桑葉生物堿對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肝損傷的改善作用及機(jī)理

王祖文，楊忠敏，楊 敏，黃先智，丁曉雯,*

（1.西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶市農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，食品科學(xué)與工程國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，重慶 400716；2.西南大學(xué)科技處，重慶 400716）

肝損傷可由藥物副作用、過量飲酒、攝入環(huán)境中的某些有毒物質(zhì)、長(zhǎng)期高脂飲食等因素引起[1]，是危害人類身體健康最常見的疾病之一。隨著人們生活水平的提高，高脂食物在日常飲食中占比越來越高。研究表明，高脂飲食會(huì)導(dǎo)致非酒精性脂肪肝，造成由單純性脂肪肝轉(zhuǎn)變?yōu)榉蔷凭灾靖窝祝M(jìn)一步演變成肝硬化甚至是肝癌[2]。高脂飲食造成的肝損傷具體表現(xiàn)在機(jī)體內(nèi)臟脂肪堆積、糖脂代謝異常、胰島素抵抗、肝臟脂肪變性、肝細(xì)胞膜受損、出現(xiàn)炎癥和氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等方面[3]。

近年來大量研究證明中藥有治療肝損傷的作用，如葛根、苦參、柴胡等[4]，它們含有多糖、黃酮、生物堿等多種功能成分，具有維護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟細(xì)胞膜完整，抑制血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）水平升高，清除機(jī)體自由基、增加抗氧化能力，降低肝損傷動(dòng)物體內(nèi)腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6、IL-1β的水平、減少炎癥反應(yīng)，減緩肝細(xì)胞凋亡等作用[5]。桑葉為藥食同源，生物堿是桑葉的主要活性成分之一。研究表明，桑葉生物堿具有降糖[6]、降脂[7]、抑制病毒活性[8]、抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[9]、減輕腎損傷[10]等作用，但目前關(guān)于桑葉生物堿對(duì)肝損傷的保護(hù)作用鮮有報(bào)道。因此，本研究采用高脂飲食建立小鼠肝損傷模型，以桑葉生物堿為研究對(duì)象，初步探討桑葉生物堿改善高脂飲食小鼠肝損傷的作用與機(jī)理，為桑葉保護(hù)肝臟相關(guān)保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)，為桑葉產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供新思路，為高脂飲食導(dǎo)致肝損傷的預(yù)防和治療提供新的方向。

1 材料與方法

1.1 材料、動(dòng)物與試劑

桑葉（品種為‘勝利大葉’）粉末由重慶畜牧科學(xué)院蠶研所提供。

清潔級(jí)雄性昆明小鼠200 只（4 周齡），體質(zhì)量（20±2）g，由重慶中藥研究院提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（渝）2012-0006。

基礎(chǔ)飼料 重慶滕鑫比爾實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司；高脂飼料為實(shí)驗(yàn)室自制，配方參照文獻(xiàn)[11]進(jìn)行適當(dāng)修改：基礎(chǔ)飼料78.9%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）、豬油10%、蛋黃粉10%、膽固醇1%、膽酸鈉0.1%。

AST、ALT測(cè)定試劑盒 南京建成生物工程研究所；蘇木精染液、伊紅染液 南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材有限公司；動(dòng)物組織RNA提取試劑盒、cDNA第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒 北京天根生化科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

EG1105H型石蠟切片機(jī) 德國(guó)Leica公司；包埋盒江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司；DHP-9082型恒溫培養(yǎng)箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；生物顯微鏡日本OLYMPUS株式會(huì)社；ALPAAI-4LSC型高速離心機(jī)德國(guó)Christ公司；DW-HL438型超低溫冰箱 合肥美菱股份有限公司；XW-80A型微型漩渦混合儀 上海精科實(shí)業(yè)有限公司；Synergy H1型酶標(biāo)儀 美國(guó)基因有限公司；5880型冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；NanoDrop ND-2000C型微量紫外分光光度計(jì)、CFX96型實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）儀、T100型PCR儀 美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 方法

1.3.1 桑葉生物堿制備

按料液比1∶30（m/V）稱取桑葉粉，60 ℃、600 W超聲處理60 min，重復(fù)提取2 次，合并濾液，減壓濃縮；將濃縮液以2.1 BV/h流速過D101大孔樹脂得到純化液；再將純化液以2.5 BV/h流速過732型陽離子樹脂吸附，先用蒸餾水洗至中性，再用2 BV 0.5 mol/L氨水洗脫得到氨水洗脫液；將氨水洗脫液以2.1 BV/h流速過AB-8大孔樹脂，洗脫液冷凍干燥得樣品[12-13]。采用硅鎢酸沉淀法[14]測(cè)得樣品中總生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85.57%。

