針康法通過緩解顱內(nèi)炎癥反應(yīng)對糖尿病腦卒中大鼠運動功能的改善作用研究

孫妲男 鄭劍 唐強

【摘要】 目的 探究針康法通過緩解顱內(nèi)炎癥反應(yīng)對糖尿病腦卒中大鼠運動功能的改善作用。

方法 60只大鼠， 隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、針康組、針刺組以及康復(fù)組， 各10只。采用高糖高脂飲食、鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射以及改良線栓法建立糖尿病腦卒中大鼠模型， 分別采用不同方式干預(yù)21 d后評價各組大鼠運動能力， 檢測各組大鼠腦組織中白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平， 并進行比較。結(jié)果 針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠平衡木行走試驗評分均較干預(yù)前顯著改善， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針康組大鼠干預(yù)后平衡木行走試驗評分（1.17±0.84）分

均顯著低于針刺組的（2.26±0.83）分及康復(fù)組的（2.39±0.66）分， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。干預(yù)后， 模型組、針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較空白組、假手術(shù)組大鼠顯著升高， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較模型組顯著下降， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針康組IL-6、TNF-α水平分別為（120.88±

55.67）pg/ml、（1.58±0.47）ng/ml， 均顯著低于針刺組的（273.64±52.64）pg/ml、（2.36±0.59）ng/ml及康復(fù)組的（251.75±70.31）pg/ml、（2.58±0.61）ng/ml， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 針康法能夠通過緩解糖尿病腦卒中大鼠顱內(nèi)炎癥反應(yīng)并改善大鼠運動功能。

【關(guān)鍵詞】 針康法;顱內(nèi)炎癥;糖尿病腦卒中大鼠;運動功能

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.34.102

臨床上糖尿病并發(fā)腦血管疾病已經(jīng)成為糖尿病患者的主要死因[1， 2]， 且糖尿病已被證實是腦梗死的重要獨立危險因素之一。糖尿病患者一旦并發(fā)腦卒中， 無論是出血性還是缺血性腦卒中， 其預(yù)后都較非糖尿病患者明顯下降。經(jīng)過我國中醫(yī)學(xué)者多年研究， 中醫(yī)針灸聯(lián)合現(xiàn)代康復(fù)醫(yī)學(xué)已經(jīng)能夠有效改善糖尿病合并腦卒中患者的預(yù)后[3]， 明顯提高生活質(zhì)量。本研究通過觀察針康法對糖尿病腦卒中大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平及運動功能的影響， 探究其通過緩解顱內(nèi)炎癥反應(yīng)對糖尿病腦卒中大鼠運動功能的改善作用， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 實驗動物 采用黑龍江中醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供的SPF級健康雄性SD大鼠（180～220 g）150只， 經(jīng)過7 d適應(yīng)性飼養(yǎng)后分為造模， 最終分為假手術(shù)組、模型組、針刺組、康復(fù)組、針康組， 每組10只。本研究經(jīng)學(xué)校倫理委員會通過。

1. 2 糖尿病腦卒中模型制備

1. 2. 1 糖尿病大鼠模型 大鼠高糖高脂飲食（20%蔗糖+

2.5%膽固醇+10%豬油+0.2%膽鹽+67.3%基礎(chǔ)飼料）喂養(yǎng)4周后一次性腹腔注射2%的STZ[4， 5]， 劑量為35 mg/kg。

1. 2. 2 糖尿病大鼠模型建立成功后建立糖尿病大鼠腦卒中模型 取0.26 mm粗細的魚線30 mm長作為栓線， 標記于18 mm處， 頭端燒圓。大鼠禁食6 h后用3.5%水合氯醛

（1 ml/100 g）行腹腔注射， 麻醉完全后行頸部正中切口， 分離出左側(cè)頸內(nèi)動脈、頸外動脈及頸總動脈， 將頸外動脈主干及頸總動脈近心端結(jié)扎， 置線于頸總動脈遠端， 夾閉左頸總動脈分叉處， 距分叉處以上0.4 mm行“V”字形切口， 插入至18 mm， 使線栓跨過大腦中動脈開口至大腦前動脈起始部， 結(jié)扎備線， 復(fù)位組織縫合切口。假手術(shù)組除栓線固定10 min但不阻斷血流外， 其余操作同前。

1. 2. 3 模型成功標準 STZ給藥7 d后隨機血糖>13.8 mmol/L

且體重>250 g為糖尿病大鼠建模成功， 腦卒中術(shù)后6 h行Bederson神經(jīng)功能評分[6]在1～3分大鼠提示造模成功。

1. 3 干預(yù)方法 針刺組：根據(jù)“大鼠學(xué)位譜圖”于成模第

2天予以頭穴叢刺。針灸針在百會穴及其兩側(cè)4 mm處向前平刺至頂前區(qū)， 深度0.5寸， 捻轉(zhuǎn)1 min后留針1 h， 捻轉(zhuǎn)速度為150次/min， 2次/d。康復(fù)組：成模第2天予以跑臺訓(xùn)練， 跑臺坡度為0， 1次/d， 20 min/次， 履帶速度依次遞增：前3 d

