紐荷爾臍橙微量元素缺乏癥狀及其葉片光合日變化特性

周高峰，李碧嫻，林華珍，管 冠，劉桂東，姚鋒先，鐘八蓮

（贛南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/國(guó)家臍橙工程技術(shù)研究中心，江西贛州 341000）

我國(guó)是世界重要的柑橘生產(chǎn)國(guó)之一，其中臍橙在國(guó)內(nèi)外柑橘生產(chǎn)中占有重要地位。我國(guó)臍橙主要集中在贛南—湘南—桂北一線以及長(zhǎng)江三峽等地區(qū)，這些地區(qū)地理和土壤條件一般較差，甚至存在顯著的缺素現(xiàn)象[1-5]。柑橘微量元素缺乏通常發(fā)生在新開墾或土層較淺的臍橙園，尤其是砂壤土和堿性土壤柑橘園[6-7]。對(duì)柑橘微量元素缺乏的研究較多，尤其是關(guān)于Fe、B、Zn 等缺乏的研究[8-10]。如目前種植面積和產(chǎn)量均居全國(guó)第一的贛南臍橙產(chǎn)區(qū)[11-12]，其主栽的紐荷爾臍橙長(zhǎng)期受到土壤缺B 的影響，缺B 比例高達(dá)87.1%[4]。王男麒等[13]對(duì)贛南地區(qū)223 個(gè)代表性柑橘園進(jìn)行背景土壤分析發(fā)現(xiàn)，26.0%背景土壤出現(xiàn)缺Cu 現(xiàn)象。另外，范玉蘭等[5]對(duì)1405 個(gè)贛南臍橙園土壤樣本進(jìn)行有效Cu 含量分布特征研究發(fā)現(xiàn)，極缺和缺乏的臍橙園樣本數(shù)為331 個(gè)，占樣本總數(shù)的23.6%。從葉片診斷角度，凌麗俐等[3]對(duì)贛南地區(qū)的9 個(gè)縣 (市、區(qū))121 個(gè)臍橙園的臍橙葉片微量元素進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，有95.0%的臍橙葉片Zn 含量處于低量或缺乏水平；贛縣和會(huì)昌縣臍橙園葉片Cu 含量主要處于低量水平，分別占55.6%和100.0%；信豐縣臍橙果園則表現(xiàn)為葉片Mn 缺乏，Mn 含量處于低量水平的縣 (市、區(qū)) 還有南康市、章貢區(qū)、大余縣和會(huì)昌縣。與其他果樹一樣，紐荷爾臍橙葉片的光合能力是產(chǎn)量和品質(zhì)形成的基礎(chǔ)，其干物質(zhì)的90%以上來自于葉片的光合產(chǎn)物[14]。而微量元素能直接或間接地參與光合作用，其缺乏對(duì)葉片的光合特性會(huì)產(chǎn)生顯著影響[15]。其影響通常比葉面癥狀更早，因此可以作為微量元素缺乏早期診斷的依據(jù)之一。

本研究以贛南臍橙主栽品種紐荷爾臍橙為試材，通過砂培盆栽缺素試驗(yàn)，研究目前在臍橙生產(chǎn)上常見的缺Fe、Mn、B、Zn 和Cu 現(xiàn)象。首先，通過觀察記錄缺Fe、Mn、B、Zn 和Cu 在不同處理時(shí)間和植株不同部位的癥狀，進(jìn)一步明確紐荷爾臍橙缺素在不同階段的癥狀。其次，通過研究缺Fe、Mn、B、Zn 和Cu 條件下的光合特性，找到早期缺素的特征曲線。通過以上兩方面的工作，以期為田間缺素癥狀的早期診斷提供理論和試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與處理

試驗(yàn)于2016 年11 月至翌年9 月在國(guó)家臍橙工程技術(shù)研究中心基地溫室進(jìn)行。以2016 年4 月嫁接的1 年生枳 [Poncirus trifoliata (L.) Raf.] 砧紐荷爾臍橙 [Citrus sinensis (L.) Osb. CV. Newhall] 幼苗為材料。

