打瓜籽殼與苜蓿、精料配比對(duì)飼糧綜合組合效應(yīng)研究

袁 玖，張建忠，杜瑞芳，張 榕，徐文靜，代春輝，王春卉，柳 振，楊 帆，萬欣杰

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070；2.甘肅正合生物科技有限公司，蘭州 730060）

打瓜（seed melon）是常見的經(jīng)濟(jì)作物之一。打瓜籽殼是打瓜籽實(shí)的副產(chǎn)品，資源豐富，但基本未被有效利用。然而，打瓜籽殼消化率低、適口性差，單獨(dú)飼喂不能滿足動(dòng)物的營養(yǎng)需要。但這些限制可以通過補(bǔ)飼優(yōu)質(zhì)飼料獲得正組合效應(yīng)被克服[1]?；旌巷暳匣蛉占Z的可利用能或消化率不等于混合飼料中各個(gè)飼料的可利用能或消化率的加權(quán)值，這意味著“組合效應(yīng)”（associative effects，AE）產(chǎn)生[2-3]。而這些組合效應(yīng)可以改變反芻動(dòng)物胃腸道（尤其是瘤胃）的代謝過程。豆科牧草的蛋白質(zhì)含量高于其他牧草和低質(zhì)粗飼料，添加苜蓿（Medicago sativa）等豆科牧草可以提高這些低質(zhì)飼料的利用率[4-6]。F.Tagliapietra等[7]研究表明，將優(yōu)質(zhì)牧草（蘋果渣、柑橘漿）與低質(zhì)飼草（皇冠雛菊、奶薊）配合，低質(zhì)牧草的體外發(fā)酵性能顯著提高。另外，飼草基礎(chǔ)日糧要想獲得理想的生產(chǎn)性能，必須同時(shí)配合飼喂精料，精料的補(bǔ)充量取決于基礎(chǔ)飼料和動(dòng)物的特性[8]。A.T.Dolebo 等[9]報(bào)道，波爾奶山羊的日糧精料水平和干草來源可作為預(yù)測(cè)飼糧負(fù)AE 的方法，且發(fā)現(xiàn)低水平精料和中等水平的生長(zhǎng)期雜草能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)ME 攝入量。在高精料日糧中，為顯著提高生長(zhǎng)羔羊的生產(chǎn)性能和飼料效率，需要用玉米代替至少20%（DM 基礎(chǔ)）的大麥日糧[10]。

研究飼料AE 的方法有體外發(fā)酵試驗(yàn)、體內(nèi)消化代謝試驗(yàn)和動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)。由于產(chǎn)氣量同有機(jī)物消化率高度相關(guān)，因此，體外產(chǎn)氣試驗(yàn)成為眾多學(xué)者研究不同飼料間AE 的首選方法[11]。反芻動(dòng)物飼料間的AE 在精、粗飼料之間最顯著，因此，飼糧的精粗比（C∶R）是決定瘤胃發(fā)酵特征主要因素之一。王加啟等[12]發(fā)現(xiàn)，精、粗飼料的負(fù) AE 點(diǎn)為 C∶R 大于70%；當(dāng)精料比例達(dá)到20%～60%時(shí)對(duì)日糧干物質(zhì)消失率無顯著影響；即使C∶R 完全一致，AE 仍表現(xiàn)很大的不同。國內(nèi)、外有關(guān)飼料組合效應(yīng)的報(bào)道很多，然而，將打瓜籽殼作為飼料，與苜蓿、精料配比后對(duì)產(chǎn)氣量和瘤胃發(fā)酵參數(shù)的AE 的影響報(bào)道尚未見到。而且，現(xiàn)有飼料組合效應(yīng)方面的報(bào)道，多數(shù)是評(píng)價(jià)單一指標(biāo)的AE 值或幾個(gè)單獨(dú)指標(biāo)各自的AE，很少進(jìn)行綜合AE 值的評(píng)價(jià)。因此，本研究的目的旨在用體外產(chǎn)氣法評(píng)價(jià)精粗比40∶60 和 30∶70 下，打瓜籽殼與苜蓿、精料不同配比對(duì)各飼糧組合的各單項(xiàng)指標(biāo)組合效應(yīng)和綜合組合效應(yīng)的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

