產(chǎn)前免疫性抗體檢測(cè)與ABO血型系統(tǒng)新生兒溶血病相關(guān)性的研究

宋文倩 邵林楠 王霓 夏悅昕 周世航 于衛(wèi)建

[摘要] 目的 研究丈夫?yàn)榉荗型血的O型孕婦的IgG抗-A或抗-B效價(jià)與ABO血型系統(tǒng)新生兒溶血?。ˋBO HDN）的相關(guān)性。方法 2016年12月—2017年8月選取186例O型孕婦（丈夫?yàn)榉荗型），采用常規(guī)血清學(xué)方法檢測(cè)孕婦血清中的抗-A或抗-B效價(jià)，觀察抗體分布與效價(jià)升高情況，待分娩后通過(guò)新生兒溶血3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來(lái)分析抗體效價(jià)與ABO HDN的相關(guān)性。結(jié)果 抗-A與抗-B抗體效價(jià)的升高與ABO HDN的發(fā)病率無(wú)顯著相關(guān)性。結(jié)論 孕婦產(chǎn)前免疫性抗體檢測(cè)無(wú)法準(zhǔn)確預(yù)測(cè)ABO HDN。

[關(guān)鍵詞] 新生兒溶血病;抗體效價(jià);ABO血型系統(tǒng)

[中圖分類號(hào)] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2019）10（a）-0009-03

Correlation between Prenatal Immune Antibody Detection and Neonatal Hemolytic Disease in ABO Blood Group System

SONG Wen-qian， SHAO Lin-nan， WANG Ni， XIA Yue-xin， ZHOU Shi-hang， YU Wei-jian

Department of Blood Bank， Dalian Blood Center， Dalian， Liaoning Province， 116001 China

[Abstract] Objective To study the correlation between IgG anti-A or anti-B titer of O-type pregnant women with non-O blood type and ABO HDN in ABO blood group system. Methods 186 O-type pregnant women （husband is non-O type） were selected from December 2016 to August 2017. The anti-A or anti-B titers in the serum of pregnant women were detected by routine serological methods. The distribution of antibodies and the increase of titer were observed. Three experiments of neonatal hemolysis were performed to analyze the correlation between antibody titer and ABO HDN. Results There was no significant correlation between the increase in anti-A and anti-B antibody titers and the incidence of ABO HDN. Conclusion Prenatal immunological antibody testing in pregnant women cannot accurately predict ABO HDN.

[Key words] Neonatal hemolytic disease; Antibody titer; ABO blood group system

新生兒溶血?。℉aemolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）是一種常見的由母嬰血型不合導(dǎo)致的免疫性疾病，臨床上以ABO和Rh血型不合較普遍[1]。由于中國(guó)人群中RhD陰性血僅占總?cè)丝跀?shù)約3%，所以Rh血型系統(tǒng)HDN相對(duì)較少，而ABO血型系統(tǒng)HDN較為常見。大多數(shù)ABO血型系統(tǒng)HDN患兒癥狀較輕，表現(xiàn)為輕度黃疸;少數(shù)嚴(yán)重病例可能造成核黃疸導(dǎo)致新生兒腦部后遺癥甚至死亡[2]。對(duì)于ABO血型不合的夫婦，通常建議孕婦在懷孕16～20周時(shí)做血型免疫性抗體檢測(cè)，對(duì)于抗體效價(jià)≥64的孕婦應(yīng)每月做一次復(fù)查，來(lái)預(yù)測(cè)HDN的發(fā)生。如果母嬰血型不合的新生兒在出生7 d內(nèi)出現(xiàn)黃疸癥狀，需要采集靜脈血做直抗、游離和放散3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)來(lái)確診是否為ABO HDN[3]。該研究2016年12月—2017年8月采用血型血清學(xué)方法按照上述常規(guī)檢測(cè)流程對(duì)大連地區(qū)186例O型血孕婦做血型免疫性抗體的檢測(cè)，回顧性分析孕婦IgG抗體效價(jià)與ABO血型系統(tǒng)HDN的關(guān)系，為臨床預(yù)防和治療HDN提供參考依據(jù)，報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

選取到大連市血液中心做產(chǎn)前血型免疫性抗體檢測(cè)的O型血孕婦186例，其丈夫均為非O型血。孕婦年齡在23～39歲之間，孕周為16～35周，初次檢測(cè)為16～20孕周。待分娩后，隨訪其新生兒血型和ABO HDN發(fā)生的情況。

