奶粉中沙門氏菌檢測能力驗證分析

摘 要： 文章結合驗證奶粉中沙門氏菌檢測能力項目進行研究，項目驗證時遵循GB4789.4-2016標準及方法，選擇2份奶粉驗證，展開分離、生化鑒定、血清法鑒定一系列工作，采用VIDAS初篩，判別樣品情況以后展開鑒定，保證生化結果一樣。本次能力驗證得到2個盲樣，分別為18-W430和18-Q018，前者檢驗出沙門氏菌，后者未檢驗出沙門氏菌，與指定值相一致，檢驗能力通過驗證。

關鍵詞： 奶粉;沙門氏菌檢;檢測能力;驗證

一、 引言

奶粉是常見的食品種類之一，需要進行奶粉病菌檢測。沙門氏菌為檢測的重要病菌之一，在檢測過程中，必須嚴格按照相關要求做好樣品的檢測檢驗工作?；诖耍恼轮饕訡NCA組織的某檢驗項目為例，針對奶粉中沙門氏菌檢測能力驗證進行探究。

二、測試項目

該檢驗項目由CNCA組織，中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心負責實施，主要驗證奶粉中沙門氏菌檢測能力。項目發(fā)送2個樣品，沙門氏菌檢測項目的檢驗樣品為W編號及Q編號。實驗室檢測人員收到樣品后需要立即展開檢測。樣品呈現(xiàn)出白色凍干塊狀，存在一定的人工污染，采用真空西林瓶存儲，檢測人員收到樣品后要立即檢測包裝狀態(tài)，登錄平臺確認，后續(xù)通過網(wǎng)絡提交檢驗結果。

三、 材料及方法

（一）檢測材料

一是檢測樣品來源，由中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心提供本次檢測的樣品，編號為18-W430和 18-Q018。二是培養(yǎng)基和試劑材料，本次驗證采用的培養(yǎng)基包括BPW、SC、TTB、BS、XLD等，準備生活鑒定試劑盒及沙門氏菌檢測試劑盒。

（二）檢驗方法

1. 樣品處理

檢測人員收到西林瓶包裝的樣品，摻入100mL的稀釋液，實現(xiàn)對樣品的水化處理，樣品處理操作步驟如下：首先采用4mL稀釋液完成水化，等待一段時間后，凍干粉會充分溶解在稀釋液內(nèi)，這時候需要借助無菌吸管轉(zhuǎn)移溶液，將所有溶液轉(zhuǎn)至無菌瓶內(nèi)，剩余稀釋液負責清洗西林瓶的內(nèi)壁，反復清洗后可以回收所有清洗液，這樣就得到了待測樣品原液，即為100mL待測乳品樣品，完成對樣品的處理。

2. 檢驗過程

一是沙門氏菌預增菌及增菌。將25mL樣品轉(zhuǎn)至緩沖蛋白胨水，恒溫培養(yǎng)8～18h，重復上述步驟，完成預增菌和增菌處理，放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)培養(yǎng)18～24h。二是沙門氏菌快速篩選，本次選擇全自動酶聯(lián)免疫分析儀，取出增菌液樣品，放入無菌試管內(nèi)，將試管放入沸水中，持續(xù)加熱15min，可以達到滅活的目的。滅活結束后取出500mL增菌液，放入試劑條測試孔內(nèi)，采用分析儀器監(jiān)測，等待45min就可以得到結果。三是選擇性分離，在增菌液中取出1環(huán)菌液，接種到準備好的培養(yǎng)基平板上，采取恒溫培養(yǎng)的方式，溫度控制在36℃±1℃左右，持續(xù)培養(yǎng)40～48h，記錄菌落生長情況。四是生化鑒定試驗，將平板上的菌落挑下，放入瓊脂平板上，持續(xù)培養(yǎng)24h，為了保證鑒定結果的準確性，同時還使用試劑盒和鑒定一起，在使用鑒定盒時，要注意按照說明書要求操作，挑選單個純菌落，接種到生化管內(nèi)，同時還要選擇一些菌落放入生理驗收，得到均勻的菌懸液，嚴格按照說明書要求操作，添加到生化反應孔內(nèi)，將盒蓋蓋上，放入恒溫環(huán)境下培養(yǎng)，如果24h以后仍然陰性，可以延長培養(yǎng)時間至48h。五是血清學鑒定，先在分離區(qū)域滴加生理鹽水，將菌落放在撥片上，搖勻后可以滴入多家菌體抗血清，為了達到對照效果，另一組滴入生理鹽水，搖動撥片對結果進行觀察。