精料購自蘭州聯(lián)邦飼料有限公司，打瓜籽殼、苜蓿來自甘肅省蘭州市。精料、打瓜籽殼、苜蓿通過干燥、粉碎、過1 mm 標(biāo)準(zhǔn)篩。精料補(bǔ)充料的配方（風(fēng)干基礎(chǔ)）：玉米85.17%，豆粕7.22%，棉籽粕3.46%，食鹽1.65%，預(yù)混料2.50%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

精粗比為 40∶60 和 30∶70，精料（DM 基礎(chǔ)）占40%和 30%，打瓜籽殼（DM 基礎(chǔ)）、苜蓿（DM 基礎(chǔ)）占60%和70%。具體為：精料（Concentrate，C）∶打瓜籽殼（Watermelon seed shell，W）∶苜蓿（Alfalfa，A）分別為 40∶60∶0、40∶45∶15、40∶30∶30、40∶15∶45、40∶0∶60和 30∶70∶0、30∶55∶15、30∶40∶30、30∶25∶45、30∶10∶60、30∶0∶70。3 種單獨(dú)飼料和 11 種組合，每組設(shè) 3 個(gè)重復(fù)，3 個(gè)空白管，共（14×3）+3=45 種飼糧。

1.3 瘤胃液供體動(dòng)物及其飼養(yǎng)

3 只安裝永久性瘤胃瘺管的荷斯坦干奶牛，飼喂的日糧：干草自由采食，精料（配方組成及養(yǎng)分含量見表1）4 kg·天-1·頭-1，每日喂 2 次，自由飲水。體外培養(yǎng)試驗(yàn)當(dāng)日早飼前采集3 只瘺管牛的瘤胃液，經(jīng)4 層紗布過濾至預(yù)熱過的保溫瓶，連續(xù)通入CO2，保證瘤胃液的厭氧環(huán)境，迅速轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室，待用。

1.4 體外發(fā)酵培養(yǎng)程序

準(zhǔn)確稱取11 種飼糧組合和3 種單獨(dú)的飼料（0.200±0.001）g（DM 基礎(chǔ)），裝入 2.0 cm×3.0 cm 尼龍袋（孔徑 50 μm），送入產(chǎn)氣管底部，加入預(yù)熱 39±0.5 ℃的體外發(fā)酵培養(yǎng)液30 mL（10 mL 瘤胃液+20 mL 緩沖液，緩沖液參照K.H.Menke[14]方法配制）。迅速排出管內(nèi)空氣，用膠管和夾子密封產(chǎn)氣管，記錄初始刻度（mL）。將產(chǎn)氣管置39 ℃恒溫水浴搖床中培養(yǎng)2、4、6、9、12、24、36 和 48 h 時(shí)，記錄各時(shí)間點(diǎn)產(chǎn)氣量（gas production，GP）（mL）。

某時(shí)間點(diǎn)GP（mL）=該段時(shí)間樣品GP-產(chǎn)氣管初始刻度-該段時(shí)間空白管GP。

表1 3 頭奶牛試驗(yàn)日糧中精料的組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Table 1 Ingredients and nutrient levels of concentrate of experimental diet for 3 cows (DM basis)

1.5 上清液及殘?jiān)牟杉?/h3>

48 h 培養(yǎng)結(jié)束后，將尼龍袋迅速放入冰水中，使尼龍袋內(nèi)樣品停止發(fā)酵，用流動(dòng)的蒸餾水將尼龍袋沖洗干凈，自然晾干，轉(zhuǎn)移至65 ℃烘箱烘干48 h至恒重后，計(jì)算干物質(zhì)降解率（dry matter digestibility，DMD）。殘?jiān)鼫y(cè)定粗灰分后，計(jì)算有機(jī)物降解率（organic matter digestibility，OMD）。

