顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法檢測(cè)肌紅蛋白的性能評(píng)價(jià)

蔣洪昆，郭 偉，呂桂樺

(廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西柳州 545001)

肌紅蛋白(MYO)屬于血紅素蛋白家族，是肌肉內(nèi)的儲(chǔ)氧蛋白，僅僅存在于心肌細(xì)胞和氧化的骨骼肌纖維內(nèi)并能與氧氣可逆的結(jié)合。它能夠很好地在肌肉內(nèi)儲(chǔ)存氧氣并能在組織缺氧時(shí)將其釋放出來(lái)；也能夠在肌肉活動(dòng)增加時(shí)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧濃度。據(jù)研究表明，肌紅蛋白是一個(gè)靈敏、可靠的早期診斷急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)和檢測(cè)溶栓療效的指標(biāo)[1]。同時(shí)，肌紅蛋白的檢測(cè)對(duì)急性心肌梗死、心力衰竭的診斷及嚴(yán)重程度的判斷，急性一氧化碳中毒、糖尿病酮癥等的診斷方面均有重要的臨床意義[2-6]。顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法的檢測(cè)原理是使用抗人肌紅蛋白抗體包被的乳膠顆粒和樣品中的肌紅蛋白進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，反應(yīng)完成后，固定時(shí)間檢測(cè)吸光度來(lái)確定肌紅蛋白的濃度。本文參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)相關(guān)文件對(duì)顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法檢測(cè)肌紅蛋白進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年6-9月柳州市人民醫(yī)院住院患者和門(mén)診患者及健康體檢者，所有標(biāo)本均為常規(guī)檢查的剩余標(biāo)本，不涉及任何與患者隱私相關(guān)的醫(yī)療信息。

1.2儀器與試劑 Olympus AU2700型全自動(dòng)生化分析儀，顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法檢測(cè)肌紅蛋白試劑采用上海德賽診斷系統(tǒng)的試劑盒(批號(hào)14432)。

1.3方法

1.3.1精密度評(píng)價(jià) 參照CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對(duì)精密度和準(zhǔn)確度性能的核實(shí)試驗(yàn)——批準(zhǔn)指南》，取選取兩種濃度水平的樣本各一份，濃度水平應(yīng)與廠家精密度評(píng)價(jià)時(shí)所用樣本接近或與醫(yī)學(xué)決定水平接近，每天分析1個(gè)批次，共進(jìn)行5天，每份標(biāo)本每天重復(fù)測(cè)定3次。計(jì)算出批內(nèi)變異系數(shù)(CV)、批間CV各項(xiàng)指標(biāo)，最后對(duì)照廠家聲明進(jìn)行驗(yàn)證。

1.3.2準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 統(tǒng)計(jì)分析室間質(zhì)評(píng)結(jié)果,對(duì)參加的衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)的10個(gè)不同批號(hào)的樣本測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，以衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的靶值為真值，本儀器的相對(duì)偏倚按下列公式計(jì)算 偏倚=(測(cè)定值-靶值)/靶值×100%，10個(gè)批號(hào)質(zhì)控物的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果均在允許偏移范圍，則正確度驗(yàn)證通過(guò)。

1.3.3參考區(qū)間驗(yàn)證 選擇20份體檢合格的健康人標(biāo)本，在檢測(cè)系統(tǒng)上進(jìn)行測(cè)定，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并對(duì)儀器說(shuō)明書(shū)提供的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，若20份標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均在儀器說(shuō)明書(shū)提供的參考區(qū)間內(nèi)或僅有2個(gè)標(biāo)本超出，則驗(yàn)證通過(guò)。否則，進(jìn)行參考區(qū)間確立實(shí)驗(yàn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1精密度評(píng)價(jià)結(jié)果 2個(gè)水平的樣本每天分析1個(gè)批次，共進(jìn)行5 d，每份標(biāo)本每天重復(fù)測(cè)定3次。計(jì)算出批內(nèi)CV、批間CV各項(xiàng)指標(biāo)，批內(nèi)CV值和批間CV值及實(shí)驗(yàn)室變異系數(shù)均小于廠商說(shuō)明1.2%，說(shuō)明該方法有較高的重復(fù)性，精密度驗(yàn)證通過(guò)。水平1和水平2的精密度結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)結(jié)果 表2顯示的是參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心全國(guó)心肌標(biāo)志物室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的結(jié)果。

表1 精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

表2 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)

