原子吸收分光光度法測定鎮(zhèn)癇片中鈣含量

盧小蘭，王 健，黃富宏

（揚州大學附屬醫(yī)院，江蘇 揚州 225009）

鎮(zhèn)癇片由人工牛黃、朱砂、珍珠母等13味藥材組方，有鎮(zhèn)心安神、豁痰通竅功效，用于治療癲狂心亂、痰迷心竅、神志昏迷、四肢抽搐、口角流涎等癥。目前，該藥質量標準［1］中無珍珠母的測定，也未見鎮(zhèn)癇片鈣含量檢測方法的報道，只有用高效液相色譜（HPLC）法測定鎮(zhèn)癇片中膽紅素的報道［2-3］。珍珠母主要成分為CaCO3（含量 ＞ 88% ）［4］，但 CaCO3在水中的溶解度很小。研究顯示，珍珠母煎煮后其煎出率最高約0.1%［5］。本品制法中珍珠母為水煎煮4 h，其他可能含有鈣元素的人工牛黃、朱砂等藥材為全粉入藥。本研究中通過原子吸收光譜法測定鈣含量來評估樣品原藥材質量控制和工藝的穩(wěn)定性［6］?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

PE AA800型原子吸收分光光度計（美國鉑金埃爾默公司，含火焰原子化器，精度 0.01 μg/mL）；MV3000型微波消解儀（奧地利安東帕有限公司）；BHW-09A型恒溫消解儀（上海博通有限公司）；Milli-Q型去離子水機（美國密理博有限公司）；MS204S型電子分析天平（美國梅特勒-托利多集團）。

1.2 試藥

鈣元素標準溶液（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，質量濃度 1 000 μg/mL，定值時間 20180709）；硝酸（北京化學試劑研究所，BV-Ⅲ級，批號為20170902）；水為去離子水（自制）；氧化鑭（國藥試劑有限公司，高純試劑4N，批號為20160918）；鎮(zhèn)癇片（長春銀諾克藥業(yè)有限公司，國藥準字Z20063511，批號分別為 20180201，20171002，20170902，規(guī)格為每片 0.4 g）。

2 方法與結果

2.1 儀器工作條件

微波消解儀消解程序見表1［7-10］。升壓速率為 0.3bar/s，溫度上限為180℃，壓力上限為40 bar?；鹧嬖游辗止夤舛扔媰x器參數［11-12］：燈電流為 10 mA，狹縫為0.7 nm，燃氣流量為1.0 L/min。

表1 微波消解程序

2.2 溶液制備

取鈣標準溶液逐步稀釋，配制含鈣質量濃度分別為0，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0 μg/mL 的系列標準溶液。取樣品10片，研細，取藥粉約0.2 g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐中，置電熱板上；加硝酸5 mL，110℃預消解至無棕紅色氣體產生，放冷至室溫；將預處理好的樣品裝入陶瓷套管中，置微波消解儀消解；消解完的樣品置恒溫消解儀，在125℃下趕酸至約1 mL，轉移至50 mL塑料離心管中，用去離子水定容至50 mL，搖勻；取5 mL置50 mL離心管中，加鑭溶液2.5 mL［13］，用去離子水定容，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：按2.1項下儀器參數測定，測定各質量濃度溶液的吸光度，以吸光度（Y）對質量濃度（X，μg/mL）進行線性回歸，得回歸方程Y=0.04044X-0.000 51，r=0.999 9（n=6）。結果表明，鈣質量濃度的線性范圍為 0～6 μg/mL。

檢測限與定量限考察：按供試品溶液制備方法平行制備7份溶液，再按2.1項下儀器參數進行測定，記錄儀器響應值，并計算SD值，以3倍和10倍SD值對應的質量濃度分別作為檢測限和定量限。結果儀器檢測限為 0.041 μg/mL，定量限為 0.138 μg/mL［14］。

精密度試驗：取樣品（批號為20180201）粉末1份，依法制備供試品溶液，按2.1項下儀器參數進行測定，連續(xù)進樣 6次，測定儀器響應值。結果的RSD為0.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取樣品（批號為20180201）粉末6份，依法制備供試品溶液，按2.1項下儀器參數進行測定，記錄儀器響應值并計算含量。結果樣品中含鈣平均值為5.55mg/g，RSD為0.9%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20180201）粉末6份，各0.1 g，精密稱定，分別精密加入鈣標準溶液0.5 mL，依法制備溶液并測定，記錄儀器響應值并計算加樣回收率［15］。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取不同批次的樣品各2份，依法制備供試品溶液，按2.1項下儀器參數進行測定，記錄儀器響應值并計算樣品含量。結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n=3）

3 討論

長期使用抗癲癇藥物后，58%的患者骨密度異常，其中大部分為骨質缺鈣［16］。因此，測定樣品鈣含量，有助于研究本品鈣含量與療效的關系。本研究結果顯示，所用方法可準確測定鎮(zhèn)癇片樣品中鈣元素的含量。但要注意，鎮(zhèn)癇片中含有朱砂，導致樣品中汞含量較高，測定時要注意汞對環(huán)境的污染。尤其是消解罐在試驗后要進行隔離處理，避免污染其他汞測定試驗。

鎮(zhèn)癇片中含珍珠母原藥材為每片640 mg，按0.1%煎出率計算，鈣含量最高為每片0.64 mg，本品規(guī)格為每片0.4 g，鈣含量應為1.6 mg/g?，F測得量遠高于1.6 mg/g，說明處方中人工牛黃及朱砂等藥材中也含有鈣，但由于未見人工牛黃及朱砂等藥材中鈣含量的文獻報道，無法確定成品中鈣含量是否與研究數據吻合，將進一步研究。如果能研究得出本方中其他藥材含鈣最高量，可將總量與本研究測得量進行比較，若測得量遠遠超過處方藥材中含鈣最高量，就可質疑存在生產中用碳酸鈣原料替代珍珠母為原料投入的違法行為。

綜上所述，若本研究所用樣品完全合格，則研究所得數據就為可靠數據?；谠摌悠封}含量數據，說明珍珠母在該方中微量元素的作用可能更重要，因此進一步研究該方中其他微量元素的含量，將有助于推斷微量元素在治療癲癇中的作用。