選取生長(zhǎng)在相同育苗基質(zhì)中相對(duì)一致的紐荷爾臍橙幼苗，每株小苗保留1 個(gè)抽梢，將該梢的葉片定義為老葉，同時(shí)對(duì)植株根系進(jìn)行重剪 (促進(jìn)植株多發(fā)須根[16])。然后，用自來水清洗苗木除去根表面的污漬，將植株移栽至裝有8 L 左右石英砂和珍珠巖1∶1 (v∶v) 的黑色塑料盆中，每盆一棵。用略有修改的Hoagland No.2 營(yíng)養(yǎng)液[17]澆灌。營(yíng)養(yǎng)液的配方如下:6 mmol/L KNO3、4 mmol/L Ca(NO3)2、1 mmol/L NH4H2PO4、2 mmol/L MgSO4、25 μmol/L H3BO3、9 μmol/L MnCl2、0.8 μmol/L ZnSO4、0.3 μmol/L CuSO4、0.01 μmol/L H2MoO4和 50 μmol/L Fe-EDTA。大棚的溫度控制在22℃～28℃，相對(duì)濕度為50%～75%。每2 天澆灌1 次營(yíng)養(yǎng)液，每次均澆透，即營(yíng)養(yǎng)液有約500 mL 從盆底流出。

試驗(yàn)設(shè)置5 個(gè)處理和1 個(gè)對(duì)照。對(duì)照 (CK)，1/2 劑量Hoagland 和全劑量Arnon 營(yíng)養(yǎng)液栽培；缺鐵 (-Fe)，不添加Fe-EDTA 的1/2 劑量Hoagland 和全劑量Arnon 營(yíng)養(yǎng)液栽培，下同；缺錳 (-Mn)，不添加MnCl2，添加相同濃度的KCl；缺硼 (-B)，不添加H3BO3；缺鋅 (-Zn)，不添加ZnSO4；缺銅(-Cu)，不添加CuSO4。每組重復(fù)5 株。培養(yǎng)到1 個(gè)月左右的時(shí)候植株開始抽新梢，待新梢長(zhǎng)勢(shì)穩(wěn)定后每株植株保留2 個(gè)新梢，將新梢的葉片定義為新葉；處理6 個(gè)月后再保留一次抽梢，其葉定義為次級(jí)新葉。試驗(yàn)持續(xù)10 個(gè)月。為了防止鹽分在基質(zhì)中累積，每周用10 L 去離子水澆灌植株，而后用3 L營(yíng)養(yǎng)液澆灌，確保有過量溶液從盆底淋出[18]。

1.2 測(cè)定方法

利用佳能 (Canon)EOS 6D (W) 數(shù)碼單反相機(jī)，對(duì)不同處理的紐荷爾臍橙癥狀葉片進(jìn)行拍攝記錄。處理6 個(gè)月后，選取各處理有癥狀的紐荷爾臍橙老葉和新葉各6 片進(jìn)行葉綠素含量的測(cè)定，具體參考Zhou 等[19]的方法進(jìn)行。

采用美國(guó)LI-COR 公司生產(chǎn)的LI-6400XT 便攜式光合測(cè)定系統(tǒng)，于2017 年4 月22 日進(jìn)行光合測(cè)定，當(dāng)天晴朗無云，日出時(shí)間為5:50:37，日落時(shí)間為18:46:56，日照時(shí)長(zhǎng)為12 小時(shí)56 分鐘16 秒。測(cè)量時(shí)間從7:00 到18:30，每1.5 或2 小時(shí)測(cè)定1 次。光合有效輻射 (PAR)、大氣溫度 (Tair)、田間二氧化碳濃度 (Ca)、相對(duì)濕度 (RH)、凈光合速率 (Pn)、蒸騰速率 (Tr)、胞間二氧化碳濃度 (Ci) 及氣孔導(dǎo)度 (Gs) 等參數(shù)由光合儀同步測(cè)定并記錄，所測(cè)定的葉片每株選取老葉6 片，新葉6 片，每個(gè)處理測(cè)定4 株，待LI-6400XT 系統(tǒng)穩(wěn)定之后，每片葉讀取5 個(gè)瞬時(shí)各參數(shù)值，取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