3. 注意事項

檢測過程中應注意以下事項：一是去除樣品后要等待一段時間，在樣品溫度達到室內(nèi)溫度以后，才能開啟樣品。二是從樣品開啟到檢測結果的整個過程，都要遵循無菌操作原則。三是樣品呈現(xiàn)出凍干塊狀，屬于一個整體，要將整個樣品用于驗證，不能取出其中的一部分展開測試。

四、 檢驗結果與分析

檢驗結果如下：一是VIDAS初篩結果，奶粉樣品增菌液滅活后利用分析儀展開初篩，發(fā)現(xiàn)兩個樣品篩查結果不一致，其中18-Q018檢測為陰性，而18-W430檢測為陽性。

二是選擇性平板分離結果，本次將增菌液劃入多個平板，實現(xiàn)分離培養(yǎng)，其中18-Q018在BS平板上呈現(xiàn)為黑色帶金屬光澤菌落，周邊培養(yǎng)基沒有出現(xiàn)變化;18-Q018在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板上呈現(xiàn)為藍綠色菌落;在HE平板上呈現(xiàn)為淺棕色菌落;在XLD平板上顯示為黃色及粉紅色菌落，并且菌落邊緣存在不規(guī)則的狀態(tài)。18-W430則有所不同，在BS平板上呈現(xiàn)為灰綠色菌落、黑色帶金屬光澤菌落及綠色菌落;在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板顯示為紫紅色菌落及藍綠色菌落;在HE平板上呈現(xiàn)為藍綠色菌落、橘色菌種;在BS平板上呈現(xiàn)為黃色菌落、粉紅色菌落。

三是生化鑒定結果。18-Q018在平板上沒有出現(xiàn)典型菌落，這與初篩結果相吻合，接下來展開對18-Q018的生化鑒定，挑選BS平板及XLD平板上的菌落，分別編號處理展開鑒定，具體編號為18-Q018-1、18-Q018-2、18-Q018-3。18-W430存在典型菌落，這與初篩結果相吻合，為此挑選沙門氏菌顯示培養(yǎng)基及BS平板上的菌落，編號后展開生化鑒定，具體編號為18-W430-1、18-W430-2、18-W430-3。其中18-Q018-1采用生化試劑盒鑒定，18-Q018-2選擇全自動檢定儀鑒定，前者鑒定為非沙門氏菌，后者鑒定為大腸桿菌，18-Q018-3鑒定為費沙門氏菌，完全符合初篩結果，可以得出鑒定結果：18-Q018沒有檢驗出沙門氏菌。18-W430-1、18-W430-2、18-W430-3也展開生化鑒定，全部鑒定為沙門氏菌陽性，這也表明18-W430鑒定存在沙門氏菌。

四是血清學鑒定結果。結合上述鑒定結果，確定18-W430為沙門氏菌陽性，為了進一步確認檢驗結果，展開了血清學確認，挑選瓊脂培養(yǎng)物展開鑒定，鑒定結果見表1?？梢钥闯?，血清學鑒定結果與生化鑒定結果相一致。

五、 結語

本次檢驗的18-Q018樣品初篩結果為沙門氏菌陰性，后續(xù)檢測過程中只分離出大腸桿菌。18-W430分離沙門氏菌菌群以后還存在一些其他的菌落，在條件允許的情況，可以持續(xù)分離菌種，一方面可以更了解牛奶樣品的污染情況，另一方面可以提高檢測能力。實驗室通過參加能力驗證活動，可以持續(xù)提高檢驗水平，達到國家要求的檢驗標準。

參考文獻：

[1]游元丁，趙陽，徐孟懷，等.奶粉中沙門氏菌檢測能力驗證分析[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2019，47（5）：201-203.

作者簡介：? 張婕，江蘇華測品標檢測認證技術有限公司。