產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌發(fā)酵條件的優(yōu)化及穩(wěn)定性檢測(cè)

瑪依拉·吐?tīng)柕貏e克

摘 要：試驗(yàn)研究了產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌的最佳發(fā)酵條件，如溫度、pH值、時(shí)間。分別將培養(yǎng)溫度設(shè)為24 ℃、28 ℃、32 ℃，pH值為6、7、8，培養(yǎng)時(shí)間為5 d和7 d，采用紙片法測(cè)量抑菌圈的大小。pH值為6，時(shí)間為7 d，溫度為24 ℃、28 ℃、32 ℃。由抗菌活性大小分析得出，YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3株菌株在溫度為24 ℃時(shí)的抑菌圈最大，因此具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌最適溫度為24 ℃，pH值為6，時(shí)間為7 d，且抑菌能力較強(qiáng)。產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌的生物學(xué)特性包括溫度和酸堿穩(wěn)定性，結(jié)果如下：YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3種菌珠所產(chǎn)抑菌質(zhì)在45 ℃時(shí)的抑菌效果最好，YLAC-20的熱穩(wěn)定性最弱，菌株YLAC-3和YLAC-69的熱穩(wěn)定性最強(qiáng)，且耐高溫，其抑菌活性不受影響，故在內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中可有效利用。產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在酸性條件下抑菌效果最好，在pH值為4～8時(shí)，YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3種菌株對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌效果不同。由抑菌活性表可知，產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌物質(zhì)耐堿性，在堿性條件下抑菌效果較強(qiáng)。這為提高烏頭堿產(chǎn)量奠定了基礎(chǔ)。因此，產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌的研究更加有意義，有待深入研究。

關(guān)鍵詞：烏頭;內(nèi)生真菌;抑菌活性

文章編號(hào)：1004-7026（2019）15-0094-05 ? ? ? ? 中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)：Q946 ?? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

植物內(nèi)生真菌（Endophyte fungus）是指在健康植物中寄生的，在各種組織和器官內(nèi)部或細(xì)胞間隙中完成部分或全部生活周期而不使宿主表現(xiàn)明顯病理癥狀的一類真菌[1]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)植物內(nèi)生真菌的研究報(bào)告較多，由此可以發(fā)現(xiàn)許多植物中的天然化合物與植物內(nèi)生真菌有密切關(guān)系，甚至是內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者陸續(xù)發(fā)現(xiàn)植物內(nèi)生真菌能產(chǎn)生抗癌物質(zhì)，為解決抗癌藥物的供應(yīng)問(wèn)題開(kāi)辟了一條新的道路。

烏頭是毛茛科（RanuncμLaceae）中的一類重要植物，物種極為豐富，全球約有350種，分布于北半球溫帶，主要分布于亞洲，其次為歐洲和北美洲[2]。藥用植物的生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，分離提取的步驟復(fù)雜，生物資源不豐富，而植物的內(nèi)生真菌生長(zhǎng)周期短，可以產(chǎn)生與植物相似的次級(jí)代謝產(chǎn)物，因此可以利用微生物產(chǎn)生藥用價(jià)值的次級(jí)代謝產(chǎn)物[3]。

在烏頭植物的內(nèi)生真菌中，有抗菌活性且活性高的菌株主要分布在烏頭的根部，并且有3株內(nèi)生真菌抗菌譜最廣，它們分別是曲霉、毛殼菌屬和毛霉。有研究對(duì)分離出的烏頭內(nèi)生真菌進(jìn)行了抗菌活性篩選，其中有抗菌活性的菌株占內(nèi)生真菌總菌數(shù)的35.98%，抗菌活性菌株中高活性菌株占比高達(dá)71.19%，這些結(jié)論足以表明烏頭的內(nèi)生真菌中有很多具有抗菌活性的菌株[4]。烏頭屬植物的內(nèi)生菌資源非常豐富，因此對(duì)烏頭屬植物內(nèi)生菌進(jìn)行分離，并且從中篩選出具有生物活性作用的內(nèi)生菌株，具有重要的意義，值得深入研究。

