姚文娟,宋會(huì)雙,王鳳琴,于婧,吳冬梅,劉大鵬
河北中石油中心醫(yī)院1病理科,2神經(jīng)外科,河北 廊坊 065000
子宮內(nèi)膜癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤,具有較高的發(fā)病率,近年來,隨著人們生活方式的改變及社會(huì)壓力的增加,其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,且發(fā)病人群趨于年輕化[1-2]。目前臨床對(duì)子宮內(nèi)膜癌在分子水平上的發(fā)病機(jī)制尚不明確,據(jù)較多研究顯示,其發(fā)生與發(fā)展是多種因素共同參與導(dǎo)致的結(jié)果,涉及多種抑癌基因的失活及癌基因的激活。同時(shí)炎癥與腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系,大量研究顯示,在富含趨化因子、炎性細(xì)胞、促DNA損傷物質(zhì)的炎性環(huán)境中可引發(fā)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[3-5]。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)是一種具備高度同源性的轉(zhuǎn)錄因子,能夠介導(dǎo)多種生長因子和細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞核,對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生影響,能夠調(diào)控細(xì)胞的功能,與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展以及腫瘤細(xì)胞的凋亡具有密切相關(guān)性[6]。STAT3是STAT的重要成員,是一種被公認(rèn)的癌基因。子宮內(nèi)膜癌的高危因素,如高齡、多囊卵巢綜合征、肥胖、糖尿病等可使白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和腫瘤壞死因子表達(dá)增加,這些炎性介質(zhì)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本研究主要探討IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況,并分析其與臨床特征的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。
選取2013年8月至2018年8月于河北中石油中心醫(yī)院接受手術(shù)治療的82例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①均經(jīng)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌;②未接受放化療治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴其他惡性腫瘤;②伴感染性疾病。82例子宮內(nèi)膜癌患者中,年齡34~72歲,平均年齡(57.82±7.13)歲;腫瘤大小0.7~5.8 cm,平均(2.76±0.32)cm。選取子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本為觀察組,癌旁正常子宮內(nèi)膜組織(距腫瘤2 cm)標(biāo)本為對(duì)照組。本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),且所有患者均自愿參與本研究,并簽署知情同意書。
應(yīng)用免疫熒光組化法檢測兩組子宮內(nèi)膜組織中IL-6、STAT3的表達(dá)情況:兔抗人IL-6單克隆抗體(稀釋濃度為1∶100)購自上海明睿生物技術(shù)有限公司,兔抗人STAT3多克隆抗體(稀釋濃度為1∶150)購自美國Ventana公司。將子宮內(nèi)膜組織應(yīng)用4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,4 μm厚切片,染色采用EnVision二步法,將組織切片置于65℃溫度下烘烤12 h,然后脫蠟、水化切片,應(yīng)用3%過氧化氫對(duì)內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行滅活,加入一抗放置在濕盒中,在4℃的環(huán)境下孵育過夜,然后加入二抗,在37℃恒溫箱中孵育30 min,將辣根過氧化物酶應(yīng)用鏈霉親和素標(biāo)記,并置于37℃環(huán)境下孵育10 min。每張組織切片上滴加50 μl二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色劑,在光學(xué)顯微鏡下顯色3~5 min,適時(shí)應(yīng)用磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)沖洗以終止顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠進(jìn)行封固。
IL-6、STAT3均以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性,應(yīng)用半定量積分法,對(duì)每個(gè)視野陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占百分比分別計(jì)分。著色強(qiáng)度:未著色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色或褐色為3分;陽性細(xì)胞所占百分比:>50%為3分,26%~50%為2分,2%~25%為1分,≤1%為0分。陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分+陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì)分>3分則判斷為陽性[7-8]。
檢測兩組組織中IL-6、STAT3的表達(dá)情況,分析IL-6、STAT3與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特征的關(guān)系,并分析IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性。
采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)的表示,組間比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
觀察組子宮內(nèi)膜組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率分別為 59.76%(49/82)、63.41%(52/82),均明顯高于對(duì)照組的6.10%(5/82)、10.98%(9/82),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=53.452、48.263,P<0.01)。
