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    T細胞亞群和TSP-1、β2-GP1-Ab檢測在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的診斷價值

    2019-12-26 09:30:20高振莊郭亞平王雅寧楊桂云
    國際檢驗醫(yī)學雜志 2019年24期
    關鍵詞:亞群受試者細胞因子

    高振莊,梁 妍,李 佧,郭亞平,王雅寧,楊桂云

    (保定市第一中心醫(yī)院東院:1.檢驗科;2.產科,河北保定 071000;3.保定市中心血站,河北保定 071000;4.保定市第一中心醫(yī)院西院檢驗科,河北保定 071000;5.保定市第一中心醫(yī)院體檢科,河北保定 071000)

    系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種可累及機體多臟器損害的自身免疫性疾病,其中70%~90%為女性患者[1]。SLE發(fā)病機制十分復雜,但目前確切機制尚未完全闡明。研究報道,SLE的發(fā)生可能與環(huán)境、遺傳等因素有關,尤其是T細胞亞群失衡及細胞因子分泌紊亂最終導致的免疫系統(tǒng)異常應答在SLE的發(fā)病及病情遷延中起著重要作用[2]。T細胞亞群包含了Th1、Th2、Th17及調節(jié)性T細胞(Treg),各種細胞分泌的細胞因子及在體內免疫方面發(fā)揮著不同作用。最初,人們認為Th1/Th2失衡與SLE患者的發(fā)病有關,但研究發(fā)現,抗心磷脂抗體異常、動靜脈血栓、內分泌異常等均是SLE發(fā)病的危險因素[3-4]。本研究通過觀察SLE患者T細胞亞群及血小板反應蛋白1(TSP-1)、β2糖蛋白1抗體(β2-GP1-Ab)變化情況,并分析其在SLE中診斷應用價值。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 選擇2016年8月至2018年8月保定市第一中心醫(yī)院收治的抗磷脂抗體陽性SLE患者65例進行研究(SLE組),所有患者均符合1997年美國風濕病學會(ACR)制定的分類標準[5],其中男27例,女38例,年齡(42.36±10.69)歲,平均病程(28.65±12.57)月,根據《系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷及治療指南》[6]以SLEDAI積分評估疾病活動性:輕度21例,中度33例,重度14例。同期選取本院體檢健康者35例作為對照組,其中男4例,女31例,年齡(42.19±9.67)歲。本研究得到所有受試者知情同意,并得到本院倫理委員會核準。兩組受試者的基本資料比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    1.2納入標準與排除標準 納入標準:(1)符合上述診斷和分類標準者;(2)年齡>18歲者;(3)臨床資料完整者;(4)經腎臟病理學檢查證實。排除標準:(1)近期使用過可能影響本研究結果的藥物者;(2)伴有原發(fā)性心血管疾病、糖尿病及其他腎損害者;(3)具有家族免疫性疾病史者;(4)正在參與其他研究者。

    1.3儀器與試劑 FACSCalibur型流式細胞儀(美國Sigma公司生產),Microfuge 20型離心機(貝克曼庫爾特生產),酶聯免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒(武漢默沙克生物科技有限公司)。

    1.4方法 SLE組患者于入院治療前清晨靜脈空腹采血5 mL,對照組于體檢當天采集血液標本5 mL。采用美國貝克曼ALLEGRAX-12醫(yī)用離心機3 000 r/min離心15 min后,分離血清,置于-60 ℃冰箱保存待測。采用美國BD醫(yī)療器械有限公司FACSCalibur型流式細胞儀進行Th1、Th2、Th17及Treg檢測,酶聯免疫吸附測定(ELISA)進行TSP-1、β2-GP1-Ab檢測。所有指標均檢測3次取平均值。操作流程由專業(yè)檢驗人員嚴格按照儀器及試劑盒說明書進行操作。

    1.5觀察指標 記錄并觀察兩組受試者的Th1、Th2、Th17、Treg、TSP-1、β2-GP1-Ab水平變化情況,分析其與SLEDAI評分的關系,對模型中有價值指標進行受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析評估其在SLE中的診斷價值。

    1.6統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0進行數據處理,T細胞亞群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平各指標等計量資料用 表示,進行t檢驗,Pearson相關性分析,計數資料進行χ2檢驗,有價值指標進行ROC曲線分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結 果

    2.1兩組受試者的T細胞亞群檢測結果比較 與對照組比較,SLE組的Treg水平明顯降低,而Th2、Th17水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

    表1 兩組受試者的T細胞亞群檢測結果比較

    2.2兩組受試者的TSP-1、β2-GP1-Ab水平比較 與對照組比較,SLE組患者的TSP-1水平明顯升高,β2-GP1-Ab水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

    表2 兩組受試者的TSP-1、β2-GP1-Ab水平比較

    2.3T細胞亞群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平與SLEDAI評分的相關性 相關性分析顯示,Th2、Th17、TSP-1與SLEDAI評分呈正相關(r=0.552、0.318、0.364,P=0.000、0.014、0.001),β2-GP1-Ab、Treg與SLEDAI評分呈負相關(r=-0.552、-0.353,P=0.000、0.003)。

