不同廠家雷公藤多苷片的紫外譜學(xué)特征研究

王秀文，顧金瑞

（山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西晉中030619）

雷公藤系衛(wèi)矛科（Celastr aceae）雷公藤屬植物雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）多年生藤本植物，其有效成分主要為二萜、三萜、生物堿等［1］。雷公藤多苷片是雷公藤干燥后去皮根經(jīng)提取、純化后得到的有效組分，對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮膚病、自身免疫性肝炎等具有顯著療效［2］。目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)銷(xiāo)售的雷公藤制劑主要為雷公藤片和雷公藤多苷片，雷公藤多苷片具有用量小、不良反應(yīng)少的優(yōu)點(diǎn)，得到了較廣泛的應(yīng)用［2］。近年來(lái)，已有不少學(xué)者對(duì)雷公藤制劑的質(zhì)量進(jìn)行了研究［3-7］，大多是通過(guò)高效液相色譜法來(lái)測(cè)定雷公藤制劑中的有效成分，但這種方法成本較高，操作也相對(duì)復(fù)雜。而紫外分光光度法和傅立葉紅外光譜法具有成本較低、操作簡(jiǎn)單和分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用可以快速提取有效成分的超聲波提取法提取雷公藤多苷片中的有效成分，使用紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)雷公藤多苷片進(jìn)行紫外圖譜掃描，并輔以紅外光譜法，分析不同廠家不同批號(hào)雷公藤多苷片的質(zhì)量，以期為雷公藤多苷片質(zhì)量的快速鑒定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

TU-1810紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），F(xiàn)A224電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），SB-5200DTDN超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），Nicolet系列傅立葉變換紅外光譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），壓片機(jī)（天津市瑞來(lái)特儀器有限公司）。

1.2 試 藥

95%乙醇、三氯甲烷均為分析純（天津市凱通化學(xué)試劑有限公司），石油醚（分析純，沸程60～90°C，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司），高純水（市售娃哈哈純凈水），溴化鉀（光譜純，上海榕柏生物技術(shù)有限公司）；8批雷公藤多苷片藥品均購(gòu)自山西太原和晉中榆次各大藥店。

表1 雷公藤多苷片樣品來(lái)源

2 方法

2.1 紫外吸收光譜供試品的制備

分別取8批雷公藤多苷片每批各4片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，將粉末置于50 mL具塞三角瓶中，加入20 mL溶劑，精密稱(chēng)重；超聲30 min后，冷卻至室溫，稱(chēng)重，并用提取溶劑補(bǔ)足損失重量。濾取上清液，洗滌濾紙上的樣品殘?jiān)⑥D(zhuǎn)移至50 mL具塞三角瓶中，繼續(xù)用提取溶劑超聲提取2次，合并濾液，作為供試品溶液。

2.2 紫外吸收光譜圖的繪制

以高純水為參比溶液，測(cè)出以水為提取溶劑時(shí)8批雷公藤多苷片供試品溶液的紫外吸收光譜圖。再分別以95%乙醇、氯仿和石油醚為參比溶液，同法測(cè)出各批號(hào)樣品的紫外吸收光譜圖。掃描波長(zhǎng)范圍為200～800 nm，取樣間隔為0.1 nm，掃描速率為中速。

2.3 紅外吸收光譜供試品的制備

取以水和石油醚為提取溶劑時(shí)的雷公藤多苷片殘?jiān)m量，研成粉末，將樣品與溴化鉀按1∶100的比例研磨均勻，取混合物適量壓片。

2.4 紅外吸收光譜圖的繪制

以溴化鉀為背景，將壓好的片放入紅外光譜儀掃描。光譜分辨率4 cm-1，測(cè)定范圍4000～500 cm-1，每個(gè)樣品累計(jì)掃描20次，自動(dòng)大氣背景扣除。

3 結(jié) 果

3.1 4種溶劑提取的雷公藤多苷片紫外譜線組數(shù)據(jù)

4種不同溶劑提取的雷公藤多苷片紫外譜線組數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。由表2可以看出，4種溶劑提取的8批雷公藤多苷片紫外譜圖吸收峰數(shù)目均只有1個(gè)，但最大吸收波長(zhǎng)及最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度均有差異。選擇不同溶劑為提取液時(shí)，供試品溶液的吸光度值不同，說(shuō)明雷公藤多苷片中的有效成分在不同溶劑中有不同的溶解度。

表2 4種溶劑提取的雷公藤多苷片紫外譜線組數(shù)據(jù)

