三聚氰胺致貓慢性腎衰模型的建立

李嫣然，左之才，黃方園

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/動(dòng)物疫病與人類(lèi)健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都 611130）

貓慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是由原發(fā)或繼發(fā)腎臟病引起，導(dǎo)致承擔(dān)腎功能的腎單位絕對(duì)數(shù)減少70%以上，由此產(chǎn)生的各種臨床癥狀和代謝紊亂所組成的癥候群，其對(duì)腎臟損害具有漸進(jìn)性、不可逆性[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，慢性腎功能衰竭為貓最大的腎臟疾病，是導(dǎo)致貓死亡的第二大因素，10歲以上的貓患慢性腎衰比例約45%，且臨床雄貓、雌貓發(fā)病比率接近1.06∶1，無(wú)明顯性別差異[3]。引起貓CRF 的原因很多，一般認(rèn)為其與年齡、遺傳因素、飲食、環(huán)境和腎臟疾病有關(guān)，也可由急性腎功能衰竭轉(zhuǎn)化而來(lái)[4-5]。目前，由于貓CRF 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其病因不明。加之國(guó)內(nèi)相關(guān)研究較少，臨床上基本沒(méi)有特效治療藥物，僅能通過(guò)食物療法以及適當(dāng)?shù)膶?duì)癥治療來(lái)減輕腎臟的負(fù)擔(dān)[6-8]，故探尋一種適合于貓的CRF 動(dòng)物模型很有必要。

自2007年“美國(guó)寵物毒糧事件”[9]以來(lái)，三聚氰胺因其高含氮量被非法商販作為添加劑以提高貓糧中蛋白質(zhì)檢測(cè)數(shù)值，導(dǎo)致臨床上大量寵物貓因三聚氰胺中毒致腎衰死亡，引起各界廣泛關(guān)注。研究表明，三聚氰胺本身無(wú)毒或微毒[10-11]，但當(dāng)三聚氰胺與其同系物混合時(shí)，形成的三聚氰胺-三聚氰酸鹽在尿中溶解度低，造成結(jié)石損傷腎臟，引起腎衰，而對(duì)其他組織器官毒害作用小[12]。故本試驗(yàn)根據(jù)貓的生理代謝特性和三聚氰胺對(duì)貓腎臟毒害作用，建立貓慢性腎衰竭模型，為研究貓CRF 發(fā)病機(jī)理，篩選有效藥物，闡明療效機(jī)制提供有效模型基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

取2～4 周歲健康成年貓30 只（雅安市某流浪貓中心），雌雄不限，體重 2～4.5 kg，適應(yīng)性飼養(yǎng) 3～5 d。

1.1.2 試驗(yàn)試劑及儀器

材料：三聚氰胺（純度＞99%）（購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170306）、三聚氰酸（純度＞98%）（購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160203）。

儀器：自動(dòng)干式生化分析儀（愛(ài)科來(lái)醫(yī)療電子有限公司，型號(hào)：SP-4430）、全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（深圳市普康電子有限公司，型號(hào)：PE-6800VET）、尿液分析儀（愛(ài)科來(lái)醫(yī)療科技有限公司，型號(hào)：RT-4010）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

將30 只健康試驗(yàn)貓隨機(jī)分為4 組（見(jiàn)表1），設(shè)高劑量組（Ⅰ組，n=8）、中劑量組（Ⅱ組，n=8）、低劑量組（Ⅲ組，n=8）和空白對(duì)照組（Ⅳ組，n=6)飼喂三聚氰胺與三聚氰酸1∶1 混合物。試驗(yàn)組飼喂：將上述兩種試劑等比混合物按上述劑量用少量食用油溶解，摻入少量貓糧飼喂后，按正常貓食量添加貓糧和清潔飲用水，連續(xù)21 d，后再按1 次/兩日飼喂14 d（7次）；試驗(yàn)期間空白對(duì)照組飼喂相同貓糧，各組不限飲水；同條件環(huán)境下飼養(yǎng)（分組見(jiàn)表1）。

表1 試驗(yàn)貓分組給藥Table 1 Grouping of experimental cats mg·kg-1

1.2.2 動(dòng)物基本情況觀察

造模期間，定時(shí)觀察并記錄各組試驗(yàn)貓行為變化、生長(zhǎng)情況、死亡情況、尿量變化等，直至試驗(yàn)結(jié)束。

1.2.3 血液生理生化檢查

于 0、22、36 d 對(duì)各組活體用 5 mL 的真空采血管通過(guò)前肢靜脈（采血前12 h 不喂食）采集血液2.5 mL，其中0.5 mL 血液加入抗凝管中；檢測(cè)血肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、紅細(xì)胞壓積（HCT）等指標(biāo)。