將培養(yǎng)液裝入離心管，10 000×g 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)至5 mL 離心管，蓋緊管口，編號(hào)記錄，-20 ℃冰柜保存，待測(cè)乙酸、丙酸等各種揮發(fā)性脂肪酸（volatile fatty acids，VFA）和氨態(tài)氮（NH3-N）含量。

1.6 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.6.1 飼料常規(guī)營養(yǎng)水平

按常規(guī)法AOAC[15]測(cè)定打瓜籽殼、苜蓿、精料的干物質(zhì)（dry matter，DM）、粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）、粗脂肪（ether extract，EE）、粗纖維（crude fiber，CF）和粗灰分（Ash）含量。

1.6.2 產(chǎn)氣數(shù)據(jù)的計(jì)算

（1）GP 測(cè)定。

GPt=200×（Vt-V0）/W 式中，t 為發(fā)酵開始后某一時(shí)間（h）；GPt為樣品 t 時(shí)刻產(chǎn)氣量（mL）；200 為產(chǎn)氣管內(nèi)樣品的總重量（200 mg）；Vt為樣品發(fā)酵t h 后產(chǎn)氣管讀數(shù)；V0為樣品發(fā)酵t h 后空白管讀數(shù)；W 為樣品干物質(zhì)重（mg）。

（2）產(chǎn)氣參數(shù)計(jì)算。

利用“Fit curve”軟件，Orskov 和 McDonald[16]產(chǎn)氣模型公式 GP=a+b（l-e-ct），將各樣品在 2、4、6、9、12、24、36、48 h 時(shí)的 GP 代入，計(jì)算消化動(dòng)力參數(shù)。式中，t 為發(fā)酵開始后某一時(shí)間（h）；a 為快速產(chǎn)氣部分（mL）；b 為緩慢產(chǎn)氣部分（mL）；c 為 b 的產(chǎn)氣速度常數(shù)（%·h-1）；a+b 為潛在產(chǎn)氣量（mL）。

1.6.3 瘤胃發(fā)酵參數(shù)、DMD、OMD 的測(cè)定

pH 采用梅特勒-托利多FE20 型酸度計(jì)測(cè)定；NH3-N 濃度采用馮宗慈等[17]比色法測(cè)定；VFA 濃度采用島津GC-2010 氣相色譜法測(cè)定[18]。DMD、OMD公式：

干物質(zhì)降解率（DMD，%）=（原樣品重量×原DM含量-殘?jiān)鼧悠分亓俊翚堅(jiān)麯M 含量）/原樣品重量×原DM 含量×100%有機(jī)物降解率（OMD，%）=（原樣品重量×原OM 含量-殘?jiān)鼧悠分亓俊翚堅(jiān)袡C(jī)物含量）/原樣品重量×原 OM 含量×100%。

1.6.4 組合效應(yīng)的計(jì)算

單項(xiàng)組合效應(yīng)指數(shù)（single-factor associative effects index，SFAEI）和綜合組合效應(yīng)指數(shù)（multiplefactors associative effects index，MFAEI）參照王旭[19]方法。

SFAEI=（各組合實(shí)測(cè)值-加權(quán)估算值）×100/加權(quán)估算值。式中，實(shí)測(cè)值為各組合的實(shí)際測(cè)定值，加權(quán)估算值=打瓜籽殼實(shí)測(cè)值×打瓜籽殼配比+精料實(shí)測(cè)值×精料配比+苜蓿實(shí)測(cè)值×苜蓿配比。

