新疆某規(guī)模化豬場(chǎng)母豬偽狂犬病的凈化效果評(píng)價(jià)

劉俊飛 劉英玉 劉宏杰

（1 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院， 新疆烏魯木齊 830052； 2 昌吉天康畜牧科技有限公司， 新疆昌吉 831100）

豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起豬的以繁殖障礙和呼吸道疾病為主要特征的傳染性疾病。PRV 是皰疹病毒Ⅰ型，其顯著特征是形成持續(xù)潛伏感染，可伴隨宿主一生。PRV 主要潛伏在三叉神經(jīng)節(jié)、骶神經(jīng)節(jié)和扁桃體，潛伏期的PRV 具有潛在的活化和排出感染性病毒的危險(xiǎn)，因此潛在帶毒動(dòng)物是疾病控制的主要威脅。豬是PRV 的唯一自然宿主，但病毒也可以自然感染牛、羊、貓、犬和老鼠，并可以引起致命性疾病，只有豬在感染PRV 后能夠存活[1]。盡管不同區(qū)域、不同毒株的PRV 毒力不同，但均可引起仔豬死亡、懷孕母豬流產(chǎn)、育肥豬的呼吸道癥狀，給養(yǎng)豬戶帶來(lái)慘重?fù)p失[1]。PRV 只有一個(gè)血清型，市場(chǎng)上的疫苗無(wú)論是國(guó)外的Bartha 株還是國(guó)內(nèi)的地方毒株對(duì)變異的流行毒株仍然具有免疫保護(hù)力。目前的問(wèn)題是隨著毒株變異后毒力增強(qiáng)、侵襲力變強(qiáng)，在豬場(chǎng)出現(xiàn)免疫空白或免疫薄弱環(huán)節(jié)時(shí)，豬群更容易被感染，因此，完整的免疫顯得尤為重要[2]。

凈化是徹底控制豬場(chǎng)偽狂犬病的唯一出路，國(guó)務(wù)院出臺(tái)的《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》，將豬偽狂犬病列入國(guó)家需中長(zhǎng)期防控的動(dòng)物疫病。由于PRV-gE 基因缺失疫苗的推廣使用，使得應(yīng)用與之配套的商品化鑒別ELISA 診斷試劑盒區(qū)分疫苗免疫和野毒感染成為了可能，也給PRV 的控制和凈化提供了有效的檢測(cè)手段。研究中的試驗(yàn)豬場(chǎng)是新疆某規(guī)?；唐坟i場(chǎng)，在實(shí)施凈化方案前經(jīng)檢測(cè)是豬偽狂犬病野毒感染陽(yáng)性豬場(chǎng)，而引進(jìn)種豬的豬場(chǎng)是豬偽狂犬病野毒感染陰性豬場(chǎng)，且生產(chǎn)數(shù)據(jù)全面優(yōu)于試驗(yàn)豬場(chǎng)。因此，實(shí)行借鑒國(guó)內(nèi)PRV 凈化的成功案例并結(jié)合該豬場(chǎng)的實(shí)際情況，在該試驗(yàn)豬場(chǎng)制定切實(shí)可行的偽狂犬凈化方案，即引進(jìn)無(wú)偽狂犬病感染的陰性后備種豬快速替換本場(chǎng)原有母豬，利用本場(chǎng)實(shí)際情況實(shí)現(xiàn)豬群之間的隔離，結(jié)合免疫、檢測(cè)、淘汰等手段實(shí)現(xiàn)母豬豬偽狂犬病gE 抗體檢測(cè)陰性，計(jì)劃在3 年內(nèi)初步實(shí)現(xiàn)全場(chǎng)母豬的PRV 凈化目標(biāo)。

1 材料和儀器

IDEXX PRV-gE 抗體檢測(cè)試劑盒，IDEXX PRV-gB抗體檢測(cè)試劑盒，美國(guó)Thermo MK3 酶標(biāo)儀，深圳雷杜RT-3000 洗板機(jī)，德國(guó)Eppendorf 微量移液器。

2 方法

采樣方法：對(duì)豬采用前腔靜脈采血，室溫靜置后將自然析出的血清，收集于離心管中，冷藏保存，當(dāng)日送檢。

采樣要求：依據(jù)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心《規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)動(dòng)物疫病凈化示范場(chǎng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)（試行）》（2015 版），制定了試驗(yàn)豬場(chǎng)PRV 免疫凈化評(píng)估方法。如表1，基礎(chǔ)群和已經(jīng)配種的后備豬每季度按照采樣要求抽檢1 次，后備豬培育階段按照引進(jìn)批次每月抽檢1次，配種前逐頭檢測(cè)。

