ＨＰＬＣ法同時(shí)測(cè)定陳香露白露片中的６種成分

高宇明 袁文洪 謝艷

【摘 要】 目的：建立高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定陳香露白露片（陳皮、川木香、石菖蒲等）中新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯的含有量。方法：該藥物50%乙醇提取后，采用Luna C18色譜柱（250 mm×4.60 mm，5μm）;流動(dòng)相甲醇-水，梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;流量1.0 mL/min;柱溫30℃。結(jié)果：6種成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.999 0），平均加樣回收率102.27%、100.35%、101.20%、102.22%、102.68%、101.40%，RSD1.86%、3.89%、2.78%、2.57%、2.89%、2.38%。結(jié)論：該方法靈敏、可靠、準(zhǔn)確，可用于陳香露白露片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 陳香露白露片;HPLC;化學(xué)成分

【中圖分類號(hào)】R284.1 ??【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ???【文章編號(hào)】1007-8517（2019）18-0046-04

Abstract：Objective To establish a HPLC method for the simultaneous content determination of Hesperidin、Neohesperidin、β-Asarone、α-Asarone、Nobiletin and Costunolide in ChenxiangLubailu tablet。Methods The analysis of 50% ethanol extract of ChenxiangLubailu tablet was performed on a 30℃ thermostatic Luna C18 column（250×4.60 mm，5 μm），with the mobile phase comprising of methanol-water flowing at 1.0mL/min in a gradient elution manner. Results Six constituents showed good linear relationships within their own ranges（r>0.9990），whose average recoveries were 102.27%、100.35%、101.20%、102.22%、102.68%、101.40%，with the RSDs of 1.86%、3.89%、2.78%、2.57%、2.89%、2.38% . Conclusion This sensitive，teliable and accurate mehtod can be used for the quality control of ChenxiangLubailu tablet.

Keywords：ChenxiangLubailu tablet;HPLC;chemical constituents

陳香露白露片處方由甘草、次硝酸鉍、陳皮、碳酸鎂、川木香、氧化、大黃、碳酸氫鈉、石菖蒲等九味藥組成，具有健胃和中，理氣止痛的功效，臨床常用于胃潰瘍，糜爛性胃炎，胃酸過(guò)多，急性、慢性胃炎，腸胃神經(jīng)官能癥和十二指腸炎等。目前全國(guó)有96家藥品生產(chǎn)企業(yè)取得了陳香露白露片的藥品生產(chǎn)批件。其中執(zhí)行的藥品標(biāo)準(zhǔn)以《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第八冊(cè)（WS3-B-1553-93）為主。另有部分企業(yè)增加薄膜衣規(guī)格后申報(bào)了新的藥品標(biāo)準(zhǔn)，但涉及檢驗(yàn)部分內(nèi)容均較原《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》無(wú)實(shí)質(zhì)區(qū)別。檢驗(yàn)項(xiàng)目為性狀、鈉鹽鑒別、檢查（片重、微生物限度、崩解時(shí)限）、次硝酸鉍含量測(cè)定，缺少對(duì)藥材的含量檢測(cè)。

目前，有多種方法用于檢測(cè)處方中各藥材的有效成分，如楊秀梅等用高效液相色譜法測(cè)定陳皮中的橙皮苷、川陳皮素、桔皮素的含量[1];劉香南等用高效液相色譜法測(cè)定甘草中甘草苷、異甘草苷、甘草次酸、甘草素、異甘草素、甘草查爾酮A的含量[2]。直接測(cè)定陳香露白露片中藥味功效成分的報(bào)道較少，有李應(yīng)芬等用高效液相色譜法測(cè)定陳香露白露片中甘草酸的含量[3]，柳夢(mèng)婷等用高效液相色譜法檢測(cè)石菖蒲中α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚的含量[4]。但未見(jiàn)有同時(shí)測(cè)定陳香露白露片中各藥味有效成分的報(bào)道，無(wú)法對(duì)藥品的質(zhì)量進(jìn)行較好的控制。因此，實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定處陳皮、川木香、石菖蒲的主要有效成分，以考察藥品質(zhì)量。陳皮中的主要有效成分為揮發(fā)油和黃酮類，其中橙皮苷、新橙皮苷、川陳皮素在陳皮中含量較高，活性也比較強(qiáng)。川木香的主要活性成分為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯。石菖蒲主要有效成分為揮發(fā)油，包括α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、甲基丁香酚等，其中α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚含量較高。故本實(shí)驗(yàn)選取其中的新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定，較具有代表性和可操作性。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AT液相色譜儀（含SPD-20A檢測(cè)器）;XSE205DU型電子分析天平（梅特勒托利多公司）;SB25-12D型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 材料 從市場(chǎng)上抽取的陳香露白露片，產(chǎn)自全國(guó)6家生產(chǎn)企業(yè)的，共計(jì)6批次，詳見(jiàn)表1。新橙皮苷（批號(hào)：111857-201101）、橙皮苷（批號(hào)：110721-201617）、α-細(xì)辛醚（批號(hào)：100298-201203）、β-細(xì)辛醚（批號(hào)：112018-201601）、木香烴內(nèi)酯（批號(hào)：111524-201710）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，川陳皮素對(duì)照品（批號(hào)：ST00691020MG，上海詩(shī)丹德生物技術(shù)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的制備 取對(duì)照品新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯適量，精密稱定，加50^%乙醇制成濃度分別為，24.778、16.322、5.574、5.226、9.582、6.359 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制的制備 取研細(xì)的陳香露白露片粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加50%乙醇適量，超聲（40KHz，500W）提取30min，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液

