD、gH、gK和gL為必需糖蛋白，是在PRV復(fù)制過程中不可或缺的；而非必需糖蛋白并非PRV復(fù)制過程中所必需，包括gC、gG、gE、gM、gI和gN。

目前尚不了解gG蛋白在病毒的吸附和擴(kuò)散過程中所起的作用，但其在病毒的免疫逃避功能中不可或缺[10]。gD蛋白主要在病毒的吸附過程中起著關(guān)鍵性作用，可結(jié)合腫瘤壞死因子激發(fā)膜融合機(jī)制，促使病毒囊膜和受體細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)行融合[11-13]。位于PRV基因組短獨特區(qū)（US）的gE和gC蛋白分別主要參與PRV內(nèi)毒素的表達(dá)[11]以及病毒誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的過程[14]。gB蛋白在皰疹病毒科糖蛋白中是最保守的，其位于PRV基因組長獨特區(qū)（UL），是病毒感染擴(kuò)散過程中不可或缺的糖蛋白[15-16]。

1.2 PRV的理化特征

目前，PRV只發(fā)現(xiàn)一種血清型，但在不同地區(qū)所分離出的毒株都毒力和生物學(xué)特性存在差異。豫A株、鄂A株、閩A株、SR株等是我國目前所分離出的病毒株，也屬于同一個血清型[17]。

PRV雖然能夠在多種細(xì)胞上進(jìn)行增殖，但在不同類型的細(xì)胞中增殖所表現(xiàn)出的敏感性不相同。通過學(xué)者們的不懈努力，發(fā)現(xiàn)目前最適合該病毒增殖的是豬腎細(xì)胞和兔腎細(xì)胞。但是增殖過后，這兩種細(xì)胞的形狀卻表現(xiàn)出很大的差異性。豬腎細(xì)胞感染后，細(xì)胞固縮、變圓，不產(chǎn)生合胞體，細(xì)胞折射率增加；兔腎細(xì)胞感染PRV病毒后，有的細(xì)胞中度變圓，有的形成巨大的合胞體。PRV也可在動物身上進(jìn)行接種增殖，在1日齡小鼠和兔子身上進(jìn)行接種，但兩者接種后的敏感性差別不明顯。PRV生命力頑強(qiáng)，在適宜的條件下能夠長久存活，要在55～60℃保持30～50 min或80℃保持3 min將其滅活[18]。但是PRV對紫外線照射以及某些消毒劑敏感，如次氯酸鈉0.5%、酚類5%均能使病毒在10 min內(nèi)失去活性，太陽直射該病毒，也能使病毒失去活性。

1.3 PRV的致病機(jī)理

通常情況下，自然感染PRV的豬通常通過口鼻等途徑感染，在上呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)完成PRV的復(fù)制。

PRV在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行增殖的過程中，首先是gC糖蛋白與受體的結(jié)合，然后通過gD、gH、gL、gB等糖蛋白的作用下完成復(fù)制，之后通過淋巴和血液循環(huán)進(jìn)入機(jī)體的不同器官，完成擴(kuò)散。此外，PRV還會從早期的復(fù)制部位直接侵入到嗅覺神經(jīng)末梢、三叉神經(jīng)等部位，從而進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引發(fā)腦炎癥狀[19-20]。

PRV的致病性強(qiáng)弱與接種病毒量、感染方式、PRV毒株和豬日齡等均密切相關(guān)[21]。研究表明，不同接種方式感染的易感動物，其癥狀具有很大差異性。通過支氣管內(nèi)、肌肉注射、胃內(nèi)、腦內(nèi)等部位接種PRV與自然感染相比，其癥狀差異性很大，但人工鼻內(nèi)接種PRV與自然感染相比，其癥狀基本相同。豬日齡也是影響PRV致病性強(qiáng)弱的重要因素，如抵抗力較弱、易感染PRV的仔豬、保育豬隨著日齡增大，會不斷增強(qiáng)其對PRV的抵抗力。感染PRV弱毒株的成年豬，通常沒有明顯的臨床癥狀，大多數(shù)都能夠耐過。但感染了PRV強(qiáng)毒株的豬，不論日齡大小均表現(xiàn)出一定臨床癥狀[22-23]。

2 豬偽狂犬病的流行病學(xué)

2.1 傳染源

PRV的主要傳染源包括病豬、帶毒豬以及帶毒的鼠類，豬是其主要貯存宿主和傳播宿主。

PRV主要由感染豬的鼻涕、唾液、尿液和乳汁等途徑排出體外[24]，而健康豬一旦接觸病豬或其污染的水、飼料、糞便、環(huán)境中的各種器具等就會發(fā)生感染。成年豬感染后，一般不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，但會長期帶毒、排毒，進(jìn)而導(dǎo)致PRV的大面積感染[25]。