1.2.4 尿常規(guī)檢查

于0、22、36 d 通過(guò)膀胱穿刺法采集各組活體尿液1 mL，用尿液分析儀檢測(cè)尿比重（SG）、蛋白質(zhì)（PRO）等指標(biāo)。

1.2.5 病理組織切片制作及觀察

造模期間，對(duì)死亡貓及時(shí)進(jìn)行解剖觀察，采集病理組織（腎臟）制作病理組織切片，進(jìn)行固定、石蠟包埋、切片、HE 染色、光鏡病理組織學(xué)檢查。

1.2.6 貓慢性腎衰模型建立的標(biāo)準(zhǔn)

參考國(guó)際腎臟權(quán)益組織(IRIS)貓慢性腎衰分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[13]，試驗(yàn)將血清肌酐濃度作為判斷貓腎衰程度的指標(biāo)。當(dāng)臨床表現(xiàn)多尿，輕度脫水、貧血，檢測(cè)肌酐濃度為 140～250 μmol/L，判定為輕度腎衰（失代償）；臨床表現(xiàn)少尿，中度或重度貧血，酸中毒，肌酐濃度 250～440 μmol/L，判定為中度腎衰（氮質(zhì)血癥）；臨床表現(xiàn)無(wú)尿，明顯嗜睡、尿中毒癥狀，肌酐濃度大于440 μmol/L，判定為重度腎衰（尿毒癥）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 軟件和SPSS22.0 軟件對(duì)各試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）的形式表示，P＜0.05 為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓臨床癥狀表現(xiàn)的影響

高劑量組貓于14 d 出現(xiàn)多飲多尿，食欲下降；20 d 時(shí)，多數(shù)貓的精神沉郁，少尿，活動(dòng)減少，蜷縮成一團(tuán)；28 d 時(shí)，其中兩只貓出現(xiàn)食欲廢絕，口臭，被毛粗亂，消瘦，嚴(yán)重脫水，精神高度沉郁，黏膜蒼白，并分別在 30、32 d 死亡，其他貓?jiān)?33～34 d 表現(xiàn)精神萎靡，被毛粗亂，消瘦，脫水。中劑量組貓?jiān)谠炷Ｇ捌诨緹o(wú)明顯臨床變化，在23 d 出現(xiàn)明顯多飲多尿，食欲下降，精神沉郁（活動(dòng)量減少），輕度脫水至中度脫水，黏膜蒼白、貧血，消瘦等癥狀。低劑量組貓?jiān)?2 d 前的精神、食欲和行為無(wú)明顯變化，在32 d后出現(xiàn)輕微多飲多尿。對(duì)照組無(wú)任何臨床癥狀。

2.2 三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓?bào)w重的影響

試驗(yàn) 0 d，各組體重差異不顯著（P＞0.05）；22 d，Ⅰ組貓?bào)w重顯著低于Ⅳ組（P＜0.05）；36 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組體重顯著低于Ⅳ組（P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組貓?bào)w重在22、36 d 均有所下降，但差異均不顯著（P＞0.05），Ⅳ組貓?bào)w重略有上升（P＞0.05）（見(jiàn)表2）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，三聚氰胺與三聚氰酸可引起貓?bào)w重下降。

2.3 三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓血清腎功能指標(biāo)的影響

試驗(yàn)0 d，各組貓的血肌酐差異不顯著（P＞0.05）；22 d 時(shí)，Ⅰ組貓血肌酐含量顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（P＜0.05）；36 d 時(shí)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組貓血肌酐含量顯著高于Ⅳ組（P＜0.05），且隨藥物劑量增大升高越顯著。組內(nèi)不同時(shí)間相比較，Ⅰ組貓22、36 d 的血肌酐含量顯著高于0 d（P＜0.05）；Ⅱ組、Ⅲ組貓血肌酐含量于0、22、36 d 隨時(shí)間增加而顯著升高（P＜0.05）；Ⅳ組貓血肌酐含量隨時(shí)間無(wú)顯著變化（P＞0.05）（見(jiàn)表3）?？梢?jiàn)，貓血肌酐含量可隨喂三聚氰胺、三聚氰酸時(shí)間的增加而升高，且隨劑量的增大而升高更顯著。

