法醫(yī)DNA實驗室的污染和防范

蔣正艷

宿遷子淵司法鑒定所，江蘇 宿遷 223800

一、前言

醫(yī)學(xué)的不斷進步在各個領(lǐng)域衍生出高技術(shù)手段，其中，DNA檢測技術(shù)在刑偵案件中得到廣泛的應(yīng)用，法醫(yī)通過靈敏高效的檢測儀器對案發(fā)現(xiàn)場物證進行正確的DNA提取檢測與比對，使得公安機關(guān)對案件偵破的效率得到極大提高，然而，法醫(yī)DNA實驗室的污染將直接影響檢測結(jié)果的可靠性，因此，及時排查樣本污染原因，試驗誤差因素，并提出行之有效的解決方案同時建立健全實驗室監(jiān)管制度對于提升法醫(yī)工作效率，有重要意義。

二、污染因素

(一)取證污染

一方面，在案件發(fā)生現(xiàn)場往往人員嘈雜，實時物證極易受到破壞，產(chǎn)生外源污染物，這些外援污染物通常指人類或其他生物體DNA物質(zhì)，法醫(yī)在現(xiàn)場進行物證提取時，如果在樣本中混入這些污染物，必然會導(dǎo)致試驗誤差變大，另一方面，法醫(yī)個人技術(shù)水平的不足或操作失誤在物證提取過程中帶入不相關(guān)污染源，也會對試驗造成不良影響。

(二)試驗過程污染

醫(yī)學(xué)試驗對人員素質(zhì)試驗環(huán)境要求較高，在試驗過程中有可能因為人員操作不當(dāng)或操作環(huán)境不良導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)較大偏差。第一，操作過程中技術(shù)人員可能會因疏忽大意等原因?qū)⒆陨鞤NA或其他樣品DNA帶入，造成交叉污染。第二，實驗室設(shè)備管理不當(dāng)，實驗設(shè)計出現(xiàn)問題也會導(dǎo)致試驗誤差變大，試驗器材維護缺乏使微生物集聚于器皿表面以及試驗試劑保存不良對實驗精度皆有直接影響。

(三)PCR污染

PCR是指聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在法醫(yī)DNA實驗室中，擴增產(chǎn)物的污染是最常見最主要的PCR污染問題。氣溶膠污染是最可能造成PCR污染的形式，氣溶膠在實驗過程中極其產(chǎn)生，而且可以大量容納污染DNA拷貝，嚴(yán)重影響DNA實驗精度。

三、預(yù)防污染

(一)實驗室管理

首先實驗室要規(guī)范授權(quán)制度，每個人身上都帶有DNA物質(zhì)，為了防止外源DNA污染實驗室環(huán)境，實驗室必須設(shè)立門禁系統(tǒng)，只有具備操作資格且擁有身份認證卡的人員才能進入試驗區(qū)域。進入試驗區(qū)時必行進行正確的防護服穿戴與消毒操作；第二，應(yīng)當(dāng)合理隔離DNA實驗室各個功能區(qū)，尤其是樣本儲存區(qū)不應(yīng)與試驗區(qū)過近，實驗室各個分區(qū)的通風(fēng)通電通水等設(shè)施不能共用以防交叉污染；第三，實驗室硬件設(shè)施包括試劑，必須妥善保管維護與保存，具體工作應(yīng)當(dāng)由專門人員進行操作，操作前必須接受嚴(yán)格培訓(xùn)，達標(biāo)后方能上崗；第四，每次實驗任務(wù)之后要對現(xiàn)場進行仔細清理消毒，重復(fù)使用儀器必須特殊處理以防止物證DNA交叉污染，微生物滋生等問題，對于容易殘留DNA的區(qū)域，應(yīng)當(dāng)用化學(xué)試劑反復(fù)處理，并進行紫外線消毒操作。實際當(dāng)中實驗室清潔工作的好壞直接決定了DNA污染發(fā)生的概率。主要是因為與物證直接接觸并重復(fù)使用的實驗物品之間極易產(chǎn)生交叉污染，DNA會以這些物件作為載體跨區(qū)轉(zhuǎn)移。