除非特別說明，圖表中的數(shù)據(jù)代表4 株單獨(dú)植株 (重復(fù)) 的平均值。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行環(huán)境因子之間相關(guān)性分析，得到皮爾森相關(guān)系數(shù)，并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行分析，運(yùn)用ANOVA 和DONCAN 程序進(jìn)行不同處理之間的差異顯著性分析 (SAS 8.1, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)，顯著水平為P ＜ 0.05。所有數(shù)據(jù)使用Sigmaplot 軟件進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 紐荷爾臍橙不同微量元素缺乏的癥狀

以枳砧紐荷爾臍橙為材料進(jìn)行不同微量元素缺乏處理，分別觀察其在處理6 個(gè)月和10 個(gè)月后的地上部癥狀。如圖1 所示，缺鐵 (-Fe)6 個(gè)月后紐荷爾臍橙初級(jí)新葉先顯癥狀，葉片呈黃綠色，葉脈保持綠色，呈細(xì)網(wǎng)狀葉脈；10 個(gè)月后次級(jí)新葉完全失綠呈白色或淡黃色，葉脈也呈白色。缺錳 (-Mn) 同樣在初級(jí)新葉先顯癥狀，葉淡綠呈細(xì)小網(wǎng)紋，脈間淺綠，在主脈和側(cè)脈間現(xiàn)不規(guī)則淺色條帶；10 個(gè)月時(shí)次級(jí)新葉呈黃色或灰白色，葉脈間現(xiàn)不透明褐色斑點(diǎn)，并停止生長(zhǎng)。缺硼 (-B) 則是老葉先顯癥狀，處理6 個(gè)月時(shí)老葉不黃化，葉脈 (主脈和側(cè)脈) 輕微突起，觸摸感較強(qiáng)；10 個(gè)月后老葉葉脈嚴(yán)重爆裂同時(shí)伴有脈間輕微黃化，初級(jí)新葉葉片顯著增厚變硬，初級(jí)新梢莖尖新芽簇生，但均不能抽生次級(jí)新梢，植株停止生長(zhǎng)。缺鋅 (-Zn) 處理6 個(gè)月時(shí)初級(jí)新葉先顯癥狀，呈現(xiàn)斑駁黃化；10 個(gè)月后次級(jí)新葉簇生、葉片嚴(yán)重變窄變小，有的葉片甚至出現(xiàn)畸形癥狀。缺銅 (-Cu) 紐荷爾臍橙6 個(gè)月后，初級(jí)新葉先顯輕微癥狀，葉色深綠，葉面凹凸不平；-Cu 處理10 個(gè)月后次級(jí)新葉葉脈彎曲成弓狀，葉色變淡，枝條細(xì)長(zhǎng)而柔軟，扭曲下垂，頂端易枯死。

2.2 不同微量元素缺乏處理對(duì)紐荷爾臍橙葉片光合色素含量的影響

圖 1 缺素培養(yǎng)6 個(gè)月 (Ⅰ) 和10 個(gè)月 (Ⅱ) 后紐荷爾臍橙葉片微量元素缺乏癥狀Fig. 1 Symptoms of ‘Newhall’ navel orange leaves after 6 months (Ⅰ) and 10 months (Ⅱ) of nutrient deficient treatment