試驗(yàn)0d，各組貓尿素氮含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；造模22 d 時(shí)，Ⅰ組、Ⅱ組貓尿素氮顯著高于Ⅳ組（P＜0.05），Ⅲ組與Ⅳ組貓尿素氮含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；36 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組貓尿素氮含量均顯著高于Ⅳ組（P＜0.05），其中，Ⅰ組與Ⅱ組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。組內(nèi)不同時(shí)間相比較，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組貓于22、36 d 的尿素氮含量均顯著高于0 d（P＜0.05），且隨時(shí)間增加而升高（見(jiàn)表3）。貓尿素氮隨喂三聚氰胺、三聚氰酸時(shí)間的增加可顯著升高，且與劑量正相關(guān)。

綜上結(jié)果，三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓血清肌酐、尿素氮的影響變化趨勢(shì)是隨著劑量的增加和飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著升高。

表2 三聚氰胺及三聚氰酸致貓CRF 模型體重比較（±SD）Table 2 Weight comparison of cat CRF models Induced by mlamine and cyanuric acid（±SD） kg

表2 三聚氰胺及三聚氰酸致貓CRF 模型體重比較（±SD）Table 2 Weight comparison of cat CRF models Induced by mlamine and cyanuric acid（±SD） kg

注：*Ⅰ組貓于 30 d、32 d 死亡兩只，故 36 d 時(shí) n=6；標(biāo)有不同大寫(xiě)字母的數(shù)據(jù)之間差異顯著（P＜0.05），右下標(biāo)表示同時(shí)間點(diǎn)組間相比，右上標(biāo)表示組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)相比。下表同。Note：*Because the two cats in group Ⅰ died on 30 d and 32 d，there were 6 cats lef on 36 d；Data with different capital letters differ significantly（P＜0.05），the right subscript represents the comparison between groups of time points，and the right superscript represents the comparison between groups of different time points.The same as below.

時(shí)間TimeⅠ組（n=8*）Group ⅠⅡ組（n=8）Group ⅡⅢ組（n=8）Group ⅢⅣ組（n=6）Group Ⅳ3.77±0.41AA 3.84±0.45BA 3.98±0.41BA 0 d 22 d 36 d 3.46±0.57AA 3.21±0.68AA 3.31±0.25AA 3.59±0.33AA 3.47±0.33ABA 3.31±0.34AA 3.40±0.46AA 3.36±0.43ABA 3.32±0.44AA

2.4 三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓血液生理指標(biāo)的影響

試驗(yàn)0 d，各組貓RBC 處于正常范圍，無(wú)顯著差異（P＞0.05）；22 d，Ⅱ組貓 RBC 顯著低于Ⅳ組（P＜0.05），Ⅰ組、Ⅲ組與Ⅳ組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；36 d，Ⅰ組、Ⅱ組貓RBC 顯著低于Ⅲ組與Ⅳ組（P＜0.05）。Ⅰ組、Ⅱ組貓于 36 d 的 RBC 顯著低于 0 d（P＜0.05），Ⅲ組與Ⅳ組0、22、36 d 隨時(shí)間變化無(wú)顯著差異（P＞0.05）。Ⅰ組、Ⅱ組貓RBC 隨時(shí)間不斷降低，而Ⅲ組并未降低。表明貓RBC 隨三聚氰胺、三聚氰酸劑量的加大而降低（見(jiàn)表4）。

0 d 時(shí)，各組貓 HCT 差異不顯著（P＞0.05）；22 d，Ⅰ組顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組（P＜0.05）；36 d，Ⅰ組、Ⅱ組均顯著高于Ⅲ組、Ⅳ組（P＜0.05）。Ⅰ組貓22、36 d的 HCT 顯著高于 0 d（P＜0.05），Ⅱ組于 36 d 時(shí)顯著高于 0、22 d（P＜0.05）；Ⅲ組、Ⅳ組貓 0、22、36 d 各時(shí)間點(diǎn)的 HCT 無(wú)顯著差異（P＞0.05）。可知，Ⅰ組、Ⅱ組HCT 均隨時(shí)間顯著升高，并超出正常范圍（見(jiàn)表4）。

由此可見(jiàn)，貓RBC 的降低與HCT 的升高均需要三聚氰胺與三聚氰酸達(dá)到一定劑量水平的刺激，才會(huì)發(fā)生，且劑量越大，其RBC 下降、HCT 升高越顯著。