1.2 ?試劑與儀器

抗-A、抗-B單克隆抗體血清（20160805）、ABO試劑紅細(xì)胞（2017083018）、抗-D抗體（20171807）、篩選細(xì)胞（20177029）、抗-IgG試劑（20175101）、2-巰基乙醇（Millipore，M6250）離心機(jī)（KA-2200型）、37℃水浴箱。

1.3 ?方法

1.3.1 血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查 ?采集夫婦兩人靜脈血各2 mL，分別做ABO、Rh血型鑒定和孕婦的不規(guī)則抗體篩查實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)方法參照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

1.3.2 IgG抗體效價(jià)檢測(cè) ?取100μL孕婦血漿加等量的2-ME混合后置于37℃水浴中10 min，使血漿中的IgM抗體被破壞。用生理鹽水倍比稀釋后，加入與丈夫血型相同的ABO試劑紅細(xì)胞，37℃孵育30 min后測(cè)定相應(yīng)的IgG血型抗體效價(jià)。

1.3.3 新生兒溶血3項(xiàng)實(shí)驗(yàn) ?取新生兒檸檬酸鹽抗凝血3 mL，紅細(xì)胞洗滌3次，分別做ABO、Rh血型鑒定、直接抗人球?qū)嶒?yàn)、游離抗體實(shí)驗(yàn)和放散抗體實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法參照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

1.4 ?統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料[n（%）]采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?孕婦血漿IgG類ABO抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果

對(duì)186位丈夫?yàn)榉荗型的O型血孕婦初次檢測(cè)的ABO抗體效價(jià)統(tǒng)計(jì)，其中O-A占37.1%;O-B占45.2%;O-AB占17.7%。每種血型組合對(duì)應(yīng)的抗體效價(jià)分布情況見表1。

2.2 ?O型孕婦IgG抗-A、抗-B效價(jià)與ABO血型系統(tǒng)HDN發(fā)病率的相關(guān)性

186例夫婦血型不合的孕婦中有138例IgG抗-A或抗-B效價(jià)大于64，復(fù)查后抗體效價(jià)升高的狀況與分娩后新生兒患ABO血型系統(tǒng)HDN的情況見表2所示，其中丈夫?yàn)锳B型的抗-A與抗-B效價(jià)都統(tǒng)計(jì)在內(nèi)。

3 ?討論

多年來(lái)，臨床上認(rèn)為母嬰ABO血型不合是引起HDN的一個(gè)重要原因，孕婦血清IgG抗-A或抗-B效價(jià)越高，致敏胎兒紅細(xì)胞引起溶血的可能性越大[4]。有醫(yī)院曾在一年內(nèi)對(duì)54例重度ABO HDN患兒進(jìn)行了換血治療[5]。為了預(yù)測(cè)ABO HDN，丈夫?yàn)锳、B或AB型的O型血孕婦通常從懷孕16～20周開始，每隔一段時(shí)間時(shí)監(jiān)測(cè)一次IgG抗-A、抗-B效價(jià)直至分娩。臨床上以64作為抗體效價(jià)的參考值，效價(jià)<64被認(rèn)為不會(huì)發(fā)生ABO HDN;效價(jià)>64被認(rèn)為較易發(fā)生ABO HDN;抗體效價(jià)值越高，發(fā)病概率越大[6]。然而近年來(lái)，一些西方發(fā)達(dá)國(guó)家陸續(xù)取消產(chǎn)前ABO血型系統(tǒng)抗體檢測(cè)，僅針對(duì)Rh陰性孕婦做新生兒Rh血型系統(tǒng)溶血病的預(yù)防性檢測(cè)。因此，國(guó)際上對(duì)于是否應(yīng)該保留產(chǎn)前ABO血型抗體檢測(cè)一直存在爭(zhēng)議。