1.3.2 動(dòng)物分組及飼養(yǎng)

本研究獲得西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)協(xié)會(huì)許可，小鼠按照西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)和使用規(guī)則飼養(yǎng)，室溫22～25 ℃，相對(duì)濕度40%～60%，12 h明暗交替（9∶00～21∶00），自由進(jìn)食、飲水。200 只昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組和低、中、高劑量組（桑葉生物堿劑量分別為50、100、200 mg/kg）5 組，每組40 只。除正常對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料外，其余組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。桑葉生物堿各劑量組灌胃0.1 mL/10 g不同劑量桑葉生物堿，正常對(duì)照組和高脂對(duì)照組給予等量生理鹽水，每日1 次，連續(xù)灌胃16 周。每次灌胃前稱體質(zhì)量以調(diào)整給藥體積。

1.3.3 肝臟系數(shù)的測(cè)定及肝組織病理學(xué)觀察

分別于灌胃的第4、8、12、16周末處死各組小鼠各10 只。小鼠禁食不禁水16 h，眼球取血于含有肝素鈉的真空采血管中，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，收集上清液，于-80 ℃保存?zhèn)溆?。采血完畢后，頸椎脫臼處死小鼠，快速取出肝臟，用冷生理鹽水漂洗除去表面血液，濾紙拭干，稱質(zhì)量，按下式計(jì)算肝臟系數(shù)[11]。在肝臟同一位置切取小塊肝組織，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%福爾馬林溶液固定48 h，石蠟包埋，切片（5 μm），蘇木精-伊紅染色，在顯微鏡下進(jìn)行肝組織病理學(xué)觀察。

1.3.4 血漿AST、ALT活力測(cè)定

血漿AST、ALT活力的測(cè)定按照相應(yīng)試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

1.3.5 肝組織TNF-α、IL-10、Bax、Bcl-2 mRNA表達(dá)的測(cè)定

按照動(dòng)物組織RNA提取試劑盒說明書提取純化操作方法提取肝臟組織總RNA，對(duì)RNA進(jìn)行純度測(cè)定。按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。取上述反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物1 μL作為反應(yīng)模板，反應(yīng)體系10 μL。引物由北京六合華大基因科技有限公司合成，如表1所示。qRT-PCR條件：95 ℃、4 min；95 ℃、15 s，60 ℃、30 s，共40 個(gè)循環(huán)。以β-actin作內(nèi)參基因，分別測(cè)定肝組織TNF-α、IL-10、Bax、Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果以2-ΔΔCt法計(jì)算。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences used in this study

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 20.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異顯著。采用Origin 8.6軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 桑葉生物堿對(duì)肝臟系數(shù)的影響

在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，臟器質(zhì)量和臟器系數(shù)是藥物慢性實(shí)驗(yàn)指定檢測(cè)項(xiàng)目，通過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臟器質(zhì)量、臟器系數(shù)可大體確定臟器損傷或病變的程度[15]。本研究測(cè)定了桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠肝臟系數(shù)的影響，結(jié)果如表2所示。

表2 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝臟系數(shù)的影響Table 2 Effect of mulberry leaf alkaloids on liver index in mice

由表2可知，與正常對(duì)照組相比，喂飼4、8、12、16 周后，高脂對(duì)照組小鼠肝臟系數(shù)分別顯著增加了10.67%、11.24 %、12.38%、7.58%（P＜0.05），提示高脂飲食可能會(huì)導(dǎo)致小鼠的肝臟損傷。與高脂對(duì)照組相比，除低劑量組在灌胃4 周時(shí)肝臟系數(shù)未下降外，其余時(shí)間各劑量組小鼠的肝臟系數(shù)均顯著下降（P＜0.05），并于8 周末恢復(fù)到正常水平，與正常對(duì)照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠ALT、AST活力的影響

ALT、AST主要分布于肝細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)損傷或壞死時(shí)，肝細(xì)胞膜通透性增加，ALT、AST被釋放入血，引起血液中含量上升，因此血液中ALT、AST活力的升高反映了肝臟損傷程度[16-17]。本研究測(cè)定了各組小鼠血漿AST、ALT活力，以考察桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠肝損傷的影響。