(二)提高技術(shù)人員水平

人為因素始終占據(jù)主導(dǎo)地位，要想做好法醫(yī)DNA實驗室污染防治的工作，技術(shù)人員必須提升自我綜合技術(shù)水平。1.技術(shù)人員在進行DNA檢測操作時應(yīng)當(dāng)始終保持專注，無論什么時候都應(yīng)當(dāng)謹記操作規(guī)范，將防止污染時刻擺在第一位，即使在條件較好的實驗室，也不能在相同時刻進行物證提取，DNA比對等操作，每次試驗后需要處理剩余材料時都要將不同樣本源的材料分開擺放，每次在進行不同的操作步驟時都要更換手套，尤其是需要直接接觸物證的操作切記不可重復(fù)使用。2.在進行DNA擴增，產(chǎn)物檢測操作時一定要注意避免PCR污染，進行擴增過程時，要防止加錯樣品混淆樣品。試驗過程中用到的物品盡量不要跨區(qū)帶入以防止交叉污染。3.法醫(yī)DNA實驗室所使用的試劑及消耗品的質(zhì)量一定要得到保證，技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)定期進行檢查，一旦發(fā)現(xiàn)不合格的產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)立即更換。技術(shù)人員的操作能力在很大程度上決定了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此建立健全對技術(shù)人員的能力考核制度，考核方法，培訓(xùn)制度非常重要。相關(guān)部門應(yīng)當(dāng)定期對技術(shù)人員進行技能測試，可以包括理論層面與操作層面，理論層面通過筆試以及面試的方式對其工作能力進行全面考查，出題內(nèi)容應(yīng)當(dāng)涵蓋DNA實驗室防止污染措施，物證提取方法，實驗過程注意事項等內(nèi)容，以卷面分數(shù)對參加考試人員進行排名，排名靠后著必須給予專業(yè)指導(dǎo)與培訓(xùn)。在實際操作層面，采用模擬實驗對技術(shù)人員進行能力測試，成績不合格者必須進行專業(yè)機構(gòu)再培訓(xùn)，只有這樣才從最大程度上避免由主觀因素引起的DNA實驗室污染事件發(fā)生。

(三)及時糾正錯誤

DNA鑒定質(zhì)量的好壞，對案件偵破的實用價值直接受到DNA污染程度的影響，結(jié)論的錯誤后果嚴(yán)重，甚至導(dǎo)致錯案發(fā)生。在實際工作中DNA實驗室的污染問題或多或少都會存在，因此它是不可能完全避免的，因此技術(shù)人員在盡量做到避免人為因素造成DNA污染的情況下也要具備及時發(fā)現(xiàn)錯誤并及時糾正錯誤的能力。在實際操作中實驗人員一旦發(fā)現(xiàn)存在DNA污染問題，就要立刻進行污染源排查工作，結(jié)合實際情況分析污染原因，提出切實有效的解決方案。同時，為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須對相同時期獲取的數(shù)據(jù)進行反復(fù)核對，做到不遺漏任何污染源。技術(shù)人員在進行污染因素排查時，應(yīng)當(dāng)根據(jù)DNA實際情況設(shè)計出合理的比對實驗，對實驗過程中的每個環(huán)節(jié)進行逐一測試。在發(fā)現(xiàn)問題之后，要進行以下操作：1.對于造成污染的實驗品或存在已污染物證必須處理后丟棄；2.如果發(fā)現(xiàn)存在試劑原因，應(yīng)當(dāng)在核查無誤后丟棄處理，并對實驗用到的試劑進行重新配置或購買；3.對于污染發(fā)生的工作區(qū)，一定要進行仔細清理工作臺面，并對實驗器材，儀器進行反復(fù)消毒處理，以確保二次實驗的安全性；4.當(dāng)污染源檢測出現(xiàn)困難以致于無法做出正確判斷時，應(yīng)當(dāng)停止實驗，正確保存剩余物證資料，將實際情況上報領(lǐng)導(dǎo)，組織開展工作技術(shù)會議，進行技術(shù)討論以確保結(jié)論的準(zhǔn)確性；5.DNA實驗室極易發(fā)生PCR污染，而且PCR污染很難清除，在實際實驗過程中，技術(shù)人員在發(fā)生PCR污染后往往不能準(zhǔn)確判斷導(dǎo)致原因，進而使工作進度受到影響，面對這種情況，法醫(yī)DNA實驗室應(yīng)當(dāng)健全備份制度，在實驗室出現(xiàn)難以排查的DNA污染問題時，為了使得案件偵查工作正常進行，在必要時候選擇備份實驗室進行操作，以配合刑偵部門工作。

四、結(jié)論

法醫(yī)DNA實驗室污染是產(chǎn)生DNA檢測結(jié)果發(fā)生錯誤的主要因素，包括了主觀因素和客觀因素，技術(shù)人員在實際工作當(dāng)中要積極探討尋求避免這種情況發(fā)生的合理方案。實際上，物證DNA污染發(fā)生的環(huán)節(jié)有很多種，既可能是DNA實驗室實驗過程也可能是法醫(yī)在現(xiàn)場進行物證提取的過程，甚至存在人為破壞因素，現(xiàn)代刑偵案件的偵破過程充滿了各種高技術(shù)手段，DNA檢測在其中起到了最為關(guān)鍵的作用，因此，對于廣大法醫(yī)工作者來說探究如何防止DNA污染提高DNA檢測準(zhǔn)確率提升物證價值，以配合公安機關(guān)順利破案，維護社會和諧，有重要意義，相關(guān)技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)對此抱以足夠重視的心態(tài)，高質(zhì)量完成工作。