不同于作為紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白R(shí)h血型抗原，ABO血型抗原為紅細(xì)胞表面糖蛋白，其數(shù)量隨胎兒發(fā)育而逐漸增加，直到出生后6個(gè)月才接近成人水平。胎兒血漿中可能會(huì)存在高效價(jià)的抗-A或抗-B抗體，但實(shí)驗(yàn)證實(shí)均為IgG抗體，即來(lái)源于母體[7]。由于胎兒抗原水平低，此類IgG抗體極少能造成胎兒高膽紅素血癥和嚴(yán)重貧血，積水和核黃疸更是罕見。即使新生兒直接抗人球?qū)嶒?yàn)?zāi)瘡?qiáng)度為4+，抗體也均為IgG性質(zhì)，通常不會(huì)激活補(bǔ)體系統(tǒng);同時(shí)胎兒紅細(xì)胞上A或B抗原為弱表達(dá)，不會(huì)與抗-C3d抗體反應(yīng)[8]。目前部分統(tǒng)計(jì)研究顯示孕婦IgG抗A或B效價(jià)與ABO新生兒溶血病發(fā)病率呈正相關(guān)[9-10]，然而該類報(bào)道僅探討抗體效價(jià)與ABO HDN發(fā)病率的關(guān)系，而沒(méi)有考慮到抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)，即抗體持續(xù)升高。該實(shí)驗(yàn)室在臨床檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)部分O型未孕女性IgG抗-A或B效價(jià)就高達(dá)64甚至256，懷孕后所維持的高效價(jià)與胎兒紅細(xì)胞的免疫刺激無(wú)關(guān)，因此只有抗體效價(jià)持續(xù)升高的孕婦才應(yīng)被判斷為易發(fā)生ABO HDN。然而，該研究的結(jié)果顯示抗體效價(jià)的升高ABO血型系統(tǒng)HDN發(fā)病率無(wú)顯著相關(guān)性。在新生兒溶血3項(xiàng)檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)1例孕后期抗-A效價(jià)持續(xù)升高至2 048的O型孕婦的新生兒為O型，孕期抗體升高的影響因素以及ABO HDN檢測(cè)的準(zhǔn)確性尚待確證。

目前，國(guó)內(nèi)普遍將產(chǎn)前ABO HDN檢測(cè)作為O型血孕婦產(chǎn)檢的常規(guī)項(xiàng)目，然而結(jié)論的可靠性仍需要進(jìn)一步研究。該實(shí)驗(yàn)由于標(biāo)本量有限，結(jié)論有一定的局限性。后期會(huì)繼續(xù)積累大量數(shù)據(jù)，進(jìn)一步做Meta分析，通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)幫助臨床合理地安排產(chǎn)前項(xiàng)目。

[參考文獻(xiàn)]

[1] ?劉達(dá)莊.免疫血液學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002.

[2] ?曹瓊，蘭炯采.新生兒溶血病的產(chǎn)前診斷方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)輸血雜志，2003，16（1）：67-68.

[3] ?邱小華，施冬梅，劉碧清.汕頭地區(qū)孕母產(chǎn)前血型抗體預(yù)測(cè)新生兒溶血病的研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014（4）：401-402.

[4] ?方曉蕾.與丈夫血型不合O型和/或RhD（-）孕婦產(chǎn)前血型免疫學(xué)抗體與HDN的關(guān)系[J].中國(guó)輸血雜志，2008，21（2）：122-123.

[5] ?陳方祥，何靜，陳方祥.54例重度ABO新生兒溶血病換血治療結(jié)果分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（2）：232-233.

[6] ?魏亞明，歐英賢.紅細(xì)胞免疫抗體檢查在輸血及產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)輸血雜志，2000，13（4）：266.

[7] ?Fung MK，GB， Hillyer CD.Westhoff CM（eds） Glycine-HCl/EDTA elution procedure （method 4-2） & heat elution procedure（method 4-3）， general laboratory methods. American association of blood bank， Bethesda， Maryland， USA. Technical manual，2014（18）：17-19.

[8] ?V Kumawat，K Kulkarni，M Goyal.ABO Hemolytic Disease of Fetus and Newborn; Still a Diagnostic Dilemma： A Case Report[J].Indian Journal of Hematology & Blood Transfusion，2017（4）：1-2.

[9] ?張毅，崔吉香，李慧.微柱凝膠技術(shù)在O型孕婦IgG抗A/B效價(jià)與ABO新生兒溶血病相關(guān)性研究中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（12）：1626-1627.

[10] ?P Li，LH Pang，HF Liang. Maternal IgG Anti-A and Anti-B Titer Levels Screening in Predicting ABO Hemolytic Disease of the Newborn： A Meta-Analysis[J].Fetal & Pediatric Pathology，2015，34（6）：341-50.

（收稿日期：2019-07-04）