2.2.1 桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠血漿AST活力的影響

表3 桑葉生物堿對(duì)小鼠血漿AST活力的影響Table 3 Effect of mulberry leaf alkaloids on plasma AST activity in mice

由表3可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠血漿AST活力基本保持穩(wěn)定。與正常對(duì)照組比，高脂對(duì)照組小鼠血漿AST活力顯著升高（P＜0.05），且隨著喂飼高脂飼料時(shí)間的延長(zhǎng)，AST活力呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)，在第4、8、12、16周，小鼠血漿AST活力分別增加了48.02%、53.44%、71.16%、82.06%，說明持續(xù)攝入高脂飲食會(huì)不斷加重肝細(xì)胞損傷，破壞細(xì)胞膜，釋放出大量AST。與高脂對(duì)照組比，隨著桑葉生物堿灌胃劑量增加和灌胃時(shí)間延長(zhǎng)，各劑量組的小鼠血漿AST活力均有所下降。灌胃至16 周末，低、中、高劑量組小鼠血漿AST活力分別下降了29.84%、42.02%、46.44%，中、高劑量組小鼠的AST活力恢復(fù)到正常水平，與正常對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.2.2 桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠血漿ALT活力的影響

表4 桑葉生物堿對(duì)小鼠血漿ALT活力的影響Table 4 Effect of mulberry leaf alkaloids on plasma ALT activity in mice

由表4可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠血漿ALT活力基本保持穩(wěn)定。與同時(shí)期的正常對(duì)照組比，第4、8、12、16周末，高脂對(duì)照組小鼠血漿ALT活力分別增長(zhǎng)了83.33%、57.12%、62.85%、70.41%（P＜0.05）。與高脂對(duì)照組比，隨著桑葉生物堿灌胃劑量增加和時(shí)間延長(zhǎng)，各劑量組小鼠血漿ALT活力均有所下降。從第12周末開始，中、高劑量桑葉生物堿灌胃的小鼠血漿ALT活力均恢復(fù)到正常水平，與正常對(duì)照組比差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠肝組織病理學(xué)的影響

肝臟組織結(jié)構(gòu)能夠直觀反映肝臟的損傷程度。為了研究桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠肝臟的影響，通過對(duì)各實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟染色、鏡檢，考察灌胃桑葉生物堿粗提取液4、8、12、16 周后對(duì)小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果如圖1所示。

圖1 各組小鼠肝組織病理切片圖（100×）Fig. 1 Histomorphological images of liver tissue in each group (100 ×)

由圖1可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)形態(tài)正常、質(zhì)地均勻，肝細(xì)胞呈規(guī)則多邊形，大小相似，胞質(zhì)極豐富，細(xì)胞核清晰易見。隨著高脂飼料喂飼時(shí)間的延長(zhǎng)，高脂對(duì)照組小鼠肝組織胞漿內(nèi)分布的脂滴逐漸增加，部分細(xì)胞核被脂滴擠壓至胞漿邊緣，周圍可見彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，大量肝細(xì)胞明顯腫脹。隨著低、中劑量桑葉生物堿灌胃時(shí)間的延長(zhǎng)，肝細(xì)胞的形態(tài)與排布逐漸趨于正常，肝組織胞漿內(nèi)脂滴、肝細(xì)胞紊亂有所改善；而整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，當(dāng)灌胃高劑量桑葉生物堿時(shí)，小鼠肝組織形態(tài)、大小基本恢復(fù)正常，脂肪的聚集現(xiàn)象不明顯，細(xì)胞核的大小均較正常，肝細(xì)胞呈多邊形，與正常對(duì)照組比無明顯差異。

2.4 桑葉生物堿對(duì)肝臟炎癥因子mRNA表達(dá)的影響

炎癥反應(yīng)與一些細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6、IL-10等密切相關(guān)。在肝臟損傷的過程中，炎癥體被激活是一種常見的病理生理過程[18]。TNF-α是一種由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的單核因子，具有促炎作用[19]。肝臟中許多細(xì)胞都能分泌IL-10，其具有消除炎癥的作用[20]。如果肝臟發(fā)生損傷，TNF-α mRNA表達(dá)量增加，而IL-10 mRNA表達(dá)量減少。因此，本研究著重考察肝臟組織中TNF-α、IL-10 mRNA表達(dá)情況，從而判斷高脂飲食誘導(dǎo)肝臟損傷的炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度和桑葉生物堿是否具有抑制炎癥的作用。