MFAEI=∑SFAEI=AEGP48h+AEDMD+AEOMD+AEVFA+AENH3-N。

1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2013 處理計(jì)算后，采用SPSS 16.0 軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析，結(jié)果以平均值和平均標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示，以P＜0.05 為差異顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)，以P＜0.01 為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.05≤P＜0.10 為有變化趨勢(shì)標(biāo)準(zhǔn)。差異顯著時(shí)，采用Tukey 氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料營養(yǎng)水平及產(chǎn)氣參數(shù)

由表2可見，精料（19.2%）CP 高于苜蓿（18.5%）和打瓜籽殼（3.4%）；打瓜籽殼CF 最高為55.7%，苜蓿和精料分別是29.4%和7.9%；打瓜籽殼EE 為13.3%，高于精料（4.2%）和苜蓿（6.6%）。

打瓜籽殼、精料、苜蓿的快速產(chǎn)氣部分a 分別是3.7 mL、-10.5 mL 和-2.9 mL，說明打瓜籽殼產(chǎn)氣不滯后，精料產(chǎn)氣滯后時(shí)間最長(zhǎng)，苜蓿次之。緩慢產(chǎn)氣部分 b，精料（56.1 mL）高于打瓜籽殼（51.9 mL）和苜蓿（29.6 mL）。b 的產(chǎn)氣速度常數(shù)c、潛在產(chǎn)氣量（a+b）和 48 h 產(chǎn)氣量 GP48 h，打瓜籽殼（0.138%·h-1、55.6 mL 和 44.3 mL）高于精料（0.121%·h-1、45.5 mL和 42.5 mL）和苜蓿（0.056%·h-1、26.7 mL 和 15.8 mL）。

表2 飼料營養(yǎng)水平及體外產(chǎn)氣參數(shù)（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Nutrient levels and in vitro gas parameters of experimental diets (air-dry basis)

2.2 各飼糧組合的產(chǎn)氣參數(shù)

表3可見，C∶R 為 40∶60 時(shí)，打瓜籽殼所占比例為 45、30 和 15 的組（即 40∶45∶15、40∶30∶30 和 40∶15∶45 組，簡(jiǎn)稱“45 組”、“30 組”和“15 組”，下同）的 b、（a+b）和 GP48 h 顯著高于 60 和 0 組（P＜0.05）。各組間 a 和 c 無顯著差異（P＞0.05）。C∶R 為 30∶70 時(shí)，40、25 和 10 組的 a 和 c 顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.05）。40、25 和 10 組的 b 極顯著高于 70 組（P＜0.01），與55 和 0 組無顯著差異（P＞0.05）。40、25 和 10 組的（a+b）極顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.01）。25 和 10組的 GP48 h 顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.05）。

表3 打瓜籽殼與苜蓿、精料體外混合培養(yǎng)48 h 后的產(chǎn)氣及發(fā)酵參數(shù)Table 3 GP and fermentation parameters at 48 h when watermelon seed shell was incubated with alfalfa ＆ concentrate in vitro

2.3 各飼糧組合的瘤胃pH、DMD、OMD、NH3-N和VFA濃度

表3可見，C∶R 為 40∶60 時(shí)，60、15 和 0 打瓜籽殼組的瘤胃 pH 顯著高于 45 和 30 組（P＜0.05）。45和 30 組的 DMD 和 OMD 顯著高于 60、15 和 0 組（P＜0.05）。45、30 和 15 組的 NH3-N 濃度顯著高于60 和 0 組（P＜0.05）。C∶R 為 30∶70 時(shí)，70、55、40 和 0組瘤胃 pH 顯著高于 25 和 10 組（P＜0.05）。40、25 和10 組的 DMD 和 OMD 顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.05），55 和 0 組顯著高于 70 組（P＜0.05）。25 和 10組 NH3-N 極顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.01）。