2.2 傳播途徑

PRV的主要傳播途徑是口鼻分泌物、精液和乳汁等，通過自然接觸、呼吸道、消化道、配種等多種方式進(jìn)行傳播[26]。此外，糞便、尿液、污染水和飼料等都含有PRV，研究證實，作為一種介質(zhì)，空氣也可以傳播該病，被PRV污染的空氣至少能夠隨風(fēng)傳到9 km以外，感染健康豬群[27]。

2.3 易感群體

PRV能夠在自然條件下感染多種動物發(fā)病，可感染鼠、兔、貓、犬、羊、水貂、狐等動物[28-29]。豚鼠、小鼠、家兔等實驗動物都易感，又以家兔最敏感。之前對于PRV能否感染人類一直有爭議，通常認(rèn)為人對PRV具有天然抵抗力[30]。Von等研究表明，有疑似PRV感染人的報道，但確診依據(jù)不足[31-34]。2018年，Ai等首次在基因水平上確診了PRV感染人，且感染毒株與近年在我國流行高毒力變異株高度同源[35-37]。經(jīng)過流行病學(xué)的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)患者在發(fā)病之前曾與豬場污水接觸，之后患者主要癥狀表現(xiàn)為眼內(nèi)炎，通過特異性PCR檢測與血清學(xué)PRV抗體檢測相結(jié)合，患者確診感染。同年，趙偉麗等使用流行病學(xué)史結(jié)合臨床癥狀及腦脊液二代測序的方法，也確診4人感染PRV[38]。至此，人類可以被PRV的變異株跨越物種界限感染已被確定，所以PRV的綜合防控十分必要。

3 豬偽狂犬病的診斷

3.1 豬偽狂犬病血清學(xué)檢測

3.1.1酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA的特點是特異性強(qiáng)、敏感性高，可同時進(jìn)行大批量樣品的檢測，并在3～4 h內(nèi)可得出試驗結(jié)果，廣泛應(yīng)用于PR的臨床診斷中。ELISA包含了間接法、競爭法、雙抗夾心法以及一些最近發(fā)展改良的方法[39]。通過因基因缺失疫苗免疫動物不能產(chǎn)生針對缺失蛋白抗體的特點，ELISA可將自然感染野毒與注射疫苗產(chǎn)生的血清學(xué)PRV陽性豬進(jìn)行區(qū)分。

3.1.2中和試驗

PRV血清中和試驗是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）的法定診斷方法，其特異性、敏感性較好。其原理是PRV與特定的免疫血清進(jìn)行中和，通過感染毒力的強(qiáng)弱來判斷免疫血清中和病毒的能力。但由于其技術(shù)條件要求較高、時間較長，故而主要用于實驗室研究。

3.1.3乳膠凝集試驗

乳膠凝集試驗是利用膠乳顆粒具有吸附蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的特性來包被抗原，檢測血清中是否含有PRV抗體的試驗方法。通過待檢血清中抗體和抗原結(jié)合發(fā)生凝集反應(yīng)來判斷是否感染PRV。操作比較簡便，用時很短，在防疫工作被廣泛應(yīng)用[40]。

3.2 病原檢測

3.2.1分離鑒定

患病動物的病料組織以扁桃體和腦組織最為理想，但其他病料組織如、心、腎、肺、肝、脾等均可用于病毒的分離。處理后的病料可直接接種倉鼠腎傳代細(xì)胞（BHK-21）、雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）或豬腎傳代細(xì)胞（PK-15和IBRS-2）等敏感細(xì)胞，典型的細(xì)胞病變在接種后24～72 h即可出現(xiàn)。再用標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和分離到的病毒中和試驗確診。此方法用來診斷PR雖然可靠，但費(fèi)時費(fèi)力，不符合實際生產(chǎn)的需要。

3.2.2組織切片熒光檢測（FA）

組織切片熒光檢測是用免疫熒光抗體來檢測制成冰凍切片或壓片的病料，試驗結(jié)果可通過熒光顯微鏡觀察得到。之后，黃駿明等又建立了用以檢測PRV的直接FA技術(shù)，用活體病豬或病死豬的病料組織進(jìn)行涂片，使用免疫熒光抗體檢測，檢出率高達(dá)95%以上，用時也較少，可控制在幾小時之內(nèi)[41]。該方法對于新生仔豬，其敏感性與病毒分離鑒定差異很小，對于育肥豬和成年豬，該方法不如病毒分離敏感。