2.4.1 桑葉生物堿對(duì)肝組織TNF-α mRNA表達(dá)的影響

圖2 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝組織TNF-α mRNA表達(dá)的影響Fig. 2 Effect of mulberry leaf alkaloids on the mRNA expression of TNF-α in liver tissue of mice

由圖2可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠肝臟TNF-α mRNA表達(dá)水平基本保持穩(wěn)定。與正常對(duì)照組比，高脂對(duì)照組小鼠肝臟TNF-α mRNA表達(dá)水平顯著上升（P＜0.05），在4、8、12、16 周末分別增加了233.33%、225.60%、222.03%、217.09%，說明高脂飲食引起炎癥反應(yīng)，小鼠肝細(xì)胞中TNF-α mRNA表達(dá)水平增加，但與喂飼時(shí)間無明顯關(guān)系。與高脂對(duì)照組比，隨著桑葉生物堿灌胃時(shí)間的延長(zhǎng)，各劑量組小鼠肝臟TNF-α mRNA表達(dá)量均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)；在16 周末，灌胃低、中、高劑量桑葉生物堿小鼠肝臟TNF-α mRNA表達(dá)量分別下降了47.41%、48.90%、68.56%，高劑量組小鼠的TNF-α mRNA表達(dá)量恢復(fù)至正常水平，與正常對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.4.2 桑葉生物堿對(duì)肝組織IL-10 mRNA表達(dá)的影響

圖3 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝組織IL-10 mRNA表達(dá)的影響Fig. 3 Effect of mulberry leaf alkaloids on the mRNA expression of IL-10 in liver tissue of mice

由圖3可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠肝臟IL-10 mRNA表達(dá)量基本保持穩(wěn)定。與正常對(duì)照組比，高脂對(duì)照組小鼠IL-10 mRNA表達(dá)量顯著降低（P＜0.05），隨著喂飼時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，4、8、12、16 周分別降低了26.49%、41.69%、42.34%、57.04%。與高脂對(duì)照組比，灌胃桑葉生物堿的各劑量組小鼠肝臟IL-10 mRNA表達(dá)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸上升；在16 周末，低、中、高劑量組小鼠肝臟IL-10 mRNA表達(dá)量分別提高了70.64%、137.12%、155.30%；且中、高劑量組IL-10 mRNA表達(dá)量恢復(fù)至正常水平，與正常對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.5 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝臟細(xì)胞凋亡因子表達(dá)的影響

肝損傷通常會(huì)引起肝細(xì)胞的凋亡，其中Bcl-2家族參與介導(dǎo)細(xì)胞的凋亡[21]，具有代表性的是促進(jìn)細(xì)胞凋亡因子Bax和抑制細(xì)胞凋亡因子Bcl-2，其在細(xì)胞凋亡調(diào)控中起重要的作用。肝組織中Bcl-2水平升高和Bax水平降低表明細(xì)胞對(duì)凋亡的抵抗性增強(qiáng)，標(biāo)志著藥物對(duì)肝臟有保護(hù)作用[22-23]。因此，本研究考察桑葉生物堿對(duì)高脂飲食小鼠細(xì)胞凋亡因子Bax和Bcl-2 mRNA表達(dá)量的影響。

2.5.1 桑葉生物堿對(duì)肝組織Bax mRNA表達(dá)的影響

圖4 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝組織Bax mRNA表達(dá)的影響Fig. 4 Effect of mulberry leaf alkaloids on the mRNA expression of Bax in liver tissue of mice

由圖4可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠肝組織Bax mRNA表達(dá)量基本保持穩(wěn)定。與正常對(duì)照組比，高脂對(duì)照組小鼠的肝組織Bax mRNA表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），于4、8、12、16 周分別升高了216.00%、250.00%、217.39%、213.04%。與高脂對(duì)照組比，灌胃桑葉生物堿的各劑量組小鼠Bax mRNA表達(dá)量顯著下降（P＜0.05），且隨著喂飼時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降；在16 周末，桑葉生物堿低、中、高劑量組小鼠肝臟Bax mRNA表達(dá)量分別下降了43.06%、51.39%、68.06%，高劑量組小鼠該指標(biāo)恢復(fù)至正常水平，與正常對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.5.2 桑葉生物堿對(duì)肝組織Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響

圖5 桑葉生物堿對(duì)小鼠肝組織Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響Fig. 5 Effect of mulberry leaf alkaloids on the mRNA expression of Bcl-2 in liver tissue of mice