近年來(lái)，人們對(duì)藥用植物的需求量與日俱增，藥用植物資源開(kāi)發(fā)利用也受到了人們的廣泛關(guān)注。烏頭類中藥具有鎮(zhèn)痛抗炎和抗休克的作用，可以擴(kuò)張外周血管、抗氧化。對(duì)烏頭研究較多的是藥效、藥用成分的分離提取、毒性、種植、田間管理和病蟲(chóng)害的防治等[5]。從上述研究結(jié)果可知，烏頭的許多成分均具有抗腫瘤、抗菌和鎮(zhèn)痛等作用，而且效果明顯，具有良好的開(kāi)發(fā)前景。

試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌發(fā)酵溫度、pH值、時(shí)間的優(yōu)化進(jìn)行了研究。將分別將培養(yǎng)溫度設(shè)為24 ℃、28 ℃、32 ℃，pH值控制為6、7、8，培養(yǎng)時(shí)間為5 d和7 d，采用紙片法測(cè)定抑菌圈的大小。得到的結(jié)果為：pH值為6，時(shí)間為7 d，溫度為24 ℃、28 ℃、32 ℃時(shí)，通過(guò)抗菌活性大小分析得出YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3株菌株的溫度為24 ℃時(shí)抑菌圈最大，因此可以確定具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌處于24 ℃的環(huán)境下，pH值為6，培育時(shí)間為7 d時(shí)，抑菌能力較強(qiáng)。

產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌的生物學(xué)特性包括對(duì)熱、酸堿穩(wěn)定性的研究，結(jié)果如下。YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3種菌珠所產(chǎn)的抑菌質(zhì)在45 ℃的環(huán)境中的抑菌效果最好，其中YLAC-20的熱穩(wěn)定性最弱，菌株YLAC-3和YLAC-69的熱穩(wěn)定性最強(qiáng)，其耐高溫性和抑菌活性不受影響，故在內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中可有效利用。產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在酸性條件下的抑菌效果最好，在pH值為4.0～8時(shí)，YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69 3株菌株對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑制效果不同，在抑菌活性表中可知產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌物質(zhì)耐堿性，在堿性條件下抑菌效果較強(qiáng)，這為提高產(chǎn)烏頭堿的產(chǎn)量打下了基礎(chǔ)。因此產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌的研究更加有意義，需要深入研究。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?供試菌株

試驗(yàn)所用的菌株是由伊犁師范大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室保藏的YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69。

1.1.2 ?指示菌

大腸桿菌（Escherichia coli）CGMCC1.110 3株、草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）CGMCC1.769、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和酵母菌CGMCC1.1103，均由伊犁師范學(xué)院生物與地理科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.3 ?主要儀器

主要儀器有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器（德國(guó)IKA/艾卡廣州儀器設(shè)備有限公司）、高速冷凍離心機(jī)HC-3018R（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）、振蕩培養(yǎng)箱HYG-A（上海璽袁科學(xué)儀器有限公司）和超凈工作臺(tái)SWCJ1F（蘇州市金凈凈化設(shè)備科技有限公司）。

1.1.4 ?主要試劑和培養(yǎng)基

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基用于指示菌的培養(yǎng)，馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體（PDB）培養(yǎng)基用于真菌培養(yǎng)。

1.2 ?試驗(yàn)方法

1.2.1 ?具有抑菌活性內(nèi)生真菌的活化

將實(shí)驗(yàn)室中已分離并純化保存的YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69菌株具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌菌種接種于PDA固體培養(yǎng)基和PDB液體培養(yǎng)基中，在28 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)，連續(xù)活化3代，儲(chǔ)存于4 ℃的冰箱中備用。

1.2.2 ?指示菌的培養(yǎng)