3.2.3 PCR檢測技術(shù)

檢測PRV的PCR方法是由Belak等率先建立[42]。PCR檢測技術(shù)原理是提取患病動物病料中PRV，進(jìn)行基因擴(kuò)增，從而確診PR。PCR檢測技術(shù)與病毒分離鑒定相比，能同時檢測大批量的樣品，具有特異性強(qiáng)、敏感、快速等優(yōu)點，并且能進(jìn)行活體檢測，非常適合于臨床診斷。

4 豬偽狂犬病的防控與凈化

4.1 豬偽狂犬病的綜合防控

豬偽狂犬病防控的關(guān)鍵涵蓋了生產(chǎn)、防疫、生物安全等各個方面。任何傳染病的防控都需要從控制傳染源、切斷傳播途徑、保護(hù)易感動物來入手，因此，應(yīng)綜合考慮豬偽狂犬病的防控。

4.1.1生產(chǎn)管理

豬場在飼養(yǎng)管理上應(yīng)盡量堅持自繁自養(yǎng)，實行分區(qū)飼養(yǎng)和全進(jìn)全出的生產(chǎn)模式，合理調(diào)整養(yǎng)殖密度和分群飼養(yǎng)，可降低群體間相互傳播疫病的風(fēng)險。豬場首先要建立豬偽狂犬病的監(jiān)測計劃，及時掌握豬偽狂犬病的流行現(xiàn)狀、免疫保護(hù)水平及相關(guān)風(fēng)險因素，要定期進(jìn)行病原學(xué)和免疫抗體監(jiān)測以及野毒感染與疫苗免疫鑒別診斷檢測，適時調(diào)整控制策略。豬場還應(yīng)建立完善的引種、隔離、免疫、疫情報告、淘汰、投入品（飼料、獸藥、生物制品）、獸醫(yī)診療與用藥、病死豬無害化處理和消毒等防疫制度，加強(qiáng)生產(chǎn)制度的管理。豬場還要做好檔案的記錄管理，確保疫病的可追溯性，包括獸醫(yī)管理（診療、引種、檢測、免疫、用藥、淘汰、病死豬無害化處理）生產(chǎn)管理（生長、保育、配種、懷孕、產(chǎn)仔）等記錄。在免疫制度和生物制品管理上要嚴(yán)格要求，防止因為使用和存放豬偽狂犬病疫苗或人員操作不當(dāng)而造成免疫失敗。

4.1.2防疫管理

豬場應(yīng)根據(jù)區(qū)域內(nèi)豬偽狂犬病的疫苗情況、流行情況等制定合理的免疫程序，分階段和種群、有步驟的進(jìn)行免疫，同時建立豬場的免疫檔案。規(guī)?；B(yǎng)豬場還應(yīng)建立PR的監(jiān)測計劃，定期進(jìn)行病原學(xué)和免疫抗體檢測以及野毒感染與疫苗免疫鑒別診斷檢測，及時掌握流行現(xiàn)狀、免疫保護(hù)水平及相關(guān)風(fēng)險因素，并適時調(diào)整控制策略?，F(xiàn)階段主要依賴疫苗免疫進(jìn)行PR的防控，市場上用于防控的疫苗有弱毒疫苗、滅活苗、亞單位苗、基因缺失疫苗、基因疫苗、病毒載體重組疫苗等。

1979年我國開始引進(jìn)Bartha-K61株疫苗，疫苗的大規(guī)模應(yīng)用在一定程度上控制了PR疫情。但PRV毒株在2011年之后發(fā)生了變異使得防控的局面更加嚴(yán)峻，即使豬場免疫過疫苗，仍然會疫情發(fā)生。經(jīng)研究，傳統(tǒng)的Bartha-K61疫苗已經(jīng)不能對當(dāng)前中國豬群中的流行株提供完全的保護(hù)力[43-45]，但也有研究表明，通過增加傳統(tǒng)的Bartha-K61株疫苗的免疫次數(shù)對豬群仍有完整的保護(hù)力[46]。此外，HB-98株或基因缺失三聯(lián)疫苗SA215株也不能保證提供有效的保護(hù)力，gE/gI/TK缺失疫苗、滅活的gE/gI/TK缺失疫苗、gE/gI缺失疫苗的有效性和安全性也需要進(jìn)一步研究[47-49]。

4.1.3生物安全管理

加強(qiáng)生物安全控制措施，對PR的防控也起著至關(guān)重要的作用。首先應(yīng)嚴(yán)格做好豬場環(huán)境的消毒。選擇對PRV敏感的消毒劑，如酚類、氯仿、乙醚、酒精等消毒劑，定期對生活區(qū)、生產(chǎn)區(qū)以及生產(chǎn)區(qū)周圍環(huán)境進(jìn)行消毒。消毒時應(yīng)保證消毒劑的有效成分濃度，并定期更換不同種類的消毒液，以確保消毒效果。除日常預(yù)防性消毒外，還應(yīng)根據(jù)本地區(qū)動物疫病流行情況確定是否增加消毒頻率，為防止外來疫病傳入還應(yīng)嚴(yán)格控制人員和車輛出入。