2.3參考區(qū)間驗(yàn)證 結(jié)果顯示在選取的20例健康參考個(gè)體中，MYO的測(cè)量值均在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)(<70 μg/L),說(shuō)明廠家提供的生物參考區(qū)間適合于本實(shí)驗(yàn)室使用。

3 討 論

肌紅蛋白是一種廣泛存在于心肌和骨骼肌中的蛋白質(zhì)，具有儲(chǔ)存和運(yùn)輸氧的功能[7]。當(dāng)機(jī)體的橫紋肌受損傷，心肌和骨骼肌中的肌紅蛋白便釋放入血液中，檢測(cè)血清中的肌紅蛋白水平對(duì)于心肌損傷的疾病和多發(fā)傷患者的臨床診斷、治療及預(yù)后判斷具有重要意義。BHAYANA等[8]研究了急性心肌梗死(AMI)患者血清中肌紅蛋白的變化情況，研究發(fā)現(xiàn)發(fā)生AMI后，肌紅蛋白可于胸痛發(fā)作后2～3 h在血液中達(dá)到病理水平，早于肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)。國(guó)內(nèi)研究者發(fā)現(xiàn)多發(fā)傷患者的血清肌紅蛋白濃度均有升高，然后呈逐漸下降趨勢(shì)[5]，可見(jiàn)檢測(cè)血清/血漿中的肌紅蛋白在急性心肌梗死等疾病臨床診斷、治療及預(yù)后判斷中有非常重要的作用[9]腎功能不全患者不僅具有早期監(jiān)測(cè)心血管事件的意義，而且可以作為腎功能的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一[10]。

目前臨床上檢測(cè)血清中肌紅蛋白的方法有膠體金免疫層析法[11]、光激化學(xué)發(fā)光法[12]和免疫透射比濁法[13]等。膠體金免疫層析法是利用肌紅蛋白單克隆抗體標(biāo)記膠體金，另一株抗人肌紅蛋白單克隆抗體包被膜作為檢測(cè)線，兔抗鼠IgG抗體包被膜作為對(duì)照線，建立的半定量金免疫層析方法，雖然可以快速得到結(jié)果，但是結(jié)果為半定量，不利于臨床的鑒別診斷；光激化學(xué)發(fā)光法是使用針對(duì)不同表位的2株單克隆抗體，一株包被發(fā)光顆粒，另一株進(jìn)行生物素化，與包被有鏈霉親和素的感光微粒共同構(gòu)成檢測(cè)試劑來(lái)測(cè)定肌紅蛋白水平的方法，其優(yōu)點(diǎn)是敏感度高，但檢測(cè)成本比較高，不利于節(jié)約患者開(kāi)支；本研究所關(guān)注的顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法是新一代免疫測(cè)定技術(shù)，實(shí)驗(yàn)原理是使用抗人肌紅蛋白抗體包被的乳膠顆粒和樣品中的肌紅蛋白進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，反應(yīng)完成后，固定時(shí)間檢測(cè)吸光度來(lái)確定肌紅蛋白的濃度。它大大提高了免疫比濁技術(shù)的敏感性、特異性，具有快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、試劑價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。特別是它不需要特殊的儀器，在普通生化分析儀上即可使用，極大地?cái)U(kuò)展了生化儀的使用范圍，明顯降低了檢測(cè)成本，有利于急診中的使用。本研究對(duì)顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法檢測(cè)肌紅蛋白精密度、準(zhǔn)確度、參考范圍進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，精密度評(píng)價(jià)選擇了50 μg/L和400 μg/L 2個(gè)濃度按CLSI評(píng)價(jià)方案進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示批內(nèi)變異系數(shù)為0.66%和0.78%，批間變異系數(shù)為0.50%和0.43%，均小于廠商聲明的1.2%的變異系數(shù)。準(zhǔn)確度按照CLSI EP15-A2文件進(jìn)行，采用衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)的10個(gè)不同批號(hào)的樣本測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示所有的測(cè)定值均在允許范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度驗(yàn)證通過(guò)。本實(shí)驗(yàn)按照CLSI C28-A2文件推薦的方法進(jìn)行參考范圍的驗(yàn)證，選取了20份體檢合格的健康人標(biāo)本，檢測(cè)結(jié)果顯示所有結(jié)果均在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)，符合文件要求，說(shuō)明廠家提供的生物參考區(qū)間適合于本實(shí)驗(yàn)室使用。綜上所述，顆粒增強(qiáng)型免疫透射比濁法檢測(cè)肌紅蛋白的分析性能與廠商提供的性能參數(shù)基本一致，均符合臨床要求。