將大腸桿菌、枯草芽胞桿菌、金黃葡萄球菌的單菌落分別接種于100 mL的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，在37 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)18 h，將酵母菌單菌落接種于100 mL的PDB培養(yǎng)基，在28 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)48 h，取400 μL菌液接種于PDA培養(yǎng)基上，用無(wú)菌玻璃環(huán)進(jìn)行涂抹，用于抑菌試驗(yàn)。

1.2.3 ?不同發(fā)酵條件對(duì)具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌生成的影響

將具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌分別接種于濃度為1 mol/L的氯化氫和氫氧化鈉中，將PDB培養(yǎng)基的初始pH值分別調(diào)至6、7、8，在121 ℃的環(huán)境中滅菌30 min后，培養(yǎng)溫度分別調(diào)至24 ℃、28 ℃、37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間分別為5 d和7 d，離心后收集上清液，用0.22 μm的過(guò)濾器過(guò)濾除菌，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將100 mL發(fā)酵液濃縮至1 mL，觀察抑菌圈的大小。

采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)大腸桿菌、金黃葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和酵母菌的抑菌作用，具體步驟如下。將紙片放置于涂有指示菌的平板上并點(diǎn)入20 μL的發(fā)酵液，在28 ?℃的環(huán)境中培養(yǎng)1～2 d，觀察并測(cè)量抑菌圈的直徑。

1.2.4 ?產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌發(fā)酵上清液的制備

將活化好的內(nèi)生真菌菌株YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69接種于PDB液體培養(yǎng)基中，在28 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)7 d后離心（4 ℃，8 000r/min，20min），取上清液，置于4 ℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 ?抑菌物質(zhì)的理化特性

（1）不同熱處理對(duì)產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌所產(chǎn)抑菌物質(zhì)的抑菌活性影響。倒平板：將PDA平板加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿20 mL（下層），待其凝固后，吸200 μL供試菌菌懸液置于平板表面，用涂布器將菌液涂布均勻。溫度處理：分別在不同的溫度（45 ℃、60 ℃、80 ℃）下，將內(nèi)生真菌菌株發(fā)酵上清液處理10 min。紙片法： 將含有不同菌種發(fā)酵上清液濾紙片貼在已接種指示菌待測(cè)的平板表面上，每個(gè)菌株設(shè)置2個(gè)重復(fù)，放置37 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)，測(cè)量抑菌圈的直徑并記錄。

（2）不同pH值對(duì)產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌所產(chǎn)抑菌物質(zhì)的抑菌活性影響。倒平板：制備PDA平板加熱到完全融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿20 mL（下層），待其凝固。吸取200 μL供試菌加入平板表面，用涂布器將菌液涂布均勻。pH處理：分別用1 mol/L 的氯化氫和2 mol/L的氫氧化鈉將乳酸菌菌株發(fā)酵上清液調(diào)為不同的pH值（4、5、6、7、8）。紙片法：將含有不同菌種發(fā)酵上清液濾紙片貼在已接種指示菌待測(cè)的平板表面上，每個(gè)菌株設(shè)置2個(gè)重復(fù)，放于37 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)，測(cè)量抑菌圈的直徑并記錄。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌發(fā)酵液隨不同pH值、時(shí)間和溫度的變化情況

將培養(yǎng)溫度設(shè)為24 ℃，pH值為6、7、8，培養(yǎng)時(shí)間為5 d和7 d，檢測(cè)產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌分別對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69的發(fā)酵液在pH值為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d時(shí)，抑菌圈最大，其中YLAC-3的pH為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d的抑菌效果最好，因此以上3株最適合的pH值為6，最佳培養(yǎng)時(shí)間為7 d，見(jiàn)表1。

將培養(yǎng)溫度設(shè)為28 ℃，pH為6、7、8，培養(yǎng)時(shí)間為5 d和7 d，檢測(cè)產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌分別對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌活性，結(jié)果可知YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69的發(fā)酵液在pH為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d時(shí)抑菌圈最大，28 ℃時(shí)抑菌能力比24 ℃時(shí)抑菌效果能力弱。其中，在28 ℃的環(huán)境中，YLAC-69的pH值為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d時(shí)抑菌效果最好，因此以上3株最適合的pH值為6，最佳培養(yǎng)時(shí)間為7 d，見(jiàn)表2。