如圖1- (Ⅰ) 所示，不同微量元素缺乏6 個(gè)月后，紐荷爾臍橙老葉或初級(jí)新葉出現(xiàn)不同程度的失綠，光合色素含量測(cè)定結(jié)果表明:與對(duì)照 (CK) 相比，老葉中的葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素及類胡蘿卜素的含量均無顯著差異 (圖2)。在初級(jí)新葉中，-Fe、-Mn 和-Zn 顯著降低了其葉綠素a 的含量，但-B、-Cu 無顯著影響；對(duì)于葉綠素b 和類胡蘿卜素的含量則只是在-Fe 的條件下顯著下降；總?cè)~綠素含量則只在-Fe、-Mn 和-Zn 處理時(shí)顯著下降，且下降幅度為-Fe ＞ -Mn ＞ -Zn 處理；類胡蘿卜素的含量則在-Zn 處理時(shí)最高，-Fe 處理則顯著下降 (圖2)。

2.3 不同微量元素缺乏對(duì)紐荷爾臍橙葉片光合日變化的影響

2.3.1 環(huán)境因子日變化 由圖3 可知，光合有效輻射 (PAR) 日變化呈單峰曲線，9:00—15:00 PAR 值均在1000 μmol/(m2·s) 以上，13:00 時(shí)出現(xiàn)最高峰，達(dá)到1607 μmol/(m2·s)。大氣溫度 (Tair) 的變化趨勢(shì)與PAR 相似，也成單峰曲線，7:00 時(shí)最低，然后急劇上升，13:00 時(shí)達(dá)到最高溫度33.9℃，之后降低。Tair與前一時(shí)間點(diǎn)的PAR 之間r=0.892，相關(guān)性達(dá)到顯著 (P ＜ 0.05) 水平 (表1)。

7:00 時(shí)田間CO2濃度 (Ca) 出現(xiàn)最高值為447 μmol/mol，隨后不斷下降，在18:30 時(shí)略有回升。相對(duì)濕度 (RH)7:00 后急劇下降，13:00 達(dá)到最低值為29.8%，然后呈緩慢回升趨勢(shì)。Ca和RH 的變化趨勢(shì)均呈倒鐘型，二者相關(guān)性分析r=0.898，達(dá)到極顯著(P ＜ 0.01) 水平。Ca和RH 與Tair的相關(guān)性極顯著，r 值分別為-0.876 和-0.997(P ＜ 0.01)(表1)。

因此，在4 個(gè)與紐荷爾臍橙光合作用相關(guān)的環(huán)境因子中，PAR 為驅(qū)動(dòng)因子，在其他因子的變化中起主導(dǎo)作用 (表1)。

2.3.2 凈光合速率 (Pn) 日變化 圖4 結(jié)果顯示，在紐荷爾臍橙CK 的新葉和老葉中，Pn日變化的趨勢(shì)均為單峰曲線，峰值出現(xiàn)在9:00 時(shí)，為10.6 和8.7 μmol/(m2·s)。微量元素缺乏處理后，-B 處理顯著改變了老葉的Pn日變化的趨勢(shì)，另外推遲了-Zn 處理峰值出現(xiàn)的時(shí)間。在新葉的峰值 (9:00) 時(shí)，-Fe、-Mn 和-Zn 處理顯著降低了Pn的峰值，雖然此時(shí)對(duì)-B 和-Cu 處理的Pn無顯著影響，但在11:00 時(shí)有顯著下降。在老葉的峰值 (9:00) 時(shí)，-B 處理顯著降低了Pn的峰值。

圖 2 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片葉綠素及類胡蘿卜素含量Fig. 2 Chlorophylls and carotenoid contents in the new leaves and old leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiencies

圖 3 光合有效輻射、大氣溫度、田間二氧化碳濃度和相對(duì)濕度日變化Fig. 3 Diurnal variation of photosynthetic active radiation (PAR), air temperature (Tair), field CO2 concentration (Ca)and relative humidity (RH)

Pn日均值結(jié)果顯示，與CK 相比，-Fe、-Mn 和-Zn 處理顯著降低了新葉的Pn日均值，降幅達(dá)60.0%、24.5%和28.9%，但對(duì)-B 和-Cu 處理新葉無顯著影響。在老葉中，則是-Fe 和-B 處理顯著降低了其Pn日均值，降幅分別為19.9%和85.9%，-B 處理紐荷爾臍橙老葉凈光合速率已經(jīng)接近停止 (表2)。