2.5 三聚氰胺與三聚氰酸對(duì)貓尿生化指標(biāo)的影響

0 d 時(shí)，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組尿比重與Ⅳ組無(wú)顯著差異（P＞0.05），22 d，Ⅰ組、Ⅱ組尿比重水平顯著低于Ⅲ組、Ⅳ組（P＜0.05），36 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組尿比重均顯著低于Ⅳ組（P＜0.05）。相比 0 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組 36 d 時(shí)尿比重均顯著下降（P＜0.05），且Ⅰ組、Ⅱ組相比Ⅲ組下降更迅速?？芍虮戎氐淖兓?，除Ⅰ組先下降后稍升高外，Ⅱ組、Ⅲ組均隨時(shí)間持續(xù)下降（見(jiàn)表5）。

0 d 時(shí)，各組貓尿蛋白含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；22 d，Ⅰ組、Ⅱ組尿蛋白顯著高于Ⅲ組、Ⅳ組（P＜0.05），且Ⅰ組顯著高于Ⅱ組（P＜0.05）；36 d，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組尿蛋白顯著高于Ⅳ組（P＜0.05）。Ⅰ組、Ⅱ組 22 d、36 d 尿蛋白含量顯著高于 0 d（P＜0.05），Ⅲ組 36 d 尿蛋白顯著高于 0、22 d（P＜0.05），Ⅳ組無(wú)變化（P＞0.05）。Ⅰ組尿蛋白升高迅速，之后稍有下降，而Ⅱ組、Ⅲ組隨時(shí)間持續(xù)穩(wěn)定上升（見(jiàn)表5）。

表3 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型血清腎功能指標(biāo)比較（±SD）Table 3 Comparison of serum renal function indexes of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

表3 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型血清腎功能指標(biāo)比較（±SD）Table 3 Comparison of serum renal function indexes of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

指標(biāo)Indicators時(shí)間TimeⅠ組（n=8*）Group ⅠⅡ組（n=8）Group ⅡⅢ組（n=8）Group ⅢⅣ組（n=6）Group ⅣCRE/（μmol·L-1）BUN/（mmol·L-1）0 d 22 d 36 d 0 d 22 d 36 d 92.13±15.88AA 405.13±266.17BB 429.33±26.23DB 8.80±1.45AA 24.24±10.39CB 25.98±1.14CB 89.25±11.44AA 230.00±53.31AB 323.88±59.24CC 8.31±1.25AA 16.85±2.54BB 26.29±4.13CC 88.25±11.37AA 141.00±10.81AB 173.50±15.06BC 7.73±0.93AA 13.83±1.75ABB 15.38±1.10BC 86.53±13.90AA 93.53±12.13AA 87.27±11.35AA 8.19±1.32AA 8.55±1.12AA 8.35±1.04AA

表4 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型血生理指標(biāo)比較（±SD）Table 4 Comparison of blood physiological indexes of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

表4 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型血生理指標(biāo)比較（±SD）Table 4 Comparison of blood physiological indexes of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

指標(biāo)Indicators時(shí)間TimeⅠ組（n=8*）Group ⅠⅡ組（n=8）Group ⅡⅢ組（n=8）Group ⅢⅣ組（n=6）Group ⅣRBC/（1012 個(gè)·L-1）HCT/%0 d 22 d 36 d 0 d 22 d 36 d 5.92±0.73AB 5.03±1.48ABB 3.80±0.46AA 32.9±4.5AA 46.0±13.7BB 54.8±7.2BB 5.62±0.64AB 4.80±0.40AA 4.26±0.54AA 31.3±2.6AA 32.1±10.5AA 51.1±6.9BB 5.54±0.46AA 5.42±0.77ABA 5.88±1.15BA 31.7±2.6AA 30.2±5.8AA 31.9±6.3AA 6.00±0.76AA 6.03±0.66BA 6.21±0.80BA 32.5±2.7AA 33.7±1.8AA 34.5±1.6AA

表5 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型尿生化指標(biāo)比較（±SD）Table 5 Comparison of urinary biochemical indices of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

表5 三聚氰胺與三聚氰酸致貓CRF 模型尿生化指標(biāo)比較（±SD）Table 5 Comparison of urinary biochemical indices of cat CRF model induced by melamine and cyanuric acid（±SD）

