當歸補血湯對心血管及血液系統(tǒng)疾病的藥理作用及機制研究進展

李鑫琦 ，劉曉節(jié) ，李愛平 ，李 科 ，劉月濤 ，秦雪梅

（1.山西大學中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中心，山西太原 030006； 2.山西大學化學化工學院，山西太原030006；

3.山西大學地產(chǎn)中藥功效物質(zhì)研究與利用山西省重點實驗室，山西太原030006）

當歸補血湯（Danggui Buxue Decoction，DBD），別名黃耆當歸湯、補血湯、耆歸湯、黃耆補血湯等，首見于金元時期李東垣的《內(nèi)外傷辨惑論》，由黃芪和當歸以5∶1比例組成，方中重用黃芪大補脾肺之氣以資生血之源，配以當歸益血和營。兩藥相伍，陽生陰長，氣旺血生，具有益氣生血的功效，多用于治療勞倦內(nèi)傷、氣血虛、陽浮于外之虛熱證等。自問世以來一直作為補氣生血的經(jīng)典名方廣泛應(yīng)用于臨床?，F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)當歸補血湯具有廣泛的藥理作用，包括促進造血、調(diào)節(jié)免疫、保護心腦血管、抗纖維化、抗氧化、保護腎組織、抗腫瘤等。

心血管和血液系統(tǒng)疾病作為臨床高發(fā)病有著很高的致死率，且發(fā)病人群愈發(fā)年輕化。目前，西藥治療心血管及血液系統(tǒng)疾病療效有限且副作用多，而中藥治療有獨特的優(yōu)勢，療效確切且安全性高。眾多中醫(yī)經(jīng)典方劑對心血管和血液系統(tǒng)疾病有著較好的治療效果，其中當歸補血湯的作用尤為突出。本文綜述該方對心血管及血液系統(tǒng)疾病的藥理作用及機制，為其臨床應(yīng)用和后續(xù)研究提供思路。

1 心血管疾病

心血管疾病，又稱為循環(huán)系統(tǒng)疾病，是指人體內(nèi)運送血液的器官和組織出現(xiàn)異常，病發(fā)部位主要是心臟和血管，而DBD能夠通過抗動脈粥樣硬化、促進血管新生、改善心肌缺血來治療心血管疾病。

1.1 動脈粥樣硬化

動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是冠心病、腦梗死、外周血管病的主要誘發(fā)因素，其病變基礎(chǔ)為脂質(zhì)代謝障礙，由于在動脈內(nèi)膜積聚的脂質(zhì)外觀呈黃色粥樣，因此稱為動脈粥樣硬化。主要特征是動脈壁增厚變硬、血管腔狹窄，當管徑狹窄到一定程度上會引發(fā)心絞痛、心肌梗死、心律失常，情況嚴重者可造成猝死，嚴重危害人們健康。

1.1.1 藥理作用 動脈血管內(nèi)皮功能受損將促進AS病變形成，是AS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵。張三印等［1］發(fā)現(xiàn)DBD能夠雙向調(diào)節(jié)不同狀態(tài)下血管內(nèi)皮細胞的增殖作用，既能夠促進正常血管內(nèi)皮細胞及缺氧血管內(nèi)皮細胞增殖，又能抑制與腫瘤共培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞增殖。張志斌等［2-3］用DBD不同配比組方作用于血管緊張素Ⅱ（Angiotensin II，AngⅡ）誘導(dǎo)的大鼠動脈內(nèi)皮細胞凋亡模型，發(fā)現(xiàn)黃芪與當歸之比為5∶1時抗動脈血管內(nèi)皮細胞凋亡作用較為顯著。Lin PL等［4］利用高效液相色譜法對DBD進行化學分析，發(fā)現(xiàn)DBD合煎比單味藥煎出的有效成分多，更能促進阿魏酸、毛蕊異黃酮等有效成分的析出，且黃芪與當歸比例為5∶1時效果最好；DBD能夠改善內(nèi)皮功能障礙，增強血管生成。龔?fù)澋龋?］以高脂飲食+免疫損傷方法成功復(fù)制新西蘭兔動脈粥樣硬化模型，發(fā)現(xiàn)黃芪總皂苷與當歸揮發(fā)油、黃芪甲苷與阿魏酸均可以改善模型組的血脂，具有抗動脈粥樣硬化的功效，且中高劑量效果更明顯。