由表4可知，C∶R 為 40∶60 時(shí)，45 和 30 組的乙酸、丙酸和總揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）均顯著高于60 和0 組（P＜0.05），與 15 組無顯著差異（P＞0.05）。45 和30 組的丁酸、異戊酸顯著高于 60、15 和 0 組（P＜0.05）。C∶R 為 30∶70 時(shí)，25 和 10 組的乙酸顯著高于 70、55和 0 組（P＜0.05），與 40 組無顯著差異（P＞0.05）。25和 10 組的丙酸、戊酸顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.05）。40、25 和 10 組的異丁酸、異戊酸和 TVFA顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.05）。其他 VFA 和乙/丙，各組間無顯著差異（P＞0.05）。

表4 打瓜籽殼與苜蓿、精料體外混合培養(yǎng)48 h 后的揮發(fā)性脂肪酸Table 4 VFA at 48 h when watermelon seed shell was incubated with alfalfa and concentrate in vitro mmol·L-1

2.4 各飼糧組合的SFAEI和MFAEI

表5可見，C∶R 為 40∶60 時(shí)，45 和 30 組的 GP48 h的 AE 極顯著高于 60、15 和 0 組（P＜0.01），15 組極顯著高于 60 和 0 組（P＜0.01）。45 和 30 組的 DMD的 AE 極顯著高于 60 和 0 組（P＜0.01），與 15 組差異不顯著（P＞0.05）。45 組的 OMD 的 AE 極顯著高于 60、30、15 和 0 組（P＜0.01），30 和 15 組極顯著高于 60 和 0 組（P＜0.01）。45 和 30 組的 TVFA 的 AE 極顯著高于 60、15 和 0 組（P＜0.01）。45 組的 NH3-N 的AE 顯著高于 60、30、15 和 0 組（P＜0.05），30、15 和 0組顯著高于 60 組（P＜0.05）。45 組（147.76%）和 30 組（119.28%）的 MFAEI 極顯著高于 60 組（-14.14%）、15 組（76.16%）和 0 組（31.18%）（P＜0.001），45 組顯著高于 30 組（P＜0.05），15 組極顯著高于 60 和 0 組（P＜0.01），0 組極顯著高于 60 組（P＜0.01）。

C∶R 為 30∶70 時(shí)，25 和 10 組的 GP48 h 的 AE極顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.001），40 組極顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.01），0 組極顯著高于 70和 55 組（P＜0.01）。25 和 10 組的 DMD 的 AE 極顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.01）。25 和 10 組的 OMD的 AE 顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.05），55、40 和0 組顯著高于 70 組（P＜0.05）。25 和 10 組的 TVFA的 AE 顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.05），與 40 組差異不顯著（P＞0.05）。25 和 10 組的 NH3-N 的 AE 顯著高于 70、55、40 和 0 組（P＜0.05），40 和 0 組顯著高于 70 和 55 組（P＜0.05）。25 組（220.87%）和 10 組（194.55%）的 MFAEI 極顯著高于 70 組（-23.33%）、55 組（10.66%）、40 組（106.97%）和 0 組（55.99%）（P＜0.001），25 組顯著高于 10 組（P＜0.05），40 組極顯著高于 70、55 和 0 組（P＜0.01），0 組極顯著高于70 和55 組（P＜0.01）。

表5 打瓜籽殼與苜蓿、精料體外混合培養(yǎng)48 h 后的SFAEI 和MFAEITable 5 SFAEI and MFAEI at 48 h when watermelon seed shell was incubated with alfalfa and concentrate in vitro %

3 討論

3.1 各種飼料的產(chǎn)氣參數(shù)

本試驗(yàn)中，在a 值上，打瓜籽殼（3.7 mL）產(chǎn)氣不滯后，精料（-10.5 mL）產(chǎn)氣滯后時(shí)間最長(zhǎng)，苜蓿（-2.9 mL）次之。研究表明，玉米比大麥有更長(zhǎng)的產(chǎn)氣滯后時(shí)間[20-21]。在本研究中，玉米占精料的85.17%，因此，本試驗(yàn)中精料有更長(zhǎng)的產(chǎn)氣滯后時(shí)間與前人的研究結(jié)果一致。打瓜籽殼的a、c、（a+b）和GP48 h均高于精料和苜蓿，表明三種原料中，打瓜籽殼的產(chǎn)氣性能最佳，其次是精料，最后是苜蓿。