A、B 2個(gè)廠家各3個(gè)批號(hào)的樣品，經(jīng)4種溶劑提取后，吸光度值比較穩(wěn)定；而C廠家2批樣品，經(jīng)4種溶劑提取后，吸光度值差別較大。綜上可知，A和B兩個(gè)廠家生產(chǎn)的雷公藤多苷片成分含量高且相近，產(chǎn)品成分含量比較穩(wěn)定，C廠家生產(chǎn)的雷公藤多苷片成分含量低且質(zhì)量不穩(wěn)定。

3.2 不同廠家樣品在不同提取溶劑下的吸光度平均值

結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同廠家樣品在不同提取溶劑下的吸光度平均值（λma）x

由表3可以看出，4種不同溶劑提取的8批雷公藤多苷片中，A廠家的3批樣品和B廠家的3批樣品平均吸光度值比較接近，而C廠家的吸光度值普遍偏小。

3.3 8批樣品石油醚和水提取殘?jiān)t外光譜圖

由表2可以看出，以95%乙醇和氯仿為提取溶劑時(shí)，A廠家與B廠家所生產(chǎn)的雷公藤多苷片供試品在最大吸收波長(zhǎng)處吸光度值較大，說(shuō)明其成分含量高；而以水和石油醚為提取溶劑時(shí)，吸光度值均偏小。產(chǎn)生上述現(xiàn)象的原因可能是雷公藤多苷片中的有效成分易溶于95%乙醇和氯仿，而不易溶于水和石油醚。

在試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以水和石油醚為提取溶劑時(shí)，樣品出現(xiàn)了明顯不溶解現(xiàn)象，提取后過(guò)濾速度非常緩慢，且濾紙上殘留粉末較多，經(jīng)過(guò)3次超聲提取后仍有藥品粉末沉在瓶底。其中，水提取后A廠家3批樣品有較多殘?jiān)?，石油醚提取?批樣品均有殘?jiān)＿@進(jìn)一步證明在以水和石油醚為提取溶劑時(shí)，樣品吸光度值偏小是由于這兩種溶劑沒(méi)有把雷公藤多苷片中的成分提取出來(lái)或提取較少。為了證實(shí)這個(gè)推斷，我們對(duì)8批樣品石油醚和水提取殘?jiān)M(jìn)行了紅外光譜掃描，見(jiàn)圖1~圖11。

圖1 水為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為140203的A廠家樣品）

由圖1~圖11可以看出，殘?jiān)c樣品的紅外吸收峰數(shù)目、峰形和峰位基本接近，從而證實(shí)了雷公藤多苷片中的成分不易溶于水和石油醚的推斷。

圖2 水為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為150302的A廠家樣品）

圖3 水為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為150902的A廠家樣品）

圖4 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為140203的A廠家樣品）

圖5 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為150302的A廠家樣品）

圖6 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為150902的A廠家樣品）

4 討論

本實(shí)驗(yàn)選擇使用4片雷公藤多苷片供試品溶液進(jìn)行試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)采用10片樣品時(shí)，測(cè)定的吸光度值偏大，后經(jīng)過(guò)對(duì)供試品液進(jìn)行逐次稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)測(cè)得的合適濃度的稀釋倍數(shù)，經(jīng)過(guò)換算得出使用4片雷公藤多苷片制備供試品溶液較為合適。

圖7 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為20140402的B廠家樣品）

圖8 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為20140501的B廠家樣品）

圖9 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為20151202的B廠家樣品）

圖10 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為141203的C廠家樣品）

圖11 石油醚為提取溶劑時(shí)殘?jiān)c樣品紅外光譜圖（批號(hào)為150501的C廠家樣品）

本試驗(yàn)采用了超聲提取法提取雷公藤多苷片中的有效成分，與其他學(xué)者采用加熱回流法、色譜柱洗脫進(jìn)行純化的方法［8-10］相比，本法提取速率快且吸光度較大。在分析方法上，采用紫外分光光度法測(cè)定樣品的吸收光譜及吸光度，可以快速、有效地分析樣品的質(zhì)量。課題組成員宋曉娟采用FTIR法研究了8批藥材的紅外吸收光譜，發(fā)現(xiàn)同一廠家不同批號(hào)雷公藤多苷片的紅外吸收譜圖的峰形、峰位和峰的數(shù)目大致相同，說(shuō)明同一廠家生產(chǎn)的藥品質(zhì)量相近；而3個(gè)廠家雷公藤多苷片的紅外吸收光譜峰形、峰位和峰的數(shù)目均有差別。因此，我們可以利用紅外光譜的不同來(lái)鑒別不同廠家的產(chǎn)品，達(dá)到了快速鑒別的目的。

由于時(shí)間有限，對(duì)于雷公藤多苷片中哪些成分在300 nm附近有紫外吸收，以及其準(zhǔn)確含量是多少，并沒(méi)有進(jìn)行深入研究。以后我們將采用高效液相色譜法等方法來(lái)做進(jìn)一步研究。