1.1.2 機制研究 馬文靜等［6］研究發(fā)現(xiàn) DBD可以通過下調(diào)p38蛋白激酶（p38MAPK）的活性從而阻斷該通路的級聯(lián)作用來減輕動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)。黃水清等［7］同樣檢測p38MAPK的活性，發(fā)現(xiàn)p38MAPK經(jīng)低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激后活性明顯增強，單味黃芪、當歸對ox-LDL刺激后增強的p38MAPK活性無明顯影響，DBD能明顯下調(diào)ox-LDL刺激后增強的p38MAPK活性。張志斌等［2-3］發(fā)現(xiàn)DBD可能通過下調(diào)半胱氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）和Bcl-2相關(guān)X蛋白基因的表達，從死亡受體通路和線粒體通路抑制大鼠動脈內(nèi)皮細胞凋亡。

內(nèi)皮祖細胞作為可以分化為血管內(nèi)皮細胞的干細胞多存在于骨髓之中，也是AS形成過程中的重要影響因素之一。楊鵬等［8］在缺氧血管內(nèi)皮細胞模型的基礎(chǔ)上對內(nèi)皮細胞增殖及分子表達的研究進行了更深入的探討，發(fā)現(xiàn)DBD可能通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與血管內(nèi)皮生長因子和可溶性血管內(nèi)皮生長因子兩種受體的結(jié)合而促進缺氧血管內(nèi)皮細胞的增殖。秦臻等［9-10］成功建立兔動脈粥樣硬化模型后，觀察到DBD高、中劑量組家兔血清VEGF、基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）水平增高，而且外周血內(nèi)皮祖細胞（EPCs）的增殖、黏附、遷移和形成小管能力均有增強，他們還在體外培養(yǎng)人外周血內(nèi)皮祖細胞，發(fā)現(xiàn)DBD可能通過PI3K/Akt通路調(diào)節(jié)EPCs的功能。

1.2 血管新生

血管新生是一個復(fù)雜的多步驟生物學過程，是細胞與細胞因子、細胞外基質(zhì)及蛋白水解酶等之間相互作用的結(jié)果。在正負性調(diào)節(jié)因子的控制下，經(jīng)歷細胞外物質(zhì)降解，內(nèi)皮細胞遷移及增殖，毛細血管形成與吻合等生理活動使血管生成維持在正常生理范圍內(nèi)［11］。

1.2.1 藥理作用 謝瑞芳等［12］采用酪氨酸激酶抑制劑抑制斑馬魚血管生成模型研究黃芪與當歸不同配伍比例對血管新生的影響，發(fā)現(xiàn)DBD經(jīng)典配伍比例（黃芪∶當歸=5∶1）對血管新生的影響及有效成分的含量均比其他配伍比例要好很多。董海燕等［13］利用雞胚絨毛尿囊膜實驗?zāi)Ｐ蛯Ρ扔^察4種中藥和3個中藥方劑促血管新生的作用，發(fā)現(xiàn)當歸補血湯促血管生成作用最顯著。王培利等［14］利用心肌梗死大鼠實驗?zāi)Ｐ桶l(fā)現(xiàn)當歸補血湯能促進衰老大鼠缺血心肌冠脈側(cè)枝血管的生成。

1.2.2 機制研究 曾宇［15］研究發(fā)現(xiàn)DBD 能明顯改善大鼠心肌缺血區(qū)血管生成，其機制可能為DBD能抑制可溶性受體蛋白的表達。王嬪等［16］采用皮下注射D-半乳糖連續(xù)6 w的方式復(fù)制衰老大鼠模型，在此基礎(chǔ)上采取結(jié)扎冠脈左前降支的方式復(fù)制衰老大鼠心肌梗死模型，發(fā)現(xiàn)DBD可能通過提高VEGF、NO水平來促進衰老心肌梗死大鼠冠狀動脈側(cè)枝血管的生成。王培利等［14］繼續(xù)深入探討DBD促血管生成機制發(fā)現(xiàn)DBD通過激活PI3K/Akt信號通路，增加缺血心肌VEGF表達，從而產(chǎn)生促血管生成效應(yīng)。

1.3 心肌缺血

心肌缺血是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，進而引起心肌能量代謝不正常，無法支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。心臟慢性壓力負荷過重會引起心肌肥大，心肌肥大又會導(dǎo)致需氧增加，而冠狀動脈的供血量往往不能予以滿足，造成心肌收縮力減退，最終導(dǎo)致心肌缺血。心肌缺血會引發(fā)心肌組織纖維化從而導(dǎo)致心肌數(shù)目減少，同時細胞凋亡會引起心肌細胞減少，進而引發(fā)一系列心肌功能障礙。