3.2 各飼料組合的產(chǎn)氣量

本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，精料∶打瓜籽殼∶苜蓿為40∶45∶15 和 30∶25∶45 的產(chǎn)氣和發(fā)酵參數(shù)均顯著高于其他組。由于產(chǎn)氣量是預(yù)測(cè)飼料在反芻動(dòng)物瘤胃消化率的重要指標(biāo)[11]。因此，設(shè)計(jì)單一、混合飼料進(jìn)行體外產(chǎn)氣試驗(yàn)是研究和確定混合飼料AE 的有用工具。研究發(fā)現(xiàn)，飼草樹葉與精料體外培養(yǎng)時(shí)在產(chǎn)氣量上有正AE[22]。小麥秸稈與苜?；旌显诋a(chǎn)氣參數(shù)上有正AE[23]。豆科牧草能提高秸稈的利用率，二者混合使用的優(yōu)勢(shì)是多種因素綜合作用的結(jié)果[24]。M.Laura等[25]發(fā)現(xiàn)，以 75∶25 或 25∶75 混合體外培養(yǎng)時(shí)，2 種慢速發(fā)酵纖維（奶薊草、純纖維素）配比3 種快速發(fā)酵纖維（無籽番茄、柑橘渣、果膠），GP 顯著提高。各種牧草和精料之間的AE 也有大量報(bào)道[3]。這些報(bào)道與本試驗(yàn)結(jié)果一致，打瓜籽殼作為一種廢棄物或農(nóng)副產(chǎn)品，與優(yōu)質(zhì)的豆科牧草苜蓿配比后，產(chǎn)生了組合效應(yīng)。

3.3 各飼料組合的瘤胃pH、TVFA和NH3-N濃度

瘤胃pH 是一個(gè)綜合反應(yīng)瘤胃內(nèi)發(fā)酵情況和環(huán)境變化的重要指標(biāo)。瘤胃pH 范圍一般為6～7，過高或過低都會(huì)引起瘤胃發(fā)酵異常。反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生VFA 的原因主要是日糧中碳水化合物的降解，它是瘤胃微生物維持和生長(zhǎng)的主要能量來源。TVFA與 GP 之間呈正相關(guān)。本試驗(yàn)中，45、30 和 25、10 組的TVFA 和GP 顯著高于其他組。乙/丙反映了瘤胃發(fā)酵的類型。本試驗(yàn)中，乙/丙均大于3，在瘤胃發(fā)酵類型中屬于乙酸發(fā)酵型，有利于反芻動(dòng)物乳脂率的提高。TVFA 和pH 之間有顯著的相關(guān)性，VFA 降低瘤胃的 pH[26]。本試驗(yàn)中，45、30 和 25、10 組的TVFA顯著高于其他組，而這些組的pH 最低。當(dāng)VFA 的產(chǎn)生速度快于瘤胃對(duì)其吸收速度時(shí)，瘤胃pH 下降。因此，pH 的降低與易發(fā)酵碳水化合物的攝入水平呈線性相關(guān)[3，27]。B.G.Fieser 等[28]給高羊茅干草補(bǔ)飼玉米比補(bǔ)飼大豆皮在OMD 上產(chǎn)生了負(fù)AE，NH3-N 濃度降低，但未影響瘤胃pH、TVFA 濃度和乙/丙。這與G.Copani 等[29]研究結(jié)果一致。

NH3-N 濃度是反映飼料在瘤胃中氮代謝、微生物蛋白質(zhì)合成和蛋白質(zhì)分解的一個(gè)重要指標(biāo)。維持合適的NH3-N 濃度是保證瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成的前提。瘤胃中適宜的 NH3-N 濃度為 6.3～27.5 mg·dL-1[30]。本試驗(yàn)中，各組的NH3-N 濃度均分布在此范圍內(nèi)，且45、30、15 和 25、10 組的 NH3-N 濃度顯著高于其他組。原因是這些組合促進(jìn)了瘤胃內(nèi)能量和氨氣的同步釋放和微生物蛋白的合成[31]。

