紫外分光光度法測定復方痛風顆粒劑中總酚的含量

1.廣西壯族自治區(qū)柳州市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 柳州 545001；2.貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550002

復方痛風顆粒劑是廣西柳州市中醫(yī)院通過臨床實踐研制出的純中藥制劑，由白術、紫蘇梗、薏苡仁、車前子、枇杷葉等5味中藥組成。臨床觀察證明了能促進尿酸排泄，廣泛用于痛風的輔助治療。方中白術健脾燥濕，健運中焦，散精于肺為君；紫蘇梗寬胸利膈，解魚蟹毒，增強中焦運化為臣；薏苡仁、車前子利濕化濁，助尿酸從膀胱排除為佐；枇杷葉肅降肺氣，讓精氣得于正常運行為使；諸藥合用共奏健脾肅肺、利濕化濁之功。方中藥材紫蘇梗、枇杷葉含有大量酚酸類化合物，且具有抗氧化、抗血小板活性、抗動脈粥樣硬化、抗菌抗炎、保肝和促進尿酸排泄作用等[1-2]。為了更好的控制其質量，本文采用紫外分光光度法[3-7]對復方痛風顆粒劑中的總酚進行含量測定，為更深入研究復方痛風顆粒劑提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1901紫外可見分光光度儀(北京普析通用儀器有限公司)；BSA124S分析天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；KQ-300DB型數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；KDM可調控溫電熱套(山東鄄城科源儀器設備廠)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)；DH64型電熱恒溫干燥箱(上海市躍進醫(yī)療器械一廠)；LK-1000A型搖擺式高速中藥粉碎機(浙江溫嶺市創(chuàng)力藥材器械廠)。

1.2 試藥 沒食子酸對照品(批號：110831-201605，中國食品藥品檢定研究院)；復方痛風顆粒劑(批號：20161013、20161014、20161015，柳州市中醫(yī)醫(yī)院藥學部自制)；無水碳酸鈉(分析純，批號：20161024，秦皇島市化學試劑廠)， 鎢酸鈉(分析純，批號：20130710，天津市大茂化學試劑廠)， 鉬酸鈉(分析純，批號：20150117，天津市化學試劑四廠)，硫酸鋰(分析純，批號：20130825，重慶東方試劑廠)；乙腈(色譜純，批號：20180912，成都科龍試劑有限公司)；甲醇(色譜純，批號：20180820，成都科龍試劑有限公司)；磷酸(分析純，批號：20160913，北京化工廠)；水為娃哈哈純凈水。

2 方法和結果

2.1 磷鉬鎢酸試液的制備 取鎢酸鈉100 g，鉬酸鈉25 g，加水700 mL使溶解，加鹽酸100 mL、磷酸50 mL，加熱回流10 h，放冷后現(xiàn)加硫酸鋰150 g，水50 mL和溴0.2 mL，煮沸除去殘留的溴(約15 min)，冷卻，加水稀釋至1000 mL，濾過，即得。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品25.2 mg，置25 mL的棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置100 mL的棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(每mL中含沒食子酸0.0504 mg)

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取樣品復方痛風顆粒劑約1 g，置100 mL棕色量瓶中，加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 檢測波長的確定 吸取一定量的沒食子酸對照品溶液在280～800 nm波長范圍內掃描。結果表明，沒食子酸對照品和供試品的最大吸收峰位一致，均在760 nm波長處有最大吸收，故本試驗選用760 nm作為檢測波長。

2.5 線性關系考察 精密量取對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置25 mL的棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水11.5、11、10、9.0、8、7 mL，用29% 的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min(以相應的試劑為空白)，照紫外—可見分光光度法在760 nm的波長處測定吸光度(A)，以溶液濃度(C)(μg)對吸光度(A)進行線形回歸，得線形回歸方程：C=270.872A-8.286(r=0.9996)，線形范圍：25.1～200.8 μg 時線性關系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液(濃度50.2 μg/mL)2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1 mL”起，加水9 mL，重復測定吸光度6次(以相應的試劑操作為空白)。結果RSD=0.20%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 重復性試驗 精密稱取樣品復方痛風顆粒劑粉末(批號：20161013)約1 g，平行6份，加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。按“2.5”項下方法測定吸光度A，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg)。結果平均含量為1.15%，RSD=0.65% (n=6)，表明方法重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一重復性試驗的供試品(批號20161013)溶液，分別在不同時間(0、1、2、4 h)測定，考察供試品溶液的穩(wěn)定性，結果平均吸光度為0.442，RSD=0.29%，表明樣品總酚測定在4 h內基本保持穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗 分別精密稱取上面重復性試驗復方痛風顆粒樣品(樣品中總多酚含量1.15%)9份各500 mg，精密加入其樣品總多酚含量的75%、100%、125%的沒食子酸對照品溶液(精密稱取沒食子酸對照品50.1 mg至50 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度1.002 mg/mL)，加水適量，放置30 min，振搖，超聲處理30 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。測定吸光度(A)，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg)，計算加樣回收率。由表1可知，平均回收率為101.59%，RSD為0.82%(n=9)，回收率良好。

表1 總多酚回收率試驗結果 (n=9)

2.10 樣品的含量測定 精密吸取3批復方痛風顆粒劑約1 g，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.5”項下方法進行測定，用外標法計算復方痛風顆粒劑總多酚含量(以沒食子酸計)。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果 (n=3)

3 討論

復方痛風顆粒劑是由白術、紫蘇梗、薏苡仁、車前子、枇杷葉5味中藥組成，通過多酚檢測發(fā)現(xiàn)總多酚含量較高，可作為復方檢測指標，且方中紫蘇梗、枇杷葉中均含有一定量的多酚類化合物，具有抗氧化、抗血小板活性、抗動脈粥樣硬化、抗菌抗炎、保肝和促進尿酸排泄作用等[1～2]。目前對復方痛風顆粒劑中總酚酸的提取和含量測定無相關報道，本研究建立了測定復方痛風顆粒劑中總酚酸含量的紫外分光光度法，為提高其質量控制標準提供參考。