為5 m/min， 4～7 d為10 m/min， 14～21 d為15 m/min。針康組：同時予以針刺及跑臺訓(xùn)練。

1. 4 觀察指標及判定標準 比較各組干預(yù)前后平衡木行走試驗評分， 評分標準：1分：能夠保持身體平衡， 四肢均觸于木條表面;2分：只有一側(cè)爪子能夠握住木條或整個軀體在平衡木上搖晃;3分：出現(xiàn)一或兩個肢體滑下平衡木;4分：平衡功能差， 三個及以上肢體滑下木條;5分：努力在平衡木上保持平衡但跌落平衡木;6分：保持平衡失敗， 懸吊在平衡木上然后跌落;7分：直接從木條上跌落而無努力保持平衡的意向。取腦組織采用ELISA法測定IL-6及TNF-α水平。各組大鼠行為學(xué)測試結(jié)束后， 用10%水合氯醛

（300 mg/kg）腹腔注射麻醉， 麻醉完全后立即斷頭取腦， 取出的腦組織作冠狀切面， 自切面向頭側(cè)3 mm作另一切面取材， 腦組織立即研磨碎， 加入PBS后放入離心機中以3500 r/min

離心20 min， 取上清液后-20℃保存， 根據(jù)ELISA說明書測定各組大鼠腦組織IL-6及TNF-α水平。

1. 5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 各組大鼠平衡木行走試驗評分比較 空白組、假手術(shù)組及模型組大鼠干預(yù)前后平衡木行走試驗評分組內(nèi)比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;模型組大鼠干預(yù)前、后平衡木行走試驗評分與空白組、假手術(shù)組比較， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠平衡木行走試驗評分均較干預(yù)前顯著改善， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針康組大鼠干預(yù)后平衡木行走試驗評分均較針刺組及康復(fù)組顯著下降， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 各組大鼠干預(yù)后腦組織IL-6及TNF-α水平比較 模型組、針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較空白組、假手術(shù)組大鼠顯著升高， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;針刺組、康復(fù)組及針康組大鼠腦組織IL-6、TNF-α水平均較模型組顯著下降， 差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與針刺組、康復(fù)組相比， 針康組IL-6、TNF-α水平更低， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

腦組織缺血損傷主要表現(xiàn)為大腦生理屏障破壞， 炎癥因子激活及細胞外基質(zhì)損傷。炎癥反應(yīng)是在相關(guān)促炎因子的作用下不斷放大， 促進血液及組織間隙中各種炎癥細胞的聚集、粘附， 不斷加重腦組織損傷。糖尿病腦卒中大鼠模型的建立對于研究糖尿病并發(fā)腦血管意外意義重大， 本研究通過高糖高脂飲食、STZ腹腔注射以及線栓法成功建立該動物模型， 線栓法制備局灶性腦缺血模型有眾多優(yōu)點， 首先經(jīng)濟、實用， 其次能夠精確控制缺血及再灌注時間， 缺血效果可靠， 模型穩(wěn)定性以及重復(fù)性好等， 目前逐漸成為90年代以來國內(nèi)外廣泛使用的方法[6-8]。栓塞大腦中動脈與臨床糖尿病并發(fā)腦卒中患者的病理生理過程相似， 故建立的模型與臨床工作聯(lián)系緊密， 具有重要的研究價值。

眾多研究證實， 針刺療法對于改善腦卒中引起的肢體偏癱及促進肢體神經(jīng)功能恢復(fù)有顯著效果， 于致順教授創(chuàng)造的頭穴叢刺法結(jié)合了豐富臨床經(jīng)驗和科學(xué)研究， 提出“頭部透穴治療腦血管疾病后癱瘓”的論點， 認為針刺頭部穴位能夠產(chǎn)生一種“針場”， 隨著經(jīng)絡(luò)傳送至大腦皮質(zhì)特定區(qū)域并刺激該部位， 改善神經(jīng)細胞興奮性， 促進神經(jīng)功能恢復(fù)。

本研究結(jié)果提示， 針康法可以顯著改善糖尿病腦卒中大鼠運動功能， 針康組大鼠干預(yù)后平衡木行走試驗評分顯著低于針刺組及康復(fù)組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。本研究采用的跑臺訓(xùn)練是目前國際通行的卒中后恢復(fù)運動， 可以精確調(diào)控運動強度， 有利于量化康復(fù)訓(xùn)練， 其能通過重新建立部分腦的“連接”進而改善腦卒中患者的行走能力， 跑臺訓(xùn)練能顯著降低大鼠腦缺血后的損傷， 可能與訓(xùn)練后腦損傷區(qū)血管的生成及血管生成因子的表達增加有關(guān)?，F(xiàn)代康復(fù)學(xué)認為， 腦卒中后早期康復(fù)應(yīng)當待患者生命體征平穩(wěn)且無明顯神經(jīng)功能損傷癥狀24 h后進行[9]。進入運動康復(fù)治療階段， 通過有機結(jié)合頭穴針刺與康復(fù)訓(xùn)練促進神經(jīng)功能恢復(fù)。顱內(nèi)炎癥反應(yīng)的輕重往往與運動功能恢復(fù)密切相關(guān)[10]。本研究結(jié)果顯示， 針康法可以有效減輕糖尿病腦卒中大鼠顱內(nèi)炎癥因子數(shù)量， 炎癥反應(yīng)是一種生理性保護機制， 過度激活的炎癥反應(yīng)會導(dǎo)致組織損傷， 炎癥反應(yīng)參與了腦卒中的生理過程[11]， 對腦組織的損傷可能比腦卒中本身更嚴重， 缺血灶的炎癥細胞會促進炎癥因子及抗炎細胞因子表達上調(diào)[12]， 損傷神經(jīng)細胞。

綜上所述， 針康法能夠緩解糖尿病腦卒中大鼠顱內(nèi)炎癥反應(yīng)并改善大鼠運動功能。

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[收稿日期：2019-07-16]