表1 PRV 免疫凈化評(píng)估實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案

gE 和gB 抗體檢測(cè)方法：按照IDEXX PRV-gE、PRV-gB 試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作，并采用Herdchek 軟件進(jìn)行結(jié)果判定。判斷標(biāo)準(zhǔn)：①如果S/N 值低于或等于0.60 時(shí)，樣品應(yīng)判定為PRV gpI 抗體陽(yáng)性。②如果S/N值大于0.60 但小于或等于0.70，樣品應(yīng)重測(cè)，如果結(jié)果不變，間隔一定時(shí)間后重新采樣、檢測(cè)。③如果S/N值大于0.70，樣品應(yīng)判定為PRV gpI 抗體陰性。

3 結(jié)果與分析

3.1 方案實(shí)施前豬群評(píng)估結(jié)果

實(shí)施方案前按照采樣要求采集后備母豬血清60 份、基礎(chǔ)母豬血清80 份、公豬血清16 份進(jìn)行PRV 野毒gE抗體和gB 抗體檢測(cè)，了解豬場(chǎng)豬偽狂犬病野毒（gE）感染背景和豬群gB 抗體情況。

gE 陽(yáng)性率在10%以下，為輕度感染，采取直接淘汰措施；陽(yáng)性率在10%以上，采取引種、隔離、調(diào)整免疫、淘汰等分段措施[3-5]。該試驗(yàn)豬場(chǎng)的gE 抗體陽(yáng)性率均在35%以上，如表2 所示，處于重度感染，因此，采取引種、隔離、調(diào)整免疫、淘汰等措施來(lái)實(shí)施凈化過(guò)程。

表2 豬群野毒（gE） 感染背景

豬群gB 抗體合格率大于90%以上視為合格，低于90%則應(yīng)加強(qiáng)免疫[6]。從表2 可看出試驗(yàn)豬場(chǎng)后備豬的gB 抗體監(jiān)測(cè)不合格，應(yīng)加強(qiáng)后備豬群的免疫。結(jié)合gE和gB 抗體數(shù)據(jù)可知，該豬場(chǎng)的公豬和基礎(chǔ)母豬存在野毒感染，gB 抗體陽(yáng)性率雖高但應(yīng)該是野毒感染和疫苗株共同作用所致，而后備豬群gB 抗體較差，且存在較高的gE 陽(yáng)性，提示豬群感染PRV 時(shí)間不長(zhǎng)，豬場(chǎng)內(nèi)存在野毒感染種豬排毒現(xiàn)象，應(yīng)加強(qiáng)所有豬群的免疫[7,8]。

3.2 引種

引種前對(duì)即將引入的后備種豬進(jìn)行抽檢，抽檢比例為后備母豬的20%，公豬逐頭檢測(cè)gE 抗體。為了減少引種次數(shù)過(guò)多可能造成的潛在危害，每4 個(gè)月引種1次，每次800 頭，1 年引種2 400 頭，后備豬利用率按92%計(jì)算，每年補(bǔ)入基礎(chǔ)群2 200 頭，試驗(yàn)場(chǎng)基礎(chǔ)母豬3 800 頭，年更新率58%。豬場(chǎng)在母豬偽狂犬病凈化方案執(zhí)行過(guò)程中共引入9 批種豬，全部為gE 抗體陰性。

3.3 調(diào)整免疫程序

根據(jù)豬群野毒（gE）感染情況和豬群gB 抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果（表2），需調(diào)整原有免疫程序。參考國(guó)內(nèi)成功凈化偽狂犬病的案例，主要是在原有弱毒苗免疫的基礎(chǔ)上增加滅活苗免疫[9]，具體改變?nèi)绫?，基礎(chǔ)母豬和公豬減少1 次弱毒苗免疫，增加滅活苗免疫，后備豬的2 次免疫中都加入滅活苗的免疫。免疫程序調(diào)整在方案開(kāi)始的第1 個(gè)月（2016 年4 月）開(kāi)始執(zhí)行。

3.3.1 免疫程序調(diào)整后豬群gB 抗體陽(yáng)性率和保護(hù)率的持續(xù)監(jiān)測(cè)

在gB 抗體陽(yáng)性率（S/N＜0.6）、保護(hù)率（S/N＜0.2）中，保護(hù)率更能說(shuō)明豬群對(duì)PRV 野毒的抵抗力。進(jìn)入妊娠期的后備母豬和基礎(chǔ)母豬群，每個(gè)季度全群抽檢血液，進(jìn)行豬偽狂犬病gB 抗體的檢測(cè)，豬群gB 抗體持續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果如圖1 所示，凈化方案實(shí)施3 個(gè)月后全群的gB 抗體陽(yáng)性率和保護(hù)率均達(dá)到90%以上，9 個(gè)月后陽(yáng)性率一直維持在100%，而24 個(gè)月以后全群的gB 抗體陽(yáng)性率和保護(hù)率一直維持在100%。gB 抗體有可能是疫苗免疫和野毒感染的綜合作用[10]，因此，本文先對(duì)gB抗體的持續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果做一展示，后續(xù)結(jié)合gE 抗體的變化綜合討論。