表 1 環(huán)境因子之間相關(guān)分析Table 1 Correlation analysis among environmental factors

圖 4 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片凈光合速率 (Pn) 日變化Fig. 4 Diurnal variation of net photosynthetic rate (Pn) in old leaves and new leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiency

表 2 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片光合特性日均值比較Table 2 Comparison of photosynthetic traits in new leaves and old leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiency

圖 5 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片蒸騰速率 (Tr) 日變化Fig. 5 Diurnal variation of transpiration rate (Tr) in old leaves and new leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiency

圖 6 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片胞間CO2 濃度 (Ci ) 日變化Fig. 6 Diurnal variation of intercellular CO2 concentration (Ci ) in old leaves and new leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiency

2.3.3 蒸騰速率 (Tr) 日變化 如圖5 所示，CK 及微量元素缺乏處理的紐荷爾臍橙的新葉Tr日變化的趨勢(shì)均為雙峰曲線，除-Fe 處理首峰出現(xiàn)在11:00時(shí)，其他首峰均出現(xiàn)在9:00 時(shí)，次峰出現(xiàn)在15:00；老葉中除-B 外均為單峰曲線，但從9:00 至13:00時(shí)變化較平緩。在新葉的首峰 (9:00) 時(shí)，Tr值在-Fe 和-Zn 條件下被顯著抑制，CK 9:00 至11:00 時(shí)變化平緩，但除-B 處理外，其他處理均在11:00 時(shí)顯著下降。-B 處理的老葉Tr值從測(cè)定開始到結(jié)束始終維持在較低水平，且顯著低于對(duì)照。其他處理的老葉Tr值則與對(duì)照無顯著差異。

如表2 所示，Tr日均值僅在-Fe 處理的新葉和-B 處理的老葉中顯著下降，降幅分別為24.6%和41.6%，其他處理新葉和老葉與CK 相比均無顯著差異。

2.3.4 胞間二氧化碳濃度 (Ci) 日變化 從圖6 可知，與田間CO2濃度變化趨勢(shì)相似 (圖3)，除-B 處理的老葉外，所有對(duì)照與處理的Ci日變化趨勢(shì)均呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢(shì)，并達(dá)到峰值。Ci值受影響最顯著的分別是-Fe 處理的新葉和-B 處理的老葉，其他處理與對(duì)照比較差異不顯著。

紐荷爾臍橙Ci日均值僅在-Fe 處理的新葉和-B 處理的老葉中與CK 相比顯著升高，升幅為18.7%和35.3%，其他處理均無顯著差異。

圖 7 紐荷爾臍橙缺乏不同微量元素新、老葉片氣孔導(dǎo)度 (Gs ) 日變化Fig. 7 Diurnal variation of stomatal conductance (Gs ) in old leaves and new leaves of ‘Newhall’ navel orange with micronutrients deficiency

2.3.5 氣孔導(dǎo)度 (Gs) 日變化 圖7 結(jié)果顯示，Gs日變化在CK 的新葉中呈雙峰曲線，老葉中則為單峰曲線，首峰均出現(xiàn)在9:00 時(shí)，分別為148 和126 mmol/(m2·s)，新葉次峰出現(xiàn)在15:00 時(shí)，為69 mmol/(m2·s)，且次峰值低于首峰值。微量元素缺乏處理后，新葉中僅有-Zn 處理次峰消失，-Mn 和-B 處理的老葉中則在15:00 時(shí)出現(xiàn)了次峰。在新葉的首峰 (9:00) 時(shí)，除-B 和-Cu 處理外其他處理的Gs值均顯著低于對(duì)照，而在次峰 (15:00) 時(shí)，只有-Fe、-B 和-Zn 處理的Gs值顯著低于對(duì)照。在老葉的首峰 (9:00) 時(shí)，只有-B 處理的Gs值顯著低于對(duì)照。