1.3.1 藥理作用 徐厚謙等［17-18］發(fā)現(xiàn) DBD 含藥血清能夠起到改善心肌能量代謝障礙、保護心肌細胞的作用，同時利用AngⅡ誘導(dǎo)H9c2心肌細胞肥大模型，測定心肌細胞總蛋白含量，發(fā)現(xiàn)DBD含藥血清對AngⅡ誘導(dǎo)心肌細胞肥大可以起到保護作用。曾宇等［19］通過在大鼠背部皮下注射異丙腎上腺素來誘導(dǎo)大鼠心肌纖維化，發(fā)現(xiàn)DBD能夠抑制心肌間質(zhì)細胞產(chǎn)生膠原蛋白，減輕心肌纖維化，改善左心功能。鄺志斌［20］對BALB/C小鼠腹腔接種病毒液成功造模為病毒性心肌炎模型，發(fā)現(xiàn)DBD可降低病毒性心肌炎小鼠血清乳酸脫氫酶（LDH）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、血清磷酸激酶同工酶（CK-MB）含量，并刺激心肌分泌VEGF，從而促進血管增生，改善心肌供血供氧。周春剛等［21］通過建立H9c2心肌細胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過DBD預(yù)處理心肌細胞后，細胞早期凋亡率和活性氧簇（ROS）水平均明顯降低，表明DBD能提高細胞耐受氧化應(yīng)激，抑制缺氧復(fù)氧損傷導(dǎo)致的細胞凋亡，可能是通過促進Bcl-2表達，減少活性氧簇的產(chǎn)生等機制穩(wěn)定心肌細胞線粒體膜電位，減輕復(fù)氧對線粒體功能的損傷作用。

1.3.2 機制研究 徐厚謙等［22］發(fā)現(xiàn)DBD含藥血清對AngⅡ誘導(dǎo)心肌細胞肥大起保護作用的機制可能是通過調(diào)控心肌細胞PI3K/Akt信號通路實現(xiàn)的。心肌缺血再灌注損傷會引起心肌細胞功能受損，從而觸發(fā)心肌細胞凋亡加重病情，是心血管疾病的重要致病因素。吳偉等［23］將冠脈左前降支結(jié)扎缺血30 min再灌注120 min成功復(fù)制心肌缺血再灌注損傷（MI/RI）模型，發(fā)現(xiàn)DBD能顯著降低MI/RI大鼠血清白細胞介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-ɑ（TNF-ɑ）含量，認為 DBD 對 MI/RI大鼠有保護作用可能與調(diào)控炎癥反應(yīng)并改善心肌缺血等有關(guān)。范智文等［24］在體外培養(yǎng)心肌細胞，構(gòu)建缺氧復(fù)氧模型以模擬缺血再灌注損傷，研究發(fā)現(xiàn)DBD通過作用于內(nèi)源性非編碼單鏈微小RNA-34a（miR-34a）發(fā)揮抗缺氧復(fù)氧介導(dǎo)的心肌細胞凋亡作用。王時光等［25］成功復(fù)制大鼠心肌缺血模型后，發(fā)現(xiàn)DBD能顯著改善冠脈結(jié)扎誘導(dǎo)的心臟病理學改變，降低冠脈結(jié)扎誘導(dǎo)的心肌缺血大鼠血清腫瘤壞死因子TNF-α、IL-6和丙二醛（MDA）含量，提高血清中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）等的活性，DBD對冠脈結(jié)扎致大鼠心肌缺血有保護作用，其作用可能與調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激相關(guān)細胞因子含量及蛋白表達水平有關(guān)。

職玉娟［26］以過氧化氫作用20 h誘導(dǎo)心肌細胞凋亡，發(fā)現(xiàn)DBD及黃芪甲苷、阿魏酸、黃芪總皂苷可抑制過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡，保護心肌細胞；也可通過上調(diào)熱休克蛋白70（Hsp-70）、B細胞淋巴瘤-2（Bcl-2），下調(diào)半胱天冬氨酸酶（Caspase-3）、Bax蛋白的表達抑制心肌細胞的凋亡，防止心肌細胞氧化損傷。王時光等［27］建立大鼠心肌梗死模型后，研究發(fā)現(xiàn)DBD可減少心肌細胞內(nèi)血清中肌酸激酶（CK）和LDH的釋放，增強心肌抗凋亡蛋白的表達，減少促凋亡蛋白的表達。張永花等［28］以DBD含藥血清干預(yù)AngⅡ誘導(dǎo)的肥大心肌細胞模型，發(fā)現(xiàn)DBD含藥血清可能通過調(diào)控心肌細胞轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGFβ1）及下游分信號Smad2信號通路來起到抗心肌細胞肥大的作用。