其次是做好病死豬的無害化處理。任何原因病死的豬，都要按照《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》來進(jìn)行無害化處理，減少疫病傳播風(fēng)險。養(yǎng)殖場內(nèi)還應(yīng)禁止飼養(yǎng)貓、狗、禽等其他動物，定期做好滅鼠工作，降低豬偽狂犬病的傳播風(fēng)險。

最后，養(yǎng)殖場戶應(yīng)做好種源管理。養(yǎng)殖場戶應(yīng)盡量堅持自繁自養(yǎng)，確實需要引種時，所引種源需從獲得農(nóng)業(yè)部凈化評估認(rèn)證的種豬場引種，種源都應(yīng)來自具有《種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營許可證》的種豬場，包括從國外引進(jìn)的精液、種豬也應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定，減少PR垂直傳播的幾率。此外，要嚴(yán)格的隔離所引種豬并檢測，隔離天數(shù)足夠并確定豬群沒有相關(guān)疾病時，方可投入生產(chǎn)。

4.2 豬偽狂犬病的凈化

強(qiáng)農(nóng)惠農(nóng)政策有效實施，畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化以及區(qū)域化不斷發(fā)展，養(yǎng)殖生產(chǎn)、生產(chǎn)效益中動物疫病的影響也日益突出。規(guī)模養(yǎng)殖企業(yè)和養(yǎng)殖經(jīng)營者要提高效益和不斷謀求發(fā)展，免疫結(jié)合診治和撲殺的綜合防控措施已不合時宜。動物疫病難以通過免疫政策消滅或消除，必將對養(yǎng)殖動物的生產(chǎn)繁育和健康產(chǎn)生持續(xù)的危害，養(yǎng)殖者經(jīng)營成本和風(fēng)險也不斷增加。有實力和條件的種畜禽場和規(guī)?；B(yǎng)殖企業(yè)為了擺脫這種境況，積極開展相關(guān)動物疫病的凈化，國家和政府順應(yīng)民意也嘗試探索區(qū)域內(nèi)動物疫病的凈化模式和措施。

4.2.1國外豬偽狂犬病的凈化

要想從真正意義上控制PR，必須實施PR的凈化。通過總結(jié)國外豬偽狂犬病的凈化經(jīng)驗，均經(jīng)歷了免疫、檢測、淘汰、凈化的過程。比如荷蘭在1993年啟動的PR根除計劃[50]主要分三個階段，先是凈化各個豬場，然后凈化各區(qū)域，最后控制各區(qū)域以達(dá)到凈化的目標(biāo)。美國在1988年制定的PR的根除計劃，分為五個階段，即準(zhǔn)備階段、控制階段、強(qiáng)制性豬群凈化階段、監(jiān)控及監(jiān)督階段、無病階段[51]。1989年德國實施的PR凈化，也經(jīng)歷了“免疫—檢測、淘汰—再免疫—再檢測、淘汰—無疫”等階段。

4.2.2國內(nèi)豬偽狂犬病的凈化

國家在《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中提出：實施分病種、分區(qū)域、分階段的動物疫病防治策略，有計劃地控制、凈化和消滅嚴(yán)重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)和人民群眾健康安全的動物疫病，PR被明確列為優(yōu)先控制并凈化的疾病[52-54]，要求全國的原種豬場到2015年達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，所有種豬場到2020年達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。

目前國內(nèi)對PR的凈化也有了積極的探索和成效，截至2018年12月全國《豬偽狂犬病凈化示范場》創(chuàng)建成功的共有22個豬場。種豬場的凈化標(biāo)準(zhǔn)是連續(xù)兩年無臨床病例，抗體合格率90%，病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果連續(xù)1年以上無陽性。我國目前凈化PR首先針對的是種豬場，同時向規(guī)?；B(yǎng)豬場逐步推進(jìn)。我國種豬場PR的凈化方案內(nèi)容由6個不同階段組成，即：調(diào)查階段、強(qiáng)化免疫控制、檢疫淘汰、全部或部分清群、監(jiān)測認(rèn)證階段和維持階段，種豬場可根據(jù)實際情況分階段逐步實施。采取淘汰野毒感染豬群，實施高密度免疫假定陰性豬群，同時加強(qiáng)提高綜合飼養(yǎng)管理水平和消毒等措施的方式開展國內(nèi)的豬偽狂犬病凈化工作。