新葉中Gs日均值在-Fe 和-Zn 處理時(shí)與對(duì)照相比顯著下降，下降幅度為29.9%和21.7%；在老葉中-Fe 和-Zn 處理表現(xiàn)為顯著上升，但在-B 處理時(shí)表現(xiàn)為顯著下降，下降幅度達(dá)59.6%(表2)。

3 討論

3.1 柑橘微量元素缺乏的癥狀

柑橘微量元素缺乏通常發(fā)生在新開墾或高地下水位或高度沙化或鈣化的柑橘園[6-7]。Fe 作為葉綠素合成中酶或輔酶的活化劑直接參與葉綠素的形成，因此-Fe 最典型的癥狀就是新葉的退綠[20]。本研究的結(jié)果表明，-Fe 處理6 個(gè)月后紐荷爾臍橙初級(jí)新葉先顯癥狀，葉片呈黃綠色，葉脈保持綠色，呈細(xì)網(wǎng)狀葉脈；10 個(gè)月后次級(jí)新葉完全失綠呈白色或淡黃色，葉脈也呈白色 (圖1)。這與前人在枳、香橙、紅桔等柑橘類果樹中的報(bào)道相似[8,21]，但本研究的結(jié)果能清晰明確地看到不同級(jí)別新葉的缺Fe 癥狀及差異(圖1)。Mn 雖然不直接參與葉綠素的合成，但是對(duì)維護(hù)葉綠體膜結(jié)構(gòu)起著至關(guān)重要的作用[22]，因此缺Mn 柑橘葉片會(huì)在幼葉出現(xiàn)脈間失綠的癥狀，但在田間通常出現(xiàn)癥狀較晚且容易被缺Fe 或缺Zn 的癥狀所掩蓋[7]。本研究通過砂培盆栽試驗(yàn)，明確地觀察到了這一癥狀，且進(jìn)一步獲得缺Mn 嚴(yán)重時(shí)的癥狀，即次級(jí)新葉呈黃色或灰白色，葉脈間現(xiàn)不透明褐色斑點(diǎn) (圖1)。

關(guān)于柑橘缺B 的研究較多且典型癥狀穩(wěn)定，主要表現(xiàn)為葉脈的爆裂和生長(zhǎng)點(diǎn)的壞死 (植株低矮)[19,21]，但本研究除觀察到上述癥狀外，還獲得了初級(jí)新葉葉片顯著增厚變硬、初級(jí)新梢莖尖新芽簇生但均不能抽生次級(jí)新梢的癥狀 (圖1)，類似癥狀在其他植物中也有報(bào)道，但在柑橘中則鮮有報(bào)道。Zn 是植物體內(nèi)許多酶的組成成分和活化劑，并能有效的促進(jìn)光合作用。柑橘缺Zn 在田間通常表現(xiàn)為斑駁失綠(mottle-leaf)[7]。柑橘缺Zn 的典型癥狀是除斑駁黃化外，還有葉小而簇生呈蓮叢狀 (rosette)、節(jié)間縮短、植株矮??；如有結(jié)果則果實(shí)小而畸形，果皮厚，果肉木質(zhì)化[22-23]。本研究在紐荷爾臍橙-Zn 處理6 個(gè)月時(shí)初級(jí)新葉便呈現(xiàn)典型的斑駁黃化，在10 個(gè)月后，則觀察到新葉簇生、葉片嚴(yán)重變窄變小，有的葉片甚至出現(xiàn)畸形癥狀 (圖1)。柑橘缺Cu 初期癥狀表現(xiàn)為葉片大、深綠色，有的葉形不規(guī)則，主脈彎曲，腋芽易枯死[24-25]。本研究發(fā)現(xiàn)紐荷爾臍橙缺Cu 6 個(gè)月后，初級(jí)新葉先顯輕微癥狀，葉色深綠，葉面凹凸不平；缺Cu 10 個(gè)月后次級(jí)新葉葉脈彎曲成弓狀，葉色變淡，枝條細(xì)長(zhǎng)而柔軟，扭曲下垂，頂端易枯死 (圖1)，這與前人的研究基本一致。