由此可見，不論是抗動脈粥樣硬化、促血管新生還是改善心肌缺血，DBD治療心血管疾病都是通過蛋白與通路之間相互協(xié)調(diào)、共同起效，從而調(diào)控動脈血管內(nèi)皮細胞、內(nèi)皮祖細胞及心肌細胞等的增殖與凋亡，進而達到相應(yīng)的藥理作用。

2 血液系統(tǒng)疾病

血液系統(tǒng)疾病包括再生障礙性貧血、粒細胞異常、免疫性血小板減少癥、各種白血病等多種血液相關(guān)疾病。貧血作為一種多發(fā)病，嚴重影響著人們的生活質(zhì)量和生命健康。目前，DBD治療貧血的研究已經(jīng)相當深入，不僅包括大量臨床方面的文獻，更有許多藥效和機制研究方面的文獻。

貧血主要分為溶血性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血，是指人體外周血紅細胞容量減少，低于正常范圍下限的一種常見的臨床癥狀。

2.1 藥理作用

計小清［29］采用小鼠眼眶靜脈放血法復(fù)制失血性貧血模型，發(fā)現(xiàn)DBD可提升外周血細胞計數(shù)、提高造血生長因子水平、改善骨髓造血功能。崔運浩等［30］通過環(huán)磷酰胺（CY）建立化療貧血模型，采用血細胞計數(shù)法測定外周血細胞和血紅蛋白含量的變化，發(fā)現(xiàn)DBD不同劑量配比均具有一定的抗貧血效應(yīng)。劉娟等［31］同樣采用CY建立化療貧血模型評價DBD不同方法萃取物的活性，發(fā)現(xiàn)氯仿組效果最優(yōu)，推測DBD中有效物質(zhì)在氯仿萃取液中含量最多。Zhou J等［32］研究DBD對再生障礙性貧血小鼠造血干細胞的調(diào)節(jié)作用，發(fā)現(xiàn)DBD可緩解免疫介導(dǎo)的造血干細胞破壞，并恢復(fù)血細胞的造血功能，其可能是通過降低干擾素來影響相關(guān)基因在骨髓細胞中的表達，從而降低造血干細胞功能損傷，逐漸恢復(fù)造血功能。姚楠等［33］采用CY建立小鼠血虛模型，發(fā)現(xiàn)加味DBD可顯著增加小鼠血紅細胞和血紅蛋白數(shù)量。Yang X等［34］在建立免疫介導(dǎo)的再生障礙性貧血小鼠模型后，發(fā)現(xiàn)DBD能夠抵抗免疫介導(dǎo)的血細胞減少，刺激骨髓集落細胞生長，增加骨髓造血祖細胞的重量。蘇穎等［35］以CY腹腔注射H22荷瘤小鼠后，發(fā)現(xiàn)DBD可明顯提高血紅細胞、白細胞、血紅蛋白的水平，提高經(jīng)CY化療后促紅細胞生成素（EPO）的濃度，提高造血祖細胞的增殖能力，加味DBD各劑量均能有效抑制CY化療所致的骨髓抑制和免疫抑制，從而提高其免疫功能，中劑量效果最佳。

2.2 機制研究

紅細胞、白細胞的分化和增殖需要相關(guān)調(diào)節(jié)因子起作用，紅細胞主要為促紅細胞生成素，白細胞的調(diào)節(jié)因子可在體外刺激造血細胞形成集落，包括與白細胞生成相關(guān)的主要由活化的淋巴細胞生成的粒-單系集落刺激因子（GM-CSF）、由巨噬細胞、內(nèi)皮細胞和間質(zhì)細胞產(chǎn)生的粒系集落刺激因子和單核系集落刺激因子等。為了探究加味DBD對CY誘發(fā)的血虛小鼠EPO和GM-CSF表達的影響，姚楠等［33］研究其機制進一步發(fā)現(xiàn)DBD能夠升高腎臟EPO和骨髓GM-CSF的基因表達，顯著提高血清EPO和GM-CSF的含量。加味DBD明顯改善CY所致小鼠貧血癥狀與其增強小鼠EPO和GMCSF表達尤其是基因表達密切相關(guān)，這可能是加味DBD改善貧血狀況的機制之一。