國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,F(xiàn)IGO)分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2~3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.530、11.078、12.584,P<0.01);FIGO 分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2~3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中STAT3陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.373、12.323、14.267,P<0.01)。(表1)
表1 不同臨床特征的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中的IL-6、STAT3陽性表達(dá)情況(n=82)
經(jīng)相關(guān)性分析顯示,IL-6與STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.657,P<0.05)。
Virchow最初在1863年提出腫瘤的發(fā)生與炎性反應(yīng)存在密切聯(lián)系,其在腫瘤組織中檢測到了白細(xì)胞,并發(fā)現(xiàn)了約有15%的惡性腫瘤患者因感染而死亡,例如由人乳頭狀瘤病毒長期感染引發(fā)的宮頸癌、慢性乙型肝炎感染久治不愈可發(fā)展為肝癌等[9-10]。IL-6是目前發(fā)現(xiàn)的功能較為廣泛的細(xì)胞因子之一,其參與血細(xì)胞生成,調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),并參與多種細(xì)胞的分化及增殖。起初臨床學(xué)者對(duì)于IL-6的研究只是將其作為一種炎性因子,后來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展以及腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲具有密切相關(guān)性,同時(shí)還與較多惡性腫瘤的預(yù)后有關(guān)[11]。STAT3是一種存在于細(xì)胞質(zhì)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,其激活后能夠與DNA相結(jié)合,進(jìn)而與酪氨酸磷酸化的信號(hào)通路相互偶聯(lián),對(duì)細(xì)胞凋亡、分化、增殖、免疫調(diào)節(jié)等多種相關(guān)功能蛋白的表達(dá)具有調(diào)控作用[12-14]。STAT3是STAT家族中與腫瘤發(fā)生與發(fā)展關(guān)系最密切的成員,其在多種腫瘤組織中均被激活,如卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌等[15]。
在本研究中對(duì)IL-6及STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)情況分析顯示,觀察組患者子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組,說明IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平高于健康內(nèi)膜組織。在本研究中對(duì)IL-6及STAT3與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特征的關(guān)系分析中顯示,F(xiàn)IGO分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)為G2~3級(jí)的子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達(dá)率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)為G1級(jí)的患者,說明IL-6、STAT3陽性表達(dá)情況與子宮內(nèi)膜癌患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分級(jí)有關(guān),能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移,分析其原因主要是因?yàn)镮L-6能夠通過胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/核因子-κB(nuclear factor of kappa-B,NF-κB)信號(hào)通路對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖與生長發(fā)揮促進(jìn)作用,同時(shí)炎性細(xì)胞對(duì)局部活性氧簇及活性氮簇的產(chǎn)生具有促進(jìn)作用,導(dǎo)致細(xì)胞DNA受損,極易導(dǎo)致細(xì)胞異常突變,如中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等炎性細(xì)胞均能夠介導(dǎo)氮簇、氧簇、白細(xì)胞介素、干擾素等炎性反應(yīng)過程,對(duì)腫瘤的侵襲及生長均具有影響,可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。STAT3已經(jīng)被認(rèn)為是一種癌基因,其激活后能夠誘導(dǎo)某些與細(xì)胞分化、增殖、凋亡密切聯(lián)系的關(guān)鍵基因出現(xiàn)異常表達(dá),能夠通過多種途徑對(duì)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、增殖發(fā)揮促進(jìn)作用,對(duì)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抑制作用,且隨著其陽性表達(dá)的升高,會(huì)促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。在本研究中對(duì)IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析中顯示,IL-6與STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān),分析其原因主要是因?yàn)镮L-6能夠通過gp130激活STAT3,然后進(jìn)一步促進(jìn)抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-XL(B cell lymphoma-XL,Bcl-XL)的表達(dá),進(jìn)而刺激腫瘤細(xì)胞的生長,使病情進(jìn)一步惡化,因此IL-6的陽性表達(dá)對(duì)STAT3的表達(dá)具有促進(jìn)作用。
綜上所述,IL-6、STAT3在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率明顯升高,且與腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)系,對(duì)臨床診斷與治療子宮內(nèi)膜癌具有較高的臨床價(jià)值。