    2.4T細胞亞群和TSP-1、β2-GP1-Ab檢測診斷SLE的效能分析 將T細胞亞群和TSP-1、β2-GP1-Ab水平與SLEDAI評分存在相關性的指標應用ROC分析其診斷效能。因變量為二分類變量,對照組標記為0,SLE組標記為1。自變量為血清Th17、Th2、Treg及TSP-1、β2-GP1-Ab水平,ROC曲線分析顯示,TSP-1、β2-GP1-Ab檢測的ACU下面積均明顯大于Th17、Th2及Treg單獨檢測(ZTSP-1=2.637、3.964、2.871,P=0.008、0.001、0.004;Zβ2-GP1-Ab=2.412、3.964、2.802,P=0.016、0.000、0.005),TSP-1、β2-GP1-Ab檢測的靈敏度、特異度均優(yōu)于單獨檢測(P<0.05),見圖1和表3。

    注:1為Th7;2為Th2;3為Treg;4為TSP-1;5為β2-GP1-Ab

    圖1血清各指標診斷SLE的ROC曲線

    表3 T細胞亞群指標和TSP-1、β2-GP1-Ab診斷SLE的價值

    3 討 論

    SLE是一種自身免疫介導的,以免疫性炎癥為主要表現累及多臟器、多系統(tǒng)的彌漫性結締組織疾病[7]。其病情遷延難愈,病死率較高,確切病因至今尚未闡明。多數學者認為,SLE的發(fā)病機制中,Th細胞亞群比例失衡是重要環(huán)節(jié)之一,“Th2優(yōu)勢”說、“Th1優(yōu)勢”說等多種免疫紊亂狀態(tài)均被證實[8]。Th2優(yōu)勢學說表明SLE患者存在Th2功能亢進,即Th1相關細胞因子IL-12、IFN-y等主導細胞免疫的細胞因子分泌降低;即Th2相關細胞因子IL-4、IL-10等促抗體生成參與體液免疫的細胞因子分泌增加,促進B細胞增殖、成熟及活化,導致產生多種自身抗體,進一步引起組織損傷。此外,抗磷脂綜合征、免疫應答異常也與SLE的發(fā)生發(fā)展關系密切[9]。

    細胞因子既是免疫系統(tǒng)功能執(zhí)行介質,又是其他系統(tǒng)如內分泌、神經系統(tǒng)等聯系的重要橋梁。但有研究表明,在SLE活動期患者的“Th2優(yōu)勢”說、“Th1優(yōu)勢”說中細胞因子異常分泌的表現并不一致[10]。本研究發(fā)現,與對照組比較,SLE組的Th2水平明顯升高,這提示本研究SLE患者是偏向Th2失衡型,與GERGIANAKI 等[11]和陳海蓮等[12]研究報道的狼瘡腎炎患者的CD4+T細胞絕大多數表達Th2型相關趨化因子CCR4受體,而很少表達Th1型CCR5受體基本一致。Treg和Th17是調節(jié)性T細胞新近發(fā)現的兩個成員,研究證實在Th1/Th2失衡的基礎上,Treg/Th17失衡也在SLE疾病的發(fā)生、進展中發(fā)揮著重要作用[13]。Treg是具有免疫抑制作用CD4+T細胞,通過分泌IL-4、IL-10等細胞因子在介導炎癥、防御感染和免疫應答調控等過程中發(fā)揮作用[14]。本研究中,與對照組比較,SLE組的Treg水平明顯降低,而Th17水平明顯升高。TSP-1是血小板的重要組成部分,是一種多功能細胞外基質蛋白,最初從血小板細胞膜中分離得到,在新血管生成、細胞凋亡中均有重要作用,且參與機體免疫應答反應關系密切[15]。血管異常性病理改變也是SEL患者主要的病理基礎之一,可出現在機體任何器官中。研究證實,SEL患者血小板數量減少,可導致患者自發(fā)性出血,加重預后[16]。正常情況下,吞噬細胞吞噬活化或衰老的血小板不會引起炎性反應,但當β2-GP1-Ab異常表達時刻引起吞噬細胞釋放炎性因子介導免疫炎癥,β2-GP1-Ab還可通過血小板Fc受體抑制血小板活化,大量凝集血小板導致血小板數量減少。本研究結果顯示,與對照組比較,SLE組患者的TSP-1水平明顯升高,β2-GP1-Ab水平明顯降低,這進一步證實其參與SLE的發(fā)生與進展。近年來,研究也指出β2-GP1-Ab與血栓性疾病之間存在直接關系[17]。本研究從T細胞亞群,以及TSP-1、β2-GP1-Ab水平方面入手,分析了其在SLE中的應用價值。

    Pearson相關性分析提示,Th2、Th17、TSP-1與SLEDAI評分呈正相關(r=0.552、0.318、0.364,P=0.000、0.014、0.001),β2-GP1-Ab、Treg與SLEDAI評分呈負相關(r=-0.552、-0.353,P=0.000、0.003)。提示SLE患者的Th17、Th2、Treg、TSP-1、β2-GP1-Ab指標均異常與病情存在一定關系。與相關研究結果一致[18]。本研究進一步應用ROC曲線分析了其在SLE患者診斷中的價值,結果顯示,TSP-1、β2-GP1-Ab檢測的ACU下面積均明顯大于Th17、Th2及Treg單獨檢測,TSP-1、β2-GP1-Ab檢測的靈敏度、特異度均優(yōu)于單獨檢測(P<0.05)。這提示,SLE患者存在T細胞亞群失衡和TSP-1、β2-GP1-Ab異常表達,且與SLEDAI評分相關,對其系統(tǒng)檢測在臨床診斷及病情評估中均有積極價值。

    4 結 論

    本研究存在一定局限性,樣本例數偏少,未能按照SLE疾病嚴重程度進行分級比較,在疾病不同階段可能主導的細胞因子不同,有待于后續(xù)大樣本多中心的深入研究。

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