指標(biāo)Indicators時(shí)間TimeⅠ組（n=8*）Group ⅠⅡ組（n=8）Group ⅡⅢ組（n=8）Group ⅢⅣ組（n=6）Group Ⅳ尿比重尿蛋白/（mg·dL-1）0 d 22 d 36 d 0 d 22 d 36 d 1.040±0.005BB 1.019±0.009AA 1.024±0.004BA 0.0±0.0AA 26.3±6.9CB 20.0±7.7BB 1.037±0.003ABB 1.018±0.006AA 1.017±0.004AA 0.0±0.0AA 15.0±11.3BB 16.9±12.5BB 1.035±0.003AC 1.031±0.003BB 1.022±0.004BA 0.0±0.0AA 5.6±7.8AA 18.8±6.9BB 1.037±0.002ABA 1.036±0.001BA 1.037±0.003CA 0.0±0.0AA 0.0±0.0AA 0.0±0.0AA

由此可見(jiàn)，三聚氰胺與三聚氰酸可引起貓尿比重下降、產(chǎn)生尿蛋白，且劑量越高其尿比重下降、尿蛋白升高越顯著。

2.6 三聚氰胺與三聚氰酸建立貓慢性腎衰模型成功情況

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，參考國(guó)際腎臟權(quán)益組織（IRIS）貓慢性腎衰分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，判定Ⅰ組貓中度腎衰4 只（50%）、重度腎衰 2 只（25%）、死亡 2 只（25%），成功率 75%。Ⅱ組貓輕度腎衰1 只（12.5%）、中度腎衰7 只（87.5%），成功率100%。Ⅲ組貓輕度腎衰8 只（100%），成功率100%。Ⅳ組貓全為健康（100%）（見(jiàn)表6）。據(jù)表統(tǒng)計(jì)所知，三聚氰胺與三聚氰酸用量越大，對(duì)貓腎臟造成的損傷越嚴(yán)重，且易致死亡。

表6 三聚氰胺與三聚氰酸建立貓CRF 模型成功率Table 6 Success rate of establishing cat CRF model with melamine and cyanuric acid %

圖1 高劑量組死亡貓腎臟病理學(xué)觀察Figure 1 Histopathological observation of kidney of dead cats in high dose group

2.7 死亡貓病理組織學(xué)檢查結(jié)果

高劑量組死亡貓剖檢可見(jiàn)腎臟呈白色，稍腫大。組織病理學(xué)觀察可見(jiàn)（圖1A，B），腎臟組織被膜完整，略有增厚；腎臟結(jié)構(gòu)呈彌漫凝固性壞死，腎小球腫大變性、球內(nèi)血管袢結(jié)構(gòu)破壞、系膜細(xì)胞以及足細(xì)胞溶解脫落、腎小囊內(nèi)可見(jiàn)脫落的一些碎片組織和絮狀或顆粒樣物質(zhì)。腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、壞死，細(xì)胞脫落在管腔中央形成腎小管上皮細(xì)胞管型，管腔內(nèi)可見(jiàn)蛋白樣物質(zhì)沉積，壞死周?chē)糠止芮徊灰?guī)則彎曲變性，腎小管中未見(jiàn)晶體出現(xiàn)。

3 討論與結(jié)論

貓慢性腎衰的發(fā)病率為9.6%，其中12 歲以上貓CRF 發(fā)病率為28%，15 歲以上貓發(fā)病率為30%[14]。貓慢性腎功能衰竭是指腎小球損傷，腎小球?yàn)V過(guò)率下降，腎代謝紊亂的綜合征[15]。隨著生活水平的提高，臨床病例中老齡貓的比例顯著升高，而腎衰竭是老齡貓臨床多發(fā)的主要代謝疾病。在我國(guó)，10 歲以上患慢性腎衰的犬約有20%，而10 歲以上患病的貓則約有45%[16]，其原因主要與貓的身體結(jié)構(gòu)以及飲食習(xí)慣有關(guān)。貓單側(cè)腎臟的腎單位是20 萬(wàn)，數(shù)量?jī)H為犬的一半[17]，當(dāng)動(dòng)物雙側(cè)腎單位功能喪失約75%時(shí)就會(huì)發(fā)生腎衰竭；且貓作為肉食性動(dòng)物其日常所需蛋白含量是其他雜食性動(dòng)物的4～5 倍，高蛋白飲食可增加腎功能負(fù)擔(dān)，加重慢性腎衰的進(jìn)程[18]。另有資料顯示，2007年3月至今，已有4 000 多起貓、狗等寵物因三聚氰胺中毒而腎衰死亡的案例，對(duì)寵物行業(yè)造成巨大損失[19]。由于CRF 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床對(duì)于該病的治療僅能通過(guò)保守療法延緩腎衰的發(fā)展進(jìn)程。因此建立貓慢性腎衰模型，對(duì)研究貓CRF 發(fā)病機(jī)理，篩選有效藥物，闡明療效機(jī)制有重要作用。

