不同品牌膠體金免疫層析法試劑檢測原料乳中氟苯尼考的研究

趙媛 宋曉東 馬文麗 林立民

氟苯尼考（Florfenicol），又名氟甲砜霉素，是一種新的獸醫(yī)專用氯霉素類廣譜抗菌藥，具有吸收性好、體內(nèi)分布廣、廣譜抗菌、安全高效等特點，且對敏感菌所導(dǎo)致的畜禽細(xì)菌性疾病有顯著的治療效果，故其作為氯霉素的替代物被廣泛用于治療畜禽及水產(chǎn)品的細(xì)菌性疾病。研究表明，氟苯尼考具有胚胎毒性和耐藥性，在畜禽生產(chǎn)中的大量應(yīng)用將導(dǎo)致其在畜禽產(chǎn)品中有所殘留，進而危害人體健康。歐盟、日本等國家均制定了動物食品中氟苯尼考的最大殘留量標(biāo)準(zhǔn)，我國農(nóng)業(yè)部235號公告也對其殘留量作了嚴(yán)格規(guī)定——在牛、羊泌乳期禁用。

目前，檢測動物源性食品中氟苯尼考?xì)埩舻姆椒ㄖ饕须娢环ā⒎止夤舛确?、色譜法、免疫分析法等。其中，免疫分析法中的膠體金免疫測定法是一種利用膠體金顆粒物標(biāo)記抗原或抗體的一類檢測方法，具有直觀簡單、快速方便、成本低廉等特點，因此常被乳制品企業(yè)用作定性篩查方法。

本研究對市售不同品牌的膠體金免疫層析法試劑在檢出限、重復(fù)性、特異性、干擾性等方面檢測原料乳中氟苯尼考?xì)埩艚Y(jié)果進行對比，以期為乳制品企業(yè)選擇試劑品牌提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

讀數(shù)儀;溫育器;移液器;不同品牌氟苯尼考金標(biāo)快速檢測試紙條。

1.2檢測方法

依據(jù)不同品牌氟苯尼考金標(biāo)快速檢測試紙條說明書進行操作。選取市售5種不同品牌的試劑廠家進行實驗，品牌名稱分別用A、B、C、D、E代替。

1.3 樣品制備及檢測

樣品不需要前處理——回溫至室溫后直接檢測，按照不同品牌試劑的操作方法進行，并用讀數(shù)儀判讀結(jié)果。

1.4 檢出限實驗

選取陰性原料乳樣品6份，向其中5份樣品中各加入氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制成不同濃度的水平樣品，其中1份作陰性對照，按照不同品牌試劑操作方法進行檢測，并計算各個試劑的樣品陽性率。

1.5 重復(fù)性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品，配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑的操作方法進行檢測，每種試劑重復(fù)檢測20組，并計算各個試劑的樣品陽性率。

1.6 特異性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入氯霉素、氟苯尼考等同類藥物標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑操作方法進行檢測，每種試劑檢測6組，并測定是否存在交叉反應(yīng)。

1.7 干擾性實驗

選取陰性原料乳樣品，加入干擾性物質(zhì)后，分別配制成0.1μg/kg濃度水平的樣品，按照不同品牌試劑的操作方法進行檢測，每種試劑檢測6組，并測定試劑是否存在干擾。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限

根據(jù)不同品牌試劑方法檢出樣品的陽性率不同，由此可得出各個試劑的檢出限。檢出限結(jié)果對比如表1所示，品牌B、C、D試劑檢出限均為0.05μg/kg，品牌A試劑檢出限為0.07μg/kg，品牌E試劑檢出限為0.1μg/kg。

2.2 重復(fù)性

通過檢測同一濃度水平的20組樣品，可知品牌C、D、E試劑陽性率為100%，具有良好的重復(fù)性，重復(fù)性實驗結(jié)果見表2。

2.3特異性

根據(jù)各個品牌試劑檢測同一濃度水平的同類氯霉素藥物，得出特異性實驗結(jié)果，各個品牌試劑均無交叉反應(yīng)，表明試劑特異性良好。

2.4干擾性

根據(jù)各個品牌試劑檢測同一水平的干擾物質(zhì)，結(jié)果顯示，除品牌E試劑存在干擾外，其余4個品牌試劑均無干擾，具有良好的抗干擾性，干擾性實驗結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

通過對5種不同品牌膠體金免疫層析法試劑的研究，發(fā)現(xiàn)品牌C、D試劑方法的靈敏度高、重復(fù)性好、特異性強、抗干擾性強，在乳制品企業(yè)實際檢測工作中可以用于快速初篩原料乳中氟苯尼考藥物，提高了實驗效率，提供了技術(shù)保障，避免了質(zhì)量風(fēng)險。