骨髓造血干細胞增殖和細胞凋亡可以保證造血細胞的正常發(fā)育，在整個造血系統(tǒng)中發(fā)揮著不可替代的重要作用。造血祖細胞可用體外培養(yǎng)的細胞集落法進行測定，不同刺激因子有不同的血細胞集落，已確認的造血祖細胞有中性粒細胞-巨噬細胞系造血祖細胞（CFU-GM）、紅細胞系造血祖細胞（CFU-E）、巨核細胞系造血祖細胞。DNA合成減少，細胞分裂受阻，造血功能減退。黃麗萍等［36］連續(xù)4 d腹腔注射CY30 mg/kg復(fù)制化學性血虛小鼠模型，將含藥血清添加到血虛模型小鼠骨髓細胞的培養(yǎng)體系中，觀察各組含藥血清對骨髓造血祖細胞CFU-GM、CFU-E、CFU-B及骨髓有核細胞DNA合成的影響，發(fā)現(xiàn)DBD含藥血清能夠促進骨髓粒系、紅系造血祖細胞的增殖與分化，促進骨髓有核細胞DNA的增殖，達到補氣生血的功效。竇昊穎等［37-38］基于Notch4和Delta4探討DBD協(xié)同肌源性干細胞（MDSCs）向造血方向調(diào)控的作用機制，發(fā)現(xiàn)DBD協(xié)同肌源性干細胞移植能促進受照射小鼠造血重建，且5倍DBD協(xié)同MDSCs移植效果最佳。在此基礎(chǔ)上探討DBD協(xié)同MDSCs移植對小鼠胸腺 Notch4、Delta4和 Hes5基因mRNA的影響，發(fā)現(xiàn)Notch4、Delta4和Hes5在骨髓移植、MDSCs移植和DBD協(xié)同MDSCs移植中對T淋巴細胞分化和發(fā)育的作用相同，3倍劑量DBD可通過Notch4和Delta4，并作用于下游靶基因Hes5來促進MDSCs向T細胞分化發(fā)育。

可以看出DBD改善貧血的機制可能是:①主要通過促進骨髓造血祖細胞增殖、調(diào)控造血微環(huán)境、平衡造血調(diào)控因子三方面來促進骨髓造血系統(tǒng)的重建；②調(diào)節(jié)傳導(dǎo)通路，如Notch信號通路能對細胞各個階段、多種功能（增殖、分化、激活、凋亡）進行調(diào)控。

3 總結(jié)與展望

綜上，本文主要從DBD對心血管及血液系統(tǒng)疾病的藥理作用和機制研究兩方面進行綜述。發(fā)現(xiàn)DBD來發(fā)揮抗動脈粥樣硬化、促血管新生、改善心肌缺血、抗貧血作用。為了更加直觀的將DBD對疾病的作用機制展現(xiàn)出來，通過整理文獻涉及的蛋白，然后將其與DBD、病癥之間的關(guān)系用表1和圖1來呈現(xiàn)，方便后期深入研究。

表1 DBD-病癥-蛋白之間的相互作用關(guān)系

圖1中三角形表示病癥，菱形表示DBD通過下調(diào)蛋白改善病癥，四邊形表示DBD通過上調(diào)蛋白作用于病癥，六邊形表示DBD通過調(diào)節(jié)蛋白作用于病癥，只是目前具體趨勢尚未明確。

總之，對于DBD治療心血管及血液系統(tǒng)疾病的機理探究較為透徹，無論是動物實驗還是細胞研究均有探索，從多蛋白、多通路闡析其可能的作用機制，這與中藥的多途徑、多靶點、協(xié)同增效的整體作用模式相吻合。此外，這些作用靶點的相互關(guān)聯(lián)也提示復(fù)方的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控模式，體現(xiàn)中藥治療心血管及血液系統(tǒng)疾病的優(yōu)勢。但仍存在不足之處，DBD對心血管及血液系統(tǒng)疾病發(fā)揮藥效的具體物質(zhì)不夠明確、相關(guān)劑量不統(tǒng)一、機制研究不足夠深入；現(xiàn)有的研究僅關(guān)注其可能的靶向作用，多采用針對單一的病理狀態(tài)或信號通路的評價方式，未能從中醫(yī)藥整體的辨證論治觀的角度揭示當歸補血湯的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

鑒于此，深入探尋DBD發(fā)揮藥效的有效成分和機制至關(guān)重要，有利于指導(dǎo)DBD對心血管及血液系統(tǒng)疾病的治療。我們可以運用宏觀與微觀、整體與單一成分之間、物質(zhì)基礎(chǔ)與藥理效應(yīng)觀察相結(jié)合的方法來明確復(fù)方藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)；基于體外篩選與體外模型借助新技術(shù)、譜圖分析、仿生技術(shù)等，明確中藥藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)；從中醫(yī)的整體觀念和辨證論治出發(fā)，結(jié)合現(xiàn)代藥理研究機制，引入系統(tǒng)生物學、網(wǎng)絡(luò)藥理學等與中醫(yī)藥整體觀一致的研究方法系統(tǒng)揭示復(fù)方的整體調(diào)控機制，從而促進中藥復(fù)方的現(xiàn)代化研究。