2.2 色譜條件 Luna C18色譜柱（250mm×4.60mm，5μm;流動(dòng)相甲醇-水，梯度洗脫（0～10 min，55%～55%;10～60 min，55%～95%;60～65 min，95%～95%）;檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm;流量1.0 mL/min;進(jìn)樣量40μL;柱溫30℃。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，加50%乙醇溶液稀釋制備成6個(gè)濃度的系列混合對(duì)照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的條件進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表2，表明各成分在各自的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其RSD分別為1.25%、1.66%、1.39%、1.08%、1.43%、0.95%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的陳香露白露片粉末（過(guò)三號(hào)篩），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。于制備后0、2、4、8、16、32 h在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD分別為2.08%、 1.65%、 2.32%、 2.20%、2.88%、1.54%。表明供試品溶液在32 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取研細(xì)的陳香露白露片粉末（過(guò)三號(hào)篩），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得其RSD分別為0.99%、1.85%、1.52%、1.78%、2.85%、2.12%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的陳香露白露片粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2g，精密稱定，分別精密加入“2.1.1”項(xiàng)下各單一對(duì)照品適量后，按按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法分別計(jì)算各成分的量，計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.8 樣品含有量測(cè)定 取4批陳香露白露片供試品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液各2份，在“2.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算6中成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 分析與討論

3.1 目標(biāo)成分選擇 實(shí)驗(yàn)最初選擇了陳皮、甘草、大黃、川芎、石菖蒲六味藥材中的新橙皮苷、橙皮苷、甘草苷、甘草素、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、橘皮素、木香烴內(nèi)酯、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、甘草次酸等十五種有效成分進(jìn)行含量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)部分成分存在與處方組成中其他組分分離度太低、在254 nm下無(wú)吸收，或者在200多批次陳香露白露片中基本無(wú)檢出，沒(méi)有實(shí)際意義。經(jīng)過(guò)反復(fù)考察和篩選以后，選取了陳皮、川木香、石菖蒲中的新橙皮苷、橙皮苷、α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、川陳皮素、木香烴內(nèi)酯進(jìn)行含量測(cè)定方法建立。

3.2 波長(zhǎng)選擇 經(jīng)紫外光譜掃描，6中成分在225、249、254等處均有較強(qiáng)吸收。且254 nm下各成分峰形、分離度較高，檢出強(qiáng)度適中，故選擇254 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 指標(biāo)成分分析 所檢測(cè)的6個(gè)廠家6批次陳香露白露片中，除橙皮苷外，其余五個(gè)成分均有不同程度的未檢出。其中細(xì)辛的指標(biāo)成分細(xì)辛醚檢出率較低，川木香的指標(biāo)成分木香烴內(nèi)酯次之。表明不同廠家之間陳香露白露片的質(zhì)量差異較大。

綜上所述，所建立的高效液相色譜方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可在較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)陳香露白露片中6中成分含量的同時(shí)測(cè)定。因此，該方法可用于陳香露白露片的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。

參考文獻(xiàn)

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[2]劉香南，李明珠，尚曉娜，等.“一測(cè)多評(píng)”法測(cè)定甘草中6種有效成分含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（24）：56-59.

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（收稿日期：2019-07-08 編輯：劉斌）文獻(xiàn)綜述