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    五味接骨膠囊對(duì)昆明種小鼠毒性的觀察

    2019-10-25 08:24:10王彥坤
    中國(guó)合理用藥探索 2019年9期
    關(guān)鍵詞:馬錢(qián)子灌胃炮制

    王彥坤

    (河南省通許縣人民醫(yī)院,河南 通許 475400)

    五味接骨膠囊是我院制劑室研制的一種中藥制劑,主要成分有馬錢(qián)子、自然銅、地龍、枳殼、雞蛋殼,具有散瘀止痛、接續(xù)筋骨的作用,用于治療跌打損傷、骨折等。五味接骨膠囊中含有馬錢(qián)子(有大毒),為保證臨床用藥安全,我們?cè)诤幽洗髮W(xué)藥物研究所作了急性毒性試驗(yàn),以急性毒性研究技術(shù)為指導(dǎo)原則[1],觀察昆明種小鼠灌胃(ig)給予五味按骨膠囊后的毒性反應(yīng)及嚴(yán)重程度。

    1 材料與方法

    1.1 藥材與藥品

    1.1.1 藥材處方馬錢(qián)子[制],自然銅[制]、地龍、枳殼、雞蛋殼組成,藥材來(lái)源河南禹州市供應(yīng)站,經(jīng)鑒定符合《中國(guó)藥典》一部收載藥材,并對(duì)馬錢(qián)子、自然銅依據(jù)《中藥炮制大全》[2]進(jìn)行炮制,雞蛋殼自制,經(jīng)洗、挑、揀,除去皮洗凈即得。

    1.1.2藥品將五味藥材混合均勻,粉碎成80目,裝入0號(hào)膠囊制成五味制劑膠囊,80粒/瓶,每粒0.45 g。本次實(shí)驗(yàn)使用藥品(河南省通許縣人民醫(yī)院制劑室提供,批號(hào):20140211)。

    1.2 試驗(yàn)材料

    1.2.1 動(dòng)物動(dòng)物為昆明種小鼠(由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):4100115),體質(zhì)量18~22 g,雌雄各半,在實(shí)驗(yàn)觀察1 w后,隨機(jī)分組?;A(chǔ)飼料由河南省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼料廠提供,為全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。

    1.2.2 實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)室溫度:(23±3)℃,濕度:(55±10)%,自然光明7:00~19:00,自由飲水(常用自來(lái)水),定量投食,換氣頻率10~15次/h,籠具平均更換1次/3 d,更換后消毒,籠底墊料為刨花木屑,晾曬后消毒使用。

    1.3 藥物與試劑

    將膠囊內(nèi)藥物4.05 g加入0.5%的羧甲基纖維納(CMC-Na溶液,上?;瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站,批號(hào):710419)中制成濃度為0.405 g/mL混懸藥液備用。

    1.4 實(shí)驗(yàn)與分組

    1.4.1 預(yù)試驗(yàn)分組取小鼠20只,隨機(jī)分為5組,每組4只,雌雄各半。第1組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10 g,4只小鼠均死亡;第2組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g,3只小鼠死亡。取濃度0.405 g/mL混懸藥液5mL稀釋成0.135 g/mL,備用。第3組小鼠灌胃溶積0.2 mL/10g,1只小鼠死亡;第4組小鼠灌胃溶積0.18 mL/10 g,無(wú)小鼠死亡;第5組小鼠灌胃溶積0.19 mL/10 g,1只小鼠死亡。故4/4死亡最小劑量為8.1 g/kg;0/4死亡最大劑量為243 g/kg。

    1.4.2 試驗(yàn)分組取小鼠160只,體質(zhì)量18~22 g,隨機(jī)分為8組,每組20只,雌雄各半。試驗(yàn)前禁食12h,自由飲水。第1~7組為五味接骨膠囊組,相鄰高、低組給藥劑量比值為1∶0.8,則各組給藥劑量分別為:8.1 g/kg、6.48 g/kg、5.184 g/kg、4.1472 g/kg、3.3178 g/kg、2.6542 g/kg、2.1234 g/kg。第8組為0.5%的CMC-Na溶液對(duì)照組。各小鼠灌胃溶積為0.2 mL/10 g。采用低比稀釋法配藥:根據(jù)預(yù)試結(jié)果,小鼠全死劑量Dmas=8.1 g/kg、k=0.8、n=20,小鼠體質(zhì)量為18~22 g,每組20只,總體質(zhì)量約為400 g,用藥量為0.2 mL/10g(20 mL/kg)。