由圖5可知，實(shí)驗(yàn)期間正常對(duì)照組小鼠肝組織Bcl-2 mRNA表達(dá)量基本保持穩(wěn)定。與正常對(duì)照組比，高脂對(duì)照組Bcl-2 mRNA表達(dá)量顯著下降（P＜0.05），于4、8、12、16 周分別下降了44.64%、44.44%、50.00%、38.46%。與高脂對(duì)照組比，灌胃桑葉生物堿中、高劑量組小鼠Bcl-2 mRNA表達(dá)量在4 周末顯著升高（P＜0.05）；而低劑量組小鼠Bcl-2 mRNA表達(dá)量在8 周末顯著升高（P＜0.05）；12 周末，灌胃桑葉生物堿的低、中、高劑量組小鼠肝臟Bcl-2 mRNA表達(dá)量分別上升了59.26%、77.78%、74.07%，均恢復(fù)至正常水平，與正常對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

3 討 論

桑葉廣泛分布于全國(guó)各地，其作為中藥的歷史悠久。2015版《中華人民共和國(guó)藥典》中記載桑葉“甘、苦、寒，歸肺、肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、益肝通氣、清肝明目等功效”[24]，桑葉營(yíng)養(yǎng)豐富、無毒副作用，可作為藥食兩用?，F(xiàn)已有不少研究證明，作為桑葉中主要活力成分的生物堿具有降糖、降脂等功能[19]，但其保肝作用鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以高脂飲食小鼠為考察對(duì)象，研究桑葉生物堿對(duì)高脂飲食引起肝功能異常的改善作用。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，ALT、AST釋放入血，濃度升高。研究發(fā)現(xiàn)，喂飼高脂飼料的同時(shí)灌胃桑葉生物堿，隨著灌胃劑量的增加和灌胃時(shí)間的延長(zhǎng)，桑葉生物堿能有效降低小鼠臟器系數(shù)，降低血漿中ALT、AST活力，維持肝功能正常，與肝臟病理切片結(jié)果一致。

當(dāng)長(zhǎng)期處于高脂飲食狀態(tài)下，機(jī)體內(nèi)脂肪含量的增多和脂肪細(xì)胞的分化，會(huì)產(chǎn)生一系列的細(xì)胞因子[26]。TNF-α是一種強(qiáng)有力的炎癥細(xì)胞因子，在許多炎性疾病和協(xié)調(diào)細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，因此TNF-α對(duì)于維護(hù)慢性炎癥至關(guān)重要[27-28]。而IL-10是由活化的免疫細(xì)胞產(chǎn)生的關(guān)鍵抗炎細(xì)胞因子，在控制和消除炎癥中起重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)桑葉生物堿能下調(diào)高脂飲食小鼠的促炎因子TNF-α mRNA表達(dá)，上調(diào)抗炎因子IL-10 mRNA表達(dá)，減少炎癥反應(yīng)。這可能與桑葉生物堿中的特征物質(zhì)1-脫氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，DNJ）有關(guān)。有研究表明DNJ可通過促進(jìn)血脂血糖的轉(zhuǎn)運(yùn)代謝來改善小鼠肝損傷[29-30]。此外，DNJ還能顯著降低ALT、AST水平，減輕肝組織大泡性脂肪變性，降低促炎因子TNF-α、IL-1、IL-6水平[31]。

細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)還可能引起肝細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步增加肝組織損傷[32-33]。Bcl-2家族蛋白是細(xì)胞凋亡、自吞噬等生命過程的重要調(diào)控因子，抗凋亡蛋白成員和促凋亡蛋白成員之間的協(xié)同作用共同決定細(xì)胞是否進(jìn)入凋亡程序[34-35]，其中Bcl-2抗細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一是拮抗促凋亡基因Bax。本研究發(fā)現(xiàn)灌胃桑葉生物堿可抑制高脂飲食小鼠肝細(xì)胞中促凋亡因子Bax mRNA表達(dá)，促進(jìn)Bcl-2 mRNA表達(dá)，減少細(xì)胞非正常凋亡。

綜上認(rèn)為，桑葉生物堿可改善高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝損傷，其機(jī)制可能與降低炎癥反應(yīng)和抗肝細(xì)胞凋亡有關(guān)。該研究結(jié)果有助于高脂飲食誘導(dǎo)肝損傷的預(yù)防和治療。