目前，腎大部切除法和0.75%腺嘌呤飲食是建立慢性腎衰模型常用的兩種方法。腎大部切除法普遍需要較強(qiáng)的技術(shù)性，并且周期長(zhǎng)，手術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化不高，模型動(dòng)物易出現(xiàn)應(yīng)激、厭食和死亡率高等缺點(diǎn)[20]；0.75%腺嘌呤飲食受藥物劑量、用藥周期和動(dòng)物類(lèi)別差異影響較大，導(dǎo)致對(duì)腎臟損害程度不好把握，同時(shí)又會(huì)對(duì)其他組織器官產(chǎn)生較強(qiáng)毒性[21]。故本研究采用三聚氰胺與三聚氰酸混合飼喂的方式建立貓慢性腎衰模型。據(jù)報(bào)道，貓大量或長(zhǎng)期攝入一定劑量的三聚氰胺會(huì)產(chǎn)生腎結(jié)石，引起腎功能衰竭，且三聚氰胺主要對(duì)泌尿系統(tǒng)尤其是腎臟造成損害，而對(duì)其他組織器官毒害作用小[11，22]。如R.E.Cianciolo等對(duì)2007年死于三聚氰胺污染的貓剖檢發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺主要對(duì)腎造成損害，腎組織病理檢查見(jiàn)腎小管壞死伴增生，管內(nèi)有大量結(jié)晶以及腎間質(zhì)纖維化和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)[23]。在本試驗(yàn)中，死亡貓組織病理學(xué)觀察可見(jiàn)腎小球腫大變性，腎小管形成上皮細(xì)胞管型，管內(nèi)蛋白質(zhì)沉積，管腔不規(guī)則彎曲變性，而腎小管內(nèi)未見(jiàn)有結(jié)晶出現(xiàn)，與李翠枝等[24]的結(jié)果較一致，分析其原因可能是腎臟中三聚氰胺濃度尚不足以形成可見(jiàn)晶體沉積于腎小管。

本研究采用高（20 mg/kg）、中（10 mg/kg）、低（5 mg/kg）劑量的三聚氰胺與三聚氰酸混合物飼喂貓5 周后，造模組貓血肌酐、尿素氮升高，紅細(xì)胞下降、紅細(xì)胞壓積升高，尿比重下降、尿蛋白升高；臨床表現(xiàn)為被毛粗亂、多飲多尿、后少尿、精神食欲下降、逐漸消瘦、貧血脫水、口臭等癥狀，與臨床貓CRF 相關(guān)研究表現(xiàn)一致[1]。目前建立慢性腎衰動(dòng)物模型的關(guān)鍵是損傷腎臟并持續(xù)發(fā)展惡化，同時(shí)保證較低的死亡率[25]。本研究中，高劑量組貓?jiān)谠囼?yàn)中期便出現(xiàn)明顯腎衰表現(xiàn)，并在后期死亡2 只，其發(fā)展進(jìn)程較快，死亡率較高，未能建立穩(wěn)定的慢性腎衰模型；而中、低劑量組貓腎衰表現(xiàn)是于試驗(yàn)后期呈進(jìn)行性出現(xiàn)的，且未有貓死亡，其血、尿生理生化指標(biāo)較高劑量組指標(biāo)進(jìn)展更為穩(wěn)定，故中、低劑量組為成功建立的穩(wěn)定的貓CRF 模型。采用此方法建立的貓CRF 動(dòng)物模型不僅試驗(yàn)周期短、操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性高，且克服了藥物法對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物其他組織產(chǎn)生較強(qiáng)毒性，死亡率高等缺點(diǎn)。此外，選用貓作為試驗(yàn)動(dòng)物具備良好的臨床相似性。不過(guò)該法也存在不足之處，如貓作為試驗(yàn)動(dòng)物成本較高以及雄貓較雌貓更易發(fā)生腎結(jié)石而致試驗(yàn)結(jié)果受到影響。

綜上，本研究通過(guò)三聚氰胺與三聚氰酸混合飼喂的方式成功建立了穩(wěn)定的貓慢性腎衰竭模型，為研究貓慢性腎功能衰竭致病機(jī)理及臨床治療藥物的篩選奠定基礎(chǔ)。