3.4 各飼料組合的DMD和OMD

GP 與瘤胃微生物的活性及飼料的消化率呈正相關(guān)[14]。DMD 和OMD 是衡量飼料營養(yǎng)價(jià)值和有機(jī)物可利用性的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，隨著精料比例的降低（C∶R 由 40∶60 變?yōu)?30∶70 時(shí)），需要更少比例的打瓜籽殼（由 45、30 變?yōu)?25、10）或者更多比例的苜蓿（由 15、30 變?yōu)?45、60）才能取得最佳正 AE，即用優(yōu)質(zhì)的苜蓿彌補(bǔ)了精料的降低。原因是苜蓿具有相對(duì)高的有效降解率，苜蓿的碳氮比（C/N）更有利于微生物的生長(zhǎng)繁殖[32]，而且打瓜籽殼的產(chǎn)氣性能較好，優(yōu)于精料和苜蓿。40∶45∶15、40∶30∶30 和 30∶25∶45、30∶10∶60 各組合飼糧的 DMD 和 OMD 顯著增高，原因是這幾個(gè)飼糧組合中非結(jié)構(gòu)性碳水化合物含量增加，微生物易降解的營養(yǎng)成分增多。據(jù)報(bào)道，苜蓿日糧中瘤胃真菌孢子的數(shù)量顯著增加[33]。豆科植物可通過促進(jìn)纖維素分解菌的生長(zhǎng)來增加瘤胃纖維的消化率[34]。用苜蓿補(bǔ)飼劣質(zhì)飼料對(duì)飼料消化率、利用率、采食量AE 的報(bào)道很多[25]。用體外發(fā)酵法研究苜蓿添加到低質(zhì)牧草中在產(chǎn)氣量[35]、干物質(zhì)采食量和NDF 消化率[36-37]、動(dòng)物日增重[38]上均產(chǎn)生了正AE。Wang D.L.等[39]報(bào)道，給玉米秸稈日糧每天每只羊補(bǔ)飼苜蓿150～300 g 對(duì)小尾寒羊的采食量、飼料消化率、氮代謝、瘤胃環(huán)境和血液學(xué)參數(shù)均產(chǎn)生了最佳AE。隨著在泌乳奶牛苜蓿牧草基礎(chǔ)日糧中粉碎小麥比例的增加，瘤胃的pH 和日糧纖維消化率逐步下降[40]。將紅三葉草和基庫尤牧草青貯混合體外培養(yǎng)時(shí)，在OMD 上產(chǎn)生了正AE[41]。本試驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道相一致。

將春季牧草與玉米混合培養(yǎng)時(shí)，在GP、DMD、OMD、OMED 上產(chǎn)生了正AE，而秋季牧草與玉米或大麥混合培養(yǎng)時(shí)均產(chǎn)生了正AE[21]。將青干草和全燕麥不同配比飼喂馬，隨著燕麥比例的增加，飼料DM、OM 和能量消化率呈曲線形上升[42]。棗椰樹葉、三芒草屬尖刺、黃芪屬植物混合喂羊發(fā)現(xiàn)，隨著棗椰樹葉的增加，IVOMD 線性降低[43]。在稻草基礎(chǔ)日糧中補(bǔ)飼玉米淀粉飼喂羔羊發(fā)現(xiàn)，高水平的淀粉降低了纖維素酶活性、纖維素分解菌群數(shù)量和飼料的消化率；適量的淀粉提高了羔羊的生長(zhǎng)性能[44]。Niderkorn V.等[45]報(bào)道，鮮白三葉與黑麥草的配比為0.25～0.50時(shí)，動(dòng)物的采食量和飼料消化率最優(yōu)。2 種禾本科（鴨茅、黑麥草）與4 種豆科（紫花苜蓿、白三葉、紅三葉、紅豆草）牧草1∶1 混合體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，除了紅豆草外，其他3 種豆科牧草與禾本科牧草配比后均產(chǎn)生了正AE[46]。上述報(bào)道表明，添加苜?？筛纳频唾|(zhì)粗飼料的利用率，這與本試驗(yàn)中45、30 和25、10打瓜籽殼組中苜蓿改善打瓜籽殼的利用率相一致。

