不同月份桔梗中桔梗皂苷D 含量的比較

張雪娟，張 欣，王小莉，劉慶華，郭海利，張小民

（1.山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太原030006；2.太原市食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原030006；3.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

桔梗（Platycodon grandiflorus（Jacq.）A.DC）為桔?？平酃俣嗄晟荼局参?，別名僧帽花、土人參、苦梗菜[1-2]。桔梗作為藥食同源的中藥材，兼具藥、食、觀3 種用途，其主要藥用價(jià)值有抗炎止痛、祛痰止咳、降血糖、血脂、抗肥胖及抑制腫瘤細(xì)胞增殖等功效[3-4]。桔梗資源在我國分布較廣[5-6]。隨著中藥栽培技術(shù)的發(fā)展與桔梗需求量的增多，全國各地藥圃也多見栽培[7]。桔梗根部藥用活性成分種類較多，桔梗皂苷為其主要活性成分，桔梗皂苷D 是桔梗的質(zhì)控對象[8-9]。研究表明，桔梗皂苷D 的含量受種植地區(qū)[10-12]、海拔高度[13]及采收期[14-15]的影響。桔梗皂苷D 含量的測定方法有很多[10-16]，但都圍繞2015 版《中國藥典》所記載的HPLC-ELSD 法展開。

本試驗(yàn)采用HPLC-ELSD 法測定了山西省盂縣種植的2 年生桔梗在3—10 月根中桔梗皂苷D的含量，旨在確定該地區(qū)桔梗資源質(zhì)量以及最佳采收時(shí)期。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為2018 年3—10 月下旬在山西省盂縣起耀中藥材種植專業(yè)合作社采集的桔梗根部，經(jīng)干燥后備用。桔梗皂苷D 標(biāo)準(zhǔn)品購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)；對照品桔梗購于藥店。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱為Kinetex C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；檢測波長為210 nm；柱溫為30 ℃；流速為0.5 mL/min；流動相為乙腈-水（體積比25∶75）。進(jìn)樣量為20 μL。

1.2.2 溶液配制

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制 精密稱定標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇配制得每1 mL 含0.5 g 對照品的溶液，過0.45 μm微孔濾膜備用。

1.2.2.2 供試品溶液配制 供試品粉末過850 μm篩，稱定1 g 置于錐形瓶中，加入CH3OH（50%，25 mL），進(jìn)行超聲處理（250 W，40 kHz，30 min），冷卻至20 ℃，稱質(zhì)量，50%CH3OH 補(bǔ)質(zhì)量，過濾，取續(xù)濾液，過0.45 μm 微孔濾膜備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 桔梗皂苷D 標(biāo)準(zhǔn)品HPLC 分析

取桔梗皂苷D 標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量濃度分別為5，10，20，25，50，100 μg/mL，在1.2.1 色譜條件下，測定不同質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)品的相對峰面積、相對保留時(shí)間，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在1.2.1 色譜條件下得桔梗皂苷D的HPLC 色譜圖。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以桔梗皂苷標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制桔梗皂苷D 標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸直線方程為：y＝3.214 8x－0.522（R2＝0.999 5）（圖1），標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖如圖2 所示。

2.3 精密度試驗(yàn)

取5 μg/mL 的桔梗皂苷D 對照品溶液20 μL，在1.2.1 色譜條件下，重復(fù)5 次，測定含量，計(jì)算RSD值。結(jié)果表明，測得峰面積的RSD 為1.65%（n＝5）＜3%，說明該儀器的精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取8 月采集的中藥桔梗供試樣品1 g，分別在0，2，4，6，8，12 h 檢測，檢測條件同1.2.1，測定含量，并計(jì)算各RSD 值。測得峰面積的RSD 為1.13%（n＝6）＜3%，表明待測樣品12 h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取5 份8 月采集的中藥桔梗供試樣品1 g，在1.2.1 條件下，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量20 μL，測定含量，計(jì)算RSD 值。測得其RSD 為1.23%（n＝5）＜3%，表明樣品的重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

取5 份8 月采集的中藥桔梗供試樣品1 g，加入1.25 mg 桔梗皂苷D 對照品，制備供試液，測定其含量。結(jié)果表明，平均回收率為89.40%，RSD 為0.69%（表1）。試驗(yàn)測定的桔梗中桔梗皂苷D 含量的加樣回收率符合要求。

表1 桔梗中桔梗皂苷D 回收率測定結(jié)果

2.7 樣品桔梗皂苷D 含量測定

不同月份采集的桔梗干燥根與購于藥店的中藥桔梗，以1.2.2.2 制備供試液，在1.2.1 條件下進(jìn)行桔梗皂苷D 含量測定。

由表2 可知，2 年生桔梗干燥根中桔梗皂苷D的含量波動范圍約為2.580～11.280 mg/g，其含量隨月份變化較為明顯。3—5 月，含量呈上升趨勢，5 月達(dá)到最高；6 月含量有所下降；7 月桔梗含量高于6 月；7—9 月，桔梗皂苷D 的含量呈平穩(wěn)下降趨勢；9，10 月含量穩(wěn)定在2.600 mg/g 上下。同時(shí)，試驗(yàn)樣品的桔梗皂苷D 含量明顯高于藥店桔梗。5，10 月桔梗根中桔梗皂苷D 含量色譜如圖3，4 所示。

表2 不同月份的桔梗根中桔梗皂苷D 的含量

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用HPLC-ELSD 的方法測定了桔梗中桔梗皂苷D 的含量，該法快速簡便，可準(zhǔn)確測量桔梗中桔梗皂苷D 的含量。宋健等[17]研究了1 年生、2 年生和3 年生桔梗在9，10，11 月根中桔梗皂苷D 含量的變化情況，結(jié)果表明，2 年生桔梗根中桔梗皂苷D 含量較高。本試驗(yàn)材料為2 年生桔梗，其桔梗皂苷D 的含量較高。許傳蓮等[15]利用HPLC 測定了吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)藥植園桔梗在4，5，9，10，11 月桔梗皂苷D 的含量，結(jié)果表明，9，10 月份含量較高。這與本試驗(yàn)結(jié)果存在差別，本試驗(yàn)材料在5 月份含量最高，9，10 月份含量變化趨于穩(wěn)定，原因可能是由于桔梗種植地區(qū)和海拔高度不同。

本研究表明，供試材料中桔梗皂苷D 的含量顯著高于藥店購買的中藥桔梗，說明該中藥材基地桔梗質(zhì)量較好，可用于大量開發(fā)。同時(shí)該地2 年生桔梗在5 月桔梗皂苷D 的含量最高，故為該地區(qū)2 年生桔梗進(jìn)行春收提供了理論依據(jù)。9，10 月桔梗皂苷D 含量變化趨于穩(wěn)定。該地區(qū)桔梗5 月采收質(zhì)量最佳，考慮到采收桔梗種子，故留部分桔梗于9 月份采收為宜。