對凝聚胺法與微柱凝膠法兩種交叉配血方法陽性結(jié)果的研究分析

金勇，李繼東，余小平

東臺市人民醫(yī)院輸血科，江蘇東臺 224200

常用的交叉配血有鹽水介質(zhì)法、 抗人球蛋白法、微柱凝膠法及木瓜蛋白酶法等[1]。 以往交叉配血多采用鹽水介質(zhì)法，但隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，交叉配血方法也得到了不斷改進與更新，近年來，應(yīng)用比較廣泛的交叉配血方法為凝聚胺法和微柱凝膠法[2]。 為對比兩種交叉配血的陽性結(jié)果， 該院選取了自2016年1 月—2019 年1 月申請輸血患者108 例作為研究對象作交叉配血陽性結(jié)果的研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院申請輸血患者108 例作為研究樣本，分別采用凝聚胺法和微柱凝膠法交叉配血。 108 例患者中，男55 例，女53 例；年齡20～72 歲，平均年齡（50.4±9.2）歲?；颊哌x取標準：年齡在20～89 歲；所有供血者均來自無償獻血者； 所有患者及家屬對該次研究內(nèi)容均知情，且經(jīng)該院倫理委員會批準。

1.2 配血方法

1.2.1 試劑與器械 凝聚胺試劑由珠海貝索生物提供；ABO、RhD 血型定型檢測卡、 不完全抗體檢測卡、ABO 反定型紅細胞、篩選細胞由長春博迅提供； BASO2005-1 型離心機由臺灣貝索提供，TD-3A 型血型血清學離心機和TYQ 型免疫微柱孵育器由長春博研提供。

1.2.2 微柱凝膠交叉配血法 將受血者的血漿與獻血者的紅細胞加入主側(cè)孔、次側(cè)孔中加入受血者紅細胞和獻血者血漿，血漿為50 μL，紅細胞懸液50 μL，濃度為1%。 隨后將試驗卡放入到已設(shè)置好37℃恒溫的TYQ 型免疫微柱孵育器中， 孵育15 min 后， 放置在TD-3A 型血型血清學專用離心機，以900 rpm 的速度離心2 min,再以1 500 rpm 的速度離心3 min，觀察結(jié)果,當紅細胞全部留在凝膠上層，或少量滯留于凝膠柱介質(zhì)中，表示配血不相合;當紅細胞全部沉積于微柱底部，且上清無溶血現(xiàn)象，則表示配血相合[3]。

1.2.3 凝聚胺法交叉配血法 將受血者血漿與獻血者紅細胞懸液放入主側(cè)管中、次側(cè)管中加入受血者紅細胞和獻血者血漿，主側(cè)管和次側(cè)管中血漿和紅細胞懸液分別為2 滴和1 滴，紅細胞懸液的濃度為3%～5%[4]。隨后在主側(cè)管和次側(cè)管中分別加入0.65 mL 低離子介質(zhì)液，讓其與管內(nèi)血漿和紅細胞混合均勻，放置1 min 后，在主側(cè)管和次側(cè)管內(nèi)分別放入2 滴聚凝胺液，混勻后放置于BASO2005-1 型離心機上，以3500r/min的速度離心10 s，倒掉上清液,留取管底約0.1 mL 液體,輕輕搖動試管,目測紅細胞有無凝集,如無,則必須重做;然后滴入2 滴復懸液(Resuspending)輕搖動試管觀察結(jié)果,如在60 s 內(nèi)凝集散開,代表配血結(jié)果相合;如凝集不散開,表示配血結(jié)果不相合,有疑問時,應(yīng)倒在玻片上用顯微鏡進一步觀察。

1.3 指標觀察

對兩組交叉配血結(jié)果進行記錄，分析后進行比較。

1.4 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.00 統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用率(%)表示，采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有顯計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種配血方法的交叉配血結(jié)果

凝聚胺法檢測出7 例陽性樣本，2 例主側(cè)凝聚，4例次側(cè)凝聚，1 例假陽性，微柱凝膠法檢測出13 例陽性樣本，4 例主側(cè)凝聚，6 例次側(cè)凝聚，3 例假陽性。 組間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）, 見表1。

表1 凝聚胺法與微柱凝膠法的交叉配血結(jié)果比較

2.2 兩種配血方法的陽性檢出率

凝聚胺法的總陽性檢出率為6.48%，明顯低于微柱凝膠法的12.04%， 組間差異有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05），見表2 。

表2 兩種交叉配血陽性檢出率比較（%）

2.3 兩種方法的交叉配血相合率

凝聚胺法假陽性1 例標本抗凝不充分，未洗滌紅細胞引起，2 例主側(cè)凝集由于自身抗體影響，4 例次側(cè)凝集有1 例為藥物影響，另外3 例球蛋白增高引起的鍲錢狀凝集；微柱凝膠法假陽性3 例均為異常白細胞增高引起，4 例主側(cè)凝集2 例由于自身抗體，2 例由于不規(guī)則抗體引起；6 例次側(cè)凝集5 例由于藥物影響了患者紅細胞引起直抗陽性，1 例由于獻血者血液不規(guī)則抗體陽性所致，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=11.071，P＜0.05）。 見表3。

表3 凝膠胺法和微柱凝膠法的配血不相合因素分析

2.4 兩種方法的檢測時間

凝聚胺法的平均檢測時間為（11.5±2.3）min，微柱凝膠法的平均檢測時間為（29.6±3.6）min，差異有統(tǒng)計學意義(t=9.271，P＜0.05)。