圖1 免疫程序調(diào)整后gB 抗體持續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果

3.3.2 免疫程序調(diào)整后豬群gB 抗體平均值和離散度的持續(xù)監(jiān)測(cè)

gB 抗體的值越低，對(duì)豬只的保護(hù)力越強(qiáng)，平均值越低，對(duì)群體保護(hù)力越強(qiáng)；離散度的值越小，說(shuō)明抗體整齊度越好[11]。gB 抗體離散度和平均值持續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2，抗體平均值在調(diào)整免疫程序后的第3 個(gè)月就已經(jīng)下降到0.06，后續(xù)一直維持較低的平均值，但離散度到第15 個(gè)月才下降到較低水平，24 個(gè)月后達(dá)到理想水平，且穩(wěn)定維持。整體呈下降且逐步穩(wěn)定趨勢(shì)，表明抗體保護(hù)力較好。

表3 免疫程序的調(diào)整

圖2 免疫程序調(diào)整后gB 抗體離散度和平均值走勢(shì)圖

3.4 調(diào)整免疫基礎(chǔ)上的隔離效果

試驗(yàn)豬場(chǎng)分2 條繁育生產(chǎn)線，生產(chǎn)一區(qū)和生產(chǎn)二區(qū)，有專門的育成區(qū)和保育區(qū)。4 個(gè)區(qū)之間直線距離150 m 以上，每個(gè)區(qū)各圈舍之間相距15 m 以上，可以按照豬群類別做到分區(qū)和分圈的相對(duì)隔離。

3.4.1 引入的后備種豬在執(zhí)行新免疫程序并實(shí)行分區(qū)隔離后各批次gE 抗體陽(yáng)性檢出率

育成區(qū)改成后備區(qū)，徹底消毒后引入豬偽狂犬病毒陰性后備種豬，后備母豬在育種、配種、妊娠階段都在后備區(qū)，不與生產(chǎn)一區(qū)和二區(qū)的基礎(chǔ)群接觸，做到分區(qū)隔離。

后備豬在育種階段采取每個(gè)月抽檢、配種前逐頭檢測(cè)、檢出陽(yáng)性即淘汰的方案。引入的后備母豬都為豬偽狂犬病毒陰性個(gè)體，養(yǎng)殖過(guò)程中不接觸豬偽狂犬野毒，陽(yáng)性檢出率應(yīng)為0。但如圖3 顯示在前4 個(gè)批次的檢測(cè)中都有陽(yáng)性檢出，原因可能是第1 次消毒不徹底，或是生產(chǎn)過(guò)程中人為帶入病毒，環(huán)境中有野毒存在，導(dǎo)致感染。但檢出率逐漸降低并且后面的批次再無(wú)檢出，表明分區(qū)隔離的執(zhí)行過(guò)程逐漸得到完善，減少了人為帶入野毒的概率；此外，在加強(qiáng)免疫后，基礎(chǔ)群中的野毒感染豬排毒得到控制，母豬排毒數(shù)量減少，環(huán)境中野毒數(shù)量降低，減少了帶入的風(fēng)險(xiǎn)。初步證明“調(diào)整免疫+分區(qū)隔離”有效。

圖3 各批次后備豬引入后gE 抗體陽(yáng)性檢出率

3.4.2 后備種豬進(jìn)入繁育生產(chǎn)線與原有基礎(chǔ)母豬采取分圈隔離后豬群gE 抗體持續(xù)監(jiān)測(cè)

偽狂犬病毒陰性后備豬在后備區(qū)經(jīng)過(guò)育種、配種、妊娠后，從分娩開(kāi)始需要轉(zhuǎn)移到基礎(chǔ)母豬所在生產(chǎn)線，這時(shí)要做到與生產(chǎn)線原有的母豬不混群，即分圈隔離。這部分豬進(jìn)入生產(chǎn)線后，從分娩—斷奶—再配種—再分娩始終堅(jiān)持不與原有豬群混群。

本方案中采取集中替換生產(chǎn)一區(qū)的基礎(chǔ)母豬，即后備母豬分娩、斷奶、再配種等生產(chǎn)過(guò)程都在生產(chǎn)一區(qū)，其中，高胎齡的母豬會(huì)淘汰或轉(zhuǎn)入生產(chǎn)二區(qū)，單向流通。生產(chǎn)一區(qū)的母豬全部替換完畢后，逐步將已替換過(guò)的較高胎齡母豬轉(zhuǎn)入生產(chǎn)二區(qū)，后備豬補(bǔ)充還在生產(chǎn)一區(qū)進(jìn)行。