3.2 柑橘微量元素缺乏與光合特性的關(guān)系

微量元素缺乏影響柑橘葉綠素合成的同時(shí)對(duì)葉片光合作用也有顯著影響。柑橘為C4植物，因此通常情況下柑橘的Pn日變化呈雙峰曲線，但受品種、砧木和外界環(huán)境條件的影響。如琯溪蜜柚凈光合速率 (Pn) 的日變化的首峰出現(xiàn)在上午的8:00—10:00時(shí)，次峰出現(xiàn)在14:00 時(shí)以后，而在溫州蜜柑中首峰出現(xiàn)在上午10:00 時(shí)，次峰出現(xiàn)在13:00 時(shí)以后[26-27]，且陰天時(shí)次峰會(huì)消失。作為紐荷爾臍橙優(yōu)良芽變的桂臍一號(hào)，在嫁接不同砧木時(shí)其Pn日變化呈現(xiàn)為單峰、雙峰甚至多峰現(xiàn)象[28]。本研究結(jié)果表明Pn日變化在對(duì)照的新葉和老葉中均呈單峰曲線，峰值出現(xiàn)在上午9:00 時(shí)，但是微量元素缺乏處理后，如-B 處理顯著改變了老葉的Pn日變化趨勢(shì)，另外-Zn 處理推遲了峰值出現(xiàn)的時(shí)間(圖4)。徐春麗等[29]通過砂培進(jìn)行缺Zn 試驗(yàn)，同樣表明在缺Zn 脅迫條件下“不知火”葉片的凈光合速率 (Pn) 日變化呈單峰曲線，對(duì)照則為雙峰曲線。因此，微量元素缺乏可以改變柑橘的Pn日變化的趨勢(shì)。

許多研究表明微量元素能夠直接或間接影響植物的光合特性[30]。凌麗俐等[31]研究表明，早期的缺Zn 和潛在的缺Zn(低Zn) 會(huì)明顯降低柑橘的光合效率。另外徐春麗等[29]報(bào)道缺Zn 降低了柑橘葉片葉綠素、Pn、Tr和Gs。本試驗(yàn)結(jié)果同樣表明，紐荷爾臍橙幼苗在缺Zn 條件下其葉片凈光合速率、蒸騰速率和氣孔導(dǎo)度在新葉中受到顯著抑制 (圖4～圖7，表2)。雖然B 不直接參與植物的光合作用，但是在缺B 條件下甜橙會(huì)在葉片中積累大量非結(jié)構(gòu)物質(zhì)的CO2，從而反饋抑制葉片的光合作用[32]。

4 結(jié)論

紐荷爾臍橙微量元素缺乏前期和后期的癥狀有較大差異。缺Fe 前期初級(jí)新葉呈黃綠色，后期次級(jí)新葉完全失綠呈白色或淡黃色，葉脈也呈白色；缺Mn前期初級(jí)新葉脈間現(xiàn)不規(guī)則淺色條帶，后期次級(jí)新葉呈黃色或灰白色，葉脈間現(xiàn)不透明褐色斑點(diǎn)；缺B 前期老葉葉脈輕微突起，后期老葉葉脈嚴(yán)重爆裂同時(shí)伴有脈間輕微黃化，初級(jí)新葉顯著增厚變硬，初級(jí)新梢莖尖新芽簇生；缺Zn 前期初級(jí)新葉斑駁黃化，后期次級(jí)新葉簇生、葉片嚴(yán)重變窄變??；缺Cu 前期初級(jí)新葉葉面凹凸不平，后期次級(jí)新葉葉脈彎曲成弓狀，葉色變淡，枝條細(xì)長(zhǎng)而柔軟，扭曲下垂，頂端易枯死。葉片光合特性研究表明，-Fe、-Mn 和-Zn 處理的新葉和-B 處理的老葉有顯著的峰值和變化趨勢(shì)特征，而-Cu 處理的無顯著特征。