將培養(yǎng)溫度設(shè)為32 ℃，pH為6、7、8，培養(yǎng)時(shí)間為5 d和7 d，檢測(cè)產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌分別對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌活性，結(jié)果可知YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69的發(fā)酵液在pH值為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d時(shí)抑菌圈最大，在32 ℃時(shí)沒(méi)有在24 ℃和28 ℃時(shí)的抑菌效果明顯。其中在32 ℃的環(huán)境中，YLAC-69的pH值為6，培養(yǎng)時(shí)間為7 d時(shí)抑菌效果最好，因此以上3株最適合的pH值為6，最佳培養(yǎng)時(shí)間為7 d，見(jiàn)表3。

綜上所述，具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌在最適pH值與最佳時(shí)間的基礎(chǔ)上，當(dāng)溫度分別為24 ℃、28 ℃、32 ℃時(shí)，通過(guò)檢測(cè)對(duì)不同菌株的抑菌能力，得出產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌最適合的培養(yǎng)溫度為24 ℃，最適pH值為6，最佳培養(yǎng)時(shí)間為7 d。

2.2 ?產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌對(duì)熱處理的穩(wěn)定性

產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌經(jīng)過(guò)不同的溫度處理時(shí)，其抑菌效果的變化為：YLAC-3所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在45 ℃時(shí)的抑菌效果最好，枯草芽孢桿菌抑菌圈達(dá)到11 mm，溫度分別為60 ℃、80 ℃和100 ℃，10 min后效果有所降低;YLAC-20所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在45 ℃時(shí)的抑菌效果最好，大腸桿菌的抑菌圈為8 mm，溫度為60 ℃、80 ℃和100 ℃，10 min后效果有所降低;YLAC-69 所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在45 ℃時(shí)的抑菌效果最好，對(duì)枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈達(dá)到9 mm，溫度為60 ℃、80 ℃、100 ℃，10 min后效果有所降低，見(jiàn)表4。菌株YLAC-3和YLAC-69有最強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，耐高溫，其抑菌活性不受影響，故在內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中可有效利用，YLAC-20的熱穩(wěn)定性最弱。

2.3 ?產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌對(duì)pH的穩(wěn)定性

產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌對(duì)不同pH的穩(wěn)定性見(jiàn)表5。

pH值為4時(shí)，YLAC-20對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，YLAC-20>YLAC-3>YLAC-69。YLAC-3對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-20。YLAC-3對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。對(duì)酵母菌的抑菌效果依次為YLAC-3、YLAC-69>YLAC-20。

pH值為5時(shí)，YLAC-3和YLAC-69對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3、YLAC-69>YLAC-20。YLAC-3對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。YLAC-69對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC

-20。對(duì)酵母菌的抑菌效果最依次為YLAC-3、YLAC-69>YLAC-20。

pH值為6時(shí)，YLAC-69對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。YLAC-3對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。YLAC-69對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。YLAC-3對(duì)酵母菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。

pH值為7時(shí)，YLAC-69對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-20>YLAC-3。YLAC-3對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。YLAC-69對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。YLAC-69對(duì)酵母菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。

pH值為8時(shí)，YLAC-69對(duì)大腸桿菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-20>YLAC-3。YLAC-3對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌效果最好，YLAC-3>YLAC-69>YLAC-20。YLAC-69對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。YLAC-69對(duì)酵母菌的抑菌效果最好，YLAC-69>YLAC-3>YLAC-20。

因此，具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿的內(nèi)生真菌物質(zhì)在堿性條件下的抑菌效果較強(qiáng)。

3 ?結(jié)束語(yǔ)