試驗(yàn)豬場(chǎng)豬群每季度的野毒感染持續(xù)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4，由于是分區(qū)管理，各區(qū)之間凈化進(jìn)度不一樣，因此3個(gè)區(qū)分開(kāi)檢測(cè)。監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，3 個(gè)區(qū)偽狂犬病毒gE 抗體陽(yáng)性率整體都呈持續(xù)下降趨勢(shì)。后備區(qū)妊娠母豬最初檢測(cè)出陽(yáng)性應(yīng)該和養(yǎng)殖過(guò)程（圖3）前4 個(gè)批次檢出陽(yáng)性原因相同，第12 個(gè)月以后gE 抗體陽(yáng)性率一直維持在0，符合預(yù)期目標(biāo)。一區(qū)gE 抗體陽(yáng)性率在第11 個(gè)月已降至10%以下，二區(qū)gE 抗體陽(yáng)性率在第26 個(gè)月降至10%以下。按照引種的年更新率為58%，12 個(gè)月生產(chǎn)一區(qū)替換完畢，24 個(gè)月生產(chǎn)二區(qū)的豬群替換完畢。結(jié)合圖1 和圖2 結(jié)果，第12 個(gè)月和第24 個(gè)月的2 個(gè)節(jié)點(diǎn)處，監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)較前期都有較明顯的改觀，證明此次凈化達(dá)到了預(yù)期的目標(biāo)。而從圖1、圖2、圖3 的綜合分析中，在gB 抗體陽(yáng)性率和保護(hù)率升高并維持穩(wěn)定以及離散度和平均值不斷降低并維持穩(wěn)定的同時(shí)，gE 抗體陽(yáng)性率是不斷下降的，因此，圖1 和圖2 的結(jié)果顯示可以排除野毒感染導(dǎo)致，而是免疫的效果。綜合圖1 至圖4 證明該試驗(yàn)豬場(chǎng)采取的“引種+調(diào)整免疫+隔離”的凈化方法是有效的。

圖4 豬群的gE 抗體陽(yáng)性率持續(xù)監(jiān)測(cè)結(jié)果

表4 2016—2018 年豬場(chǎng)的各項(xiàng)生產(chǎn)數(shù)據(jù)

3.5 淘汰

如圖4 顯示，該豬場(chǎng)第27 個(gè)月和30 個(gè)月的季度監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，gE 抗體陽(yáng)性率都維持在10%以下，因此，在第31 個(gè)月進(jìn)行了全群檢測(cè)，共檢出并淘汰PRV 感染陽(yáng)性母豬126 頭，后續(xù)的2 個(gè)季度監(jiān)測(cè)結(jié)果如圖4 顯示，全群PRV 野毒感染持續(xù)維持陰性。初步證明本次制定的凈化方案整體有效。

3.6 凈化效果

該試驗(yàn)豬場(chǎng)在豬偽狂犬病的凈化實(shí)施過(guò)程中不僅增加了基礎(chǔ)母豬的存欄，而且各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo)都有所提升，如表4，從2016 年至2018 年豬場(chǎng)配產(chǎn)率和55 日齡正品率（55 日齡時(shí)可用于做后備豬的仔豬數(shù)占斷奶活仔豬數(shù)的百分比）都有了穩(wěn)步提升，分別提高到90.23%和92.53%，通過(guò)凈化程序的實(shí)施，2018 年母豬的產(chǎn)活仔數(shù)比2016 年增加了46 443 頭，2018 年出欄仔豬比2016 年增加了47 481 頭。

4 結(jié)論

該試驗(yàn)豬場(chǎng)利用3 年時(shí)間，通過(guò)“引種+隔離+免疫+監(jiān)測(cè)+淘汰”的方案，初步實(shí)現(xiàn)了豬場(chǎng)內(nèi)基礎(chǔ)母豬PRV 的凈化。凈化過(guò)程中引入PRV 陰性的后備母豬并實(shí)現(xiàn)快速換種是凈化的前提條件。免疫是凈化過(guò)程的基礎(chǔ)，控制和減少已經(jīng)被感染的豬繼續(xù)排毒，減少環(huán)境中的野毒數(shù)量，提高豬體自身對(duì)病毒的抵抗力，從而降低陰性豬被感染的概率。隔離是整個(gè)凈化過(guò)程的關(guān)鍵，如何讓陰性和陽(yáng)性豬群能夠在生產(chǎn)過(guò)程中實(shí)現(xiàn)不直接接觸，生產(chǎn)環(huán)節(jié)不交叉感染，是獸醫(yī)和生產(chǎn)管理者必須提前計(jì)劃和現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督的工作。持續(xù)的監(jiān)測(cè)是凈化的輔助手段，用客觀的檢測(cè)數(shù)據(jù)論證工作是否有效，過(guò)程是否需要改善。淘汰是凈化的一個(gè)暫時(shí)收尾，淘汰完以后還需持續(xù)監(jiān)測(cè)。