3.5 各飼料組合的組合效應(yīng)值

單項(xiàng)組合效應(yīng)指數(shù)（SFAEI）能在某一個(gè)指標(biāo)上評(píng)價(jià)飼料的AE。因?yàn)锳E 機(jī)制的復(fù)雜性，僅從某一個(gè)指標(biāo)來判斷，缺乏代表性[47]，易造成評(píng)價(jià)不準(zhǔn)確。因此，單獨(dú)用GP 指標(biāo)評(píng)定飼料的營養(yǎng)價(jià)值可能不準(zhǔn)確。飼料營養(yǎng)價(jià)值的評(píng)價(jià)應(yīng)采用綜合指標(biāo)或數(shù)學(xué)模型進(jìn)行全面、科學(xué)的評(píng)價(jià)。盧德勛[48]根據(jù)人工瘤胃GP 法不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定的各項(xiàng)指標(biāo)，提出了飼料AE 綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)體系——綜合組合效應(yīng)指數(shù)（MFAEI）。韓肖敏等[49]研究發(fā)現(xiàn)，玉米秸稈∶稻草為 60∶40、玉米秸稈∶稻草∶玉米秸稈青貯為 24∶16∶60、玉米秸稈∶稻草∶玉米秸稈青貯∶精料為 9.6∶6.4∶24∶60 的 MFAEI 最優(yōu)。AE 指標(biāo)包括動(dòng)物的養(yǎng)分消化率、利用率、能量、生長(zhǎng)性能和采食量。體外 GP 與 DOM 有高度相關(guān)性[11，50-52]。利用體外發(fā)酵GP 法評(píng)價(jià)飼料AE 的報(bào)道很多[53-56]。本試驗(yàn)通過體外發(fā)酵GP 法評(píng)價(jià)打瓜籽殼、苜蓿和精料之間的 AE，是結(jié)合 GP、DMD、OMD、VFA、NH3-N等指標(biāo)進(jìn)行多因素綜合評(píng)價(jià)后得出，45 和25 組的MFAEI 最優(yōu)，可能是由于這兩組不同比例飼料配比后營養(yǎng)物質(zhì)間的相互補(bǔ)充，提高了底物的發(fā)酵速率，促進(jìn)了飼料的消化率，即產(chǎn)生了正AE。綜上所述，精料∶打瓜籽殼∶苜蓿為 40∶45∶15 和 30∶25∶45 組，能有效改善產(chǎn)氣特性和瘤胃發(fā)酵48 h 后的飼料利用率。因此，將打瓜籽殼作為反芻動(dòng)物飼料，可節(jié)約常規(guī)飼料資源，減輕環(huán)境污染，緩解人畜爭(zhēng)糧矛盾。

4 結(jié)論

當(dāng)精料∶打瓜籽殼∶苜蓿為 40∶45∶15 和 30∶25∶45時(shí)，有最佳的 SFAEI（GP、DMD、OMD、NH3-N、TVFA的AE）和MFAEI。生產(chǎn)實(shí)踐中，打瓜籽殼可以作為奶牛的飼料飼喂，當(dāng) C∶R 為 40∶60 時(shí)，打瓜籽殼∶苜蓿按 45∶15 配比；當(dāng) C∶R 為 30∶70 時(shí)，打瓜籽殼∶苜蓿按 25∶45 配比。