由于大部分中藥含大量生物堿，是中藥的活性成分，因此研究植物內(nèi)生真菌，為解決天然藥用植物解決資源匱乏的問(wèn)題已成為有關(guān)人員的重要工作。有些觀點(diǎn)認(rèn)為，內(nèi)生真菌長(zhǎng)期生活在植物體內(nèi)，在與宿主植物體長(zhǎng)期共同進(jìn)化的過(guò)程中，內(nèi)生真菌與寄主植物宿主之間存在著基因的橫向轉(zhuǎn)移，它們之間的基因存在相互交換的現(xiàn)象[6]。

試驗(yàn)將具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌分別接種于用濃度為1 mol/L的氯化氫和氫氧化鈉鈉中，將PDB培養(yǎng)基的初始pH分別調(diào)至6、7、8，在121 ℃的環(huán)境中滅菌30 min，培養(yǎng)溫度分別調(diào)至24 ℃、28 ℃、32 ℃，培養(yǎng)時(shí)間分別為5 d和7 d，離心后收集上清液，用0.22 μm的過(guò)濾器過(guò)濾除菌，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將100 mL的發(fā)酵液濃縮至1 mL，觀察抑菌圈大小。

采用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌發(fā)酵液對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和大腸桿菌以及酵母菌的抑菌作用，把紙片放置于涂有指示菌的平板上并點(diǎn)入20 μL的YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69菌株的發(fā)酵液，通過(guò)試驗(yàn)對(duì)溫度為24 ℃、28 ℃、32 ℃，pH值為6、7、8，時(shí)間為5 d、7 d時(shí)測(cè)定抑菌圈的大小，最終確定具有抑菌活性產(chǎn)烏頭堿內(nèi)生真菌在溫度為24 ℃、pH值為6、時(shí)間為7 d時(shí)的抑菌能力較強(qiáng)。

分析不同熱處理對(duì)菌株所產(chǎn)抑菌物質(zhì)的抑菌活性的影響發(fā)現(xiàn)，YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69菌珠所產(chǎn)抑菌質(zhì)在45 ℃的抑菌效果最好，其中YLAC-20表現(xiàn)最弱的熱穩(wěn)定性，菌株YLAC-3和YLAC-69表現(xiàn)最強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，菌株高溫，抑菌活性不受影響，故在內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中可有效利用。

在產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌所產(chǎn)抑菌物質(zhì)在酸性條件下抑菌效果最好，在pH值為4～8時(shí)，YLAC-3、YLAC-20、YLAC-69菌株對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和酵母菌的抑菌效果不同，產(chǎn)烏頭堿具有抑菌活性內(nèi)生真菌物質(zhì)耐堿性，在堿性條件下抑菌效果較強(qiáng)。

從國(guó)內(nèi)外研究可知，烏頭的許多成分均具有抗腫瘤、抗菌和鎮(zhèn)痛等生物學(xué)特性，且表現(xiàn)良好，具有很好的開(kāi)發(fā)潛力。

參考文獻(xiàn)：

[1]A.V Sturz，J Nowak. Endophytic communities of rhizobacteria and the strategies required to create yield

enhancing associations with crops[J].Applied Soil Ecology，2000，15（2）：183-190.

[2]關(guān)文靈.藥用花卉烏頭[J].植物雜志，2002（1）：16.

[3]李向楠，周稚凡，劉風(fēng)路，等.云南榧種子內(nèi)生真菌的分離鑒定及抑菌活性篩選[J].生物災(zāi)害科學(xué)，2016，39（1）：

20-26.

[4]李治瀅，李紹蘭，楊麗源，等.藥用植物烏頭內(nèi)生真菌抗菌活性研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009（22）：90-92.

[5]李治瑩，陳有為，楊麗源，等.藥用植物烏頭內(nèi)生真菌研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技2009（7）：7-8.

[6]Pandi M， Rajapriya P， Manoharan P T. Extraction and Characterization of Taxol： An Anticancer Drug from an

Endophytic and Pathogenic Fungi[M].Laboratory Protocols in Fungal Biology. Springer New York， 2013.