    1號(hào)藥液濃度=Dmax/用藥量=8.1 g/kg/20 mL/kg=0.405 g/mL。

    每組藥液量=每組小鼠總體質(zhì)量×用藥量=400 g×20 mL/kg=8 mL(最少8 mL,為配藥方便并留有余地,取10 mL)。

    1號(hào)藥液量=每組藥液量/(1-k)=10/(1-0.8)mL=50 mL。

    精確配制濃度為0.405 g/mL混懸藥液50 mL,從中吸取10 mL為1號(hào)液供第1組用藥。在余下的40 mL藥液中加入0.5%的CMCNa溶液10 mL,混勻后,從中吸取10 mL為2號(hào)液,供第2組用藥。依此類(lèi)推,配制出一系列比值為1∶0.8的藥液。

    1.5 觀察指標(biāo)

    包括一般指標(biāo)(如動(dòng)物外觀、行為、分泌物、排泄物等);死亡情況(死亡時(shí)間、死亡時(shí)反應(yīng)等)。大體解剖所有小鼠,器官出現(xiàn)異常時(shí)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用改良寇氏法計(jì)算LD50:

    注:Xmax為最大劑量的對(duì)數(shù)值,∑P為各組小鼠死亡率總和,i為相鄰兩組劑量的對(duì)數(shù)之差。

    注:Sx50為L(zhǎng)D50的標(biāo)準(zhǔn)差,n為各組小鼠數(shù),∑P為各組小鼠死亡率總和,∑P2為各組小鼠死亡率平方的總和,i為相鄰兩組劑量的對(duì)數(shù)之差。

    LD50的95%平均可信限=LD50士4.5LD50Sx50。

    2 結(jié)果

    2.1 一般指標(biāo)

    用藥后1~7組小鼠均出現(xiàn)明顯鎮(zhèn)靜、閉目等中樞抑制現(xiàn)象,表現(xiàn)為自主活動(dòng)減少;皮毛、清潔度、兩便均無(wú)異常;瞳孔、眼險(xiǎn)、分泌物均正常,未見(jiàn)流淚、流涎等現(xiàn)象。對(duì)照組小鼠均未出現(xiàn)明顯興奮躁動(dòng)、豎尾等興奮現(xiàn)象;皮毛、清潔度、兩便均無(wú)異常;瞳孔、眼險(xiǎn)、分泌物均正常,未見(jiàn)流淚、流涎等現(xiàn)象。

    2.2 死亡情況

    1~7組小鼠均出現(xiàn)死亡,死亡時(shí)間為灌胃后30~85 min。死亡前均出現(xiàn)明顯的興奮不安,逐漸轉(zhuǎn)為精神萎磨不振,并出現(xiàn)四肢強(qiáng)直性痙攣。對(duì)照組無(wú)小鼠死亡。各組死亡情況見(jiàn)表1。

    2.3 計(jì)算結(jié)果

    按改良冠氏法計(jì)算:

    LD50的95%平均可信限=LD50±4.5×LD50×SX50= 3.8361±4.5×3.8361×0.02318=3.8361±0.4001

    2.4 臟器

    各小鼠于給藥后第14天處死解剖,各器官體積、顏色、紋理均正常。

    表1 1~7組小鼠死亡情況

    3 討論

    五味接骨膠囊中馬錢(qián)子為馬錢(qián)子科植物馬錢(qián)子(Strychnos nux-vomicaL)或云南馬錢(qián)子(S.PierrianaA .W.Hill)的干燥成熟種子,味苦、寒、有大毒,歸肝、脾經(jīng),且有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫,用于風(fēng)濕頑痹、麻木癱瘓、跌打損傷、面神經(jīng)麻痹、坐骨神經(jīng)痛等。馬錢(qián)子雖有大毒,卻臨床療效顯著,應(yīng)用千年而不衰,被稱(chēng)為“毒藥猛劑,善起沉疴”的典范。藥以用量而能,藥以用量而用[3],馬錢(qián)子用量范圍為0.3~0.6 g。馬錢(qián)子含總生物堿2%~5%,主要為番木鱉(士的寧)及馬錢(qián)子堿,番木鱉堿約占總生物堿45%左右,是主要的有毒成分。為減少馬錢(qián)子的毒性,使用之前常需炮制。一般炮制方法為砂炒,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),砂炒馬錢(qián)子因砂燙時(shí)受熱程度不同,番木鱉堿的含量亦不同,當(dāng)溫度達(dá)到210℃以上,該堿的含量降低,溫度達(dá)290℃時(shí),顏色變成褐色,番木鱉堿含量持續(xù)降低,但治療效果也大大降低[4]。為防止番木鱉堿受熱過(guò)分分解,砂燙溫度應(yīng)控制在220℃~240℃,5~6 min即可,顏色一般以棕色至棕褐色為度[5]。我院炮制馬錢(qián)子合格,用量適宜,為臨床用藥安全,特對(duì)五味接骨膠囊進(jìn)行小鼠灌胃[ig]毒性試驗(yàn),結(jié)果顯示,五味接骨膠囊LD50為3.8361(灌胃),相當(dāng)于臨床用量的56.83倍,提示五味接骨膠囊具有一定的毒性,但毒性較低,對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及嚴(yán)重程度較低,臨床用藥安全。

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