3 討論

凝聚胺法通過凝聚胺能改變紅細胞周圍電荷、縮短紅細胞間距的特點，引起紅細胞可逆性的非特異性聚集（即加入重懸液后，通過振搖而聚集散開）以及可能的IgM/ IgG 類抗體直接凝集紅細胞引起的聚集不能可逆，而被檢測出來[5]。凝聚胺法試劑具有較為穩(wěn)定的特點，凝聚胺法操作過程簡單，可重復性操作，整個操作過程無需增加其他額外設(shè)備，所以非常符合急診配血的時間要求。 微柱凝膠法將凝膠過濾技術(shù)（有效調(diào)節(jié)凝膠間隙[6]）與抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合,敏感、方便、易觀察，雖敏感性優(yōu)于凝聚胺法，但微柱凝膠法在操作過程中需借助TYQ 型免疫微柱孵育器和TD-3A型血型血清學離心機， 且配血時間較長， 一般需要20～30 min， 所以微柱凝膠法不適合與有時間要求的急診配血工作。 微柱凝膠法對標本用量要求較少，所以適應(yīng)于標本的批量配血操作，在減少人工成本的同時，減低了人工操作誤差發(fā)生率[7]。

凝聚胺法產(chǎn)生假陽性可能由于血小板出現(xiàn)聚集導致，所以需更換血清配血，且必須采用足夠的離心速度和時間來離心， 另外采集的標本存在抗凝不佳、纖維蛋白原增高等情況都是影響凝聚胺法產(chǎn)生假陽性的重要因素。微柱凝膠法產(chǎn)生標本假陽性可能是由于血漿比例與血球比例存在不適合情況，使紅細胞懸液濃度發(fā)生變化導致，紅細胞懸液最適合的濃度應(yīng)為1%[8]，同時，采血時存在抗凝情況不佳、白細胞計數(shù)過高及血液中存在高球蛋白或異常血清蛋白，也是引發(fā)微柱凝膠法出現(xiàn)假陽性的影響因素[9]。 該次研究中凝聚胺法1 例假陽性是由于標本抗凝不佳，操作者未注意觀察導致；微柱凝膠法3 例假陽性則由于是患者異常白血病細胞過高導致；主側(cè)凝集的主要因素排除血型鑒定錯誤外，主要有：自身抗體，冷凝集，不規(guī)則抗體，以及藥物的影響，其是對微柱凝膠法的影響更大；次側(cè)凝集的影響因素，排除血型錯誤外，主要影響因素是患者的用藥尤其是頭孢類藥物的應(yīng)用，冷凝集以及球蛋白增高引起的鍲錢狀凝集。 該次研究顯示，凝聚胺法主側(cè)凝集2 例均為自身抗體導致，而微柱凝膠法則還有2 例為不規(guī)則抗體引起；次側(cè)凝集中，凝聚胺的4 例陽性，有1 例為藥物影響，另外3 例鍲錢狀凝集，6 例微柱凝膠法次側(cè)凝集，5 例為藥物影響，1例為獻血者不規(guī)則抗體陽性。凝聚胺法與微柱凝膠法兩者存在各自的優(yōu)缺點。 使用微柱凝膠卡時，為防止運輸及揮發(fā)形成凝膠附于微柱，出現(xiàn)交叉污染而影響結(jié)果，應(yīng)先進行離心[10]。 應(yīng)用凝聚胺法時，需有效把握離心時間、掌握振搖方法，完成配血后，需放在顯微鏡下查看凝聚狀態(tài)，是否存在弱凝聚或假凝聚。 凝聚胺法與微柱凝膠法兩法聯(lián)合應(yīng)用能將不規(guī)則抗體檢測出來，防止可能的輸血反應(yīng)發(fā)生。 因為輸入不相容的血液，可能會發(fā)生溶血反應(yīng)，反應(yīng)導致紅細胞膜遭破壞，導致血紅蛋白滲出紅細胞。 雖然溶血反應(yīng)發(fā)生率較低，但一經(jīng)發(fā)生就嚴重威脅患者生命，所以一定要慎重。

該次研究顯示，從凝聚胺法與微柱凝膠法的交叉配血陽性結(jié)果看， 凝聚胺法檢測出7 例陽性樣本，主側(cè)凝聚、次側(cè)凝聚、假陽性分別為2 例、4 例、1 例，明顯低于微柱凝膠法，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 從兩組交叉配血方法的陽性檢出率看，凝聚胺法的總陽性檢出率為6.48%，明顯低于微柱凝膠法的12.04%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 從凝聚胺法與微柱凝膠法的交叉配血相合程度看，凝聚胺法交叉配血相合數(shù)為101 例，相合率為93.52%，明顯高于微柱凝膠法；凝聚胺法交叉配血不相合數(shù)為7 例， 不相合率為6.48%， 明顯低于為微柱凝膠法， 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 從檢測時間看，凝聚胺法的平均檢測時間明顯低于微柱凝膠法。 這與豐強[11]的研究結(jié)果“選取自2016 年3 月—2017 年3 月的輸血患者作為研究樣本， 分別采用凝聚胺法和微柱凝膠法進行交叉配血。 微柱凝膠法的陽性標本檢出率(90.00%)均高于凝聚胺法(50.00%),差異有統(tǒng)計學意義（t=64.34，P=0.00)凝聚胺法的標本陽性檢出率，低于微柱凝膠法”相一致。

綜上所述，凝聚胺法配血速度快，但檢出率低于微柱凝膠法，有漏檢可能，故該配血方法建議應(yīng)用于急診配血；微柱凝膠法配血時間較長，陽性檢出率較高，具有較高的敏感性，因此